邵敏
- 作品数：40 被引量：122H指数：6
- 供职机构：遵义医学院珠海校区生物工程系更多>>
- 发文基金：贵州省科技厅社会发展攻关项目贵州省卫生厅优秀医学青年科技人才基金贵州省省长基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 人蔗糖酶卵黄抗体三种不同提取方法的比较
- 2016年
- 目的应用三种不同方法分离提取特异性抗人蔗糖酶卵黄抗体,比较总蛋白浓度、蛋白纯度及生物活性。方法以人蔗糖酶蛋白作为抗原免疫蛋鸡,分别采用硫酸钠水提取法、聚乙二醇法和冷乙醇法分离提取卵黄抗体,BCA法测定总蛋白质含量;聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测抗体纯度;间接酶联免疫吸附测定法检测抗体效价。结果经典的硫酸钠水提取法相对其他两种方法提取的卵黄抗体在总蛋白含量和纯度都较高,杂带相应较少,聚乙二醇法提取的抗体效价较低,硫酸钠水提取法和冷乙醇法提取的抗体效价基本没有区别。结论三种提取方法中,硫酸钠水提取法操作简单、纯度较高、对蛋白影响较小,为后续有效分离提取卵黄抗体打下实验基础。
- 邵敏王新颖杜凤霞冯昆田忠周鹤峰
- 关键词：蔗糖酶卵黄抗体生物活性
- 人白介素12亚基p40和p35基因串联在毕赤酵母中的表达及表达产物活性分析
- 2008年
- 利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导,hscIL-12在酵母中获得分泌表达,表达产物经Western blot检测,显示该蛋白相对分子质量为70kDa,可与鼠抗人IL-12单克隆抗体特异性结合;定量分析结果表明,重组酵母培养上清中hscIL-12约占总蛋白的26%,表达量约为60mg/L;生物学活性实验表明,重组蛋白能促进人外周血淋巴细胞增殖。为利用rhscIL-12进行基因治疗奠定了基础。
- 周鹤峰邵敏孙伟刘银花李官成葛正龙
- 关键词：人白细胞介素12毕赤酵母活性分析
- 临床医学专业生物化学的教学实践与体会
- 2015年
- 生物化学作为临床医学专业的一门专业基础课程,其内容抽象繁杂、知识更新速度较快、结构式和代谢通路多,难理解,难记忆,学习难度大,为了提高教学质量,调动学生学习的积极性和主动性,在教材选择、教学内容、学习方法、教学方法等方面谈谈在多年教学工作中的几点体会。
- 邵敏高书颖杨愈丰王燕吕延成钟世军
- 关键词：生物化学教学
- 根癌农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化条件的研究被引量：16
- 2008年
- 以马铃薯茎段作为受体转化材料,通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,对影响马铃薯遗传转化的多种因素(抗生素质量浓度、农杆菌质量浓度、共培养时间等)进行研究.结果表明,卡那霉素(kanamycin,Kan)梯度在抗性愈伤组织诱导、芽分化过程中以100 mg.L-1为宜,但在生根过程中以50 mg.L-1为宜,菌液质量浓度以OD600为0.5,共培养时间为3 d,抑菌剂的选择以羧苄霉素(carbenicillin,Cb)更适合.对转基因植株进行PCR检测表明,目的基因已整合到马铃薯基因组中.
- 周鹤峰邵敏葛正龙
- 关键词：马铃薯根癌农杆菌茎段
- 硕士研究生分子生物学实验技术教学改革初探被引量：2
- 2012年
- 为提高硕士研究生分子生物学实验技术的教学质量,在教学内容的选择、教学方法的改进、实验设施的分配与利用、考核体制的建立等方面进行改革,取得了较好效果,为研究生今后的科学研究和实际应用奠定基础。
- 邵敏王燕吕延成钟世军牛宪立
- 关键词：分子生物学实验教学教学改革硕士研究生
- 阪崎肠杆菌胶体金试纸条的制备及初步应用被引量：6
- 2013年
- 制备阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,ES)胶体金快速检测试纸并对其性能进行评价。通过柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记抗阪崎肠杆菌特异性的单克隆抗体,采用双抗夹心法,将标记的胶体金复合物喷涂于试纸的结合垫,另一单抗和二抗(羊抗鼠IgG抗体)分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)和控制线(C)上,制备出检测阪崎肠杆菌胶体金试纸条,进行敏感性、特异性、稳定性、重复性试验,借助于简单的增菌过程,在6 h内即可检测出样品中阪崎肠杆菌的含量,灵敏度达到1×104CFU/mL,与常见的食源性致病菌无交叉反应。结果显示该试纸具有简单、灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于ES的检测。
- 周鹤峰邵敏李长福葛正龙
- 关键词：阪崎肠杆菌单克隆抗体胶体金
- 人蔗糖酶蛋白在大肠杆菌的诱导表达与纯化被引量：3
- 2015年
- 目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果克隆得到1482 bp目的基因,酶切和测序证实h SUC基因片段成功插入到p ET-28a(+)表达载体。表达的融合蛋白质相对分子质量(Mr)为61 240,Western blot结果显示融合蛋白可以与h SUC抗体特异性结合。结论成功在大肠杆菌中表达和纯化h SUC融合蛋白。
- 邵敏王新颖张青峰牛宪立王燕周鹤峰葛正龙
- 关键词：蔗糖酶Α-葡萄糖苷酶大肠杆菌蛋白纯化
- 甘肃本地产当归、黄芪和大黄的rDNA ITS序列分析被引量：7
- 2010年
- 本研究采用改良CTAB法分别提取18份甘肃本地产当归、黄芪和大黄基因组DNA,并用PCR分别扩增其ITS1-5.8S-ITS2序列、直接测序并作序列同源性比对分析。双向测序分析结果表明,甘肃6个不同产地当归rDNA的ITS1、5.8S和ITS2序列一致,片段长度分别为215bp、162bp和223bp;供试的黄芪ITS1、5.8S和ITS2序列分别为228bp、164bp和210bp;大黄ITS1、5.8S和ITS2序列分别为160bp、159bp和164bp。供试材料的ITS1-5.8S-ITS2核苷酸序列已提交GenBank。本研究为提供甘肃当归、黄芪和大黄指纹图谱鉴别的分子标记、其道地性药材的分子鉴定和品质评价提供参考。
- 周鹤峰邵敏姬可平李啸红李应东晋玲
- 关键词：当归ITS序列
- 人α防御素2真核表达载体的构建及表达
- 2014年
- 目的:构建人α防御素2(α-HNP2)真核表达载体pc DNA3.1/myc-His(+)/α-HNP2,并实现其在CHO细胞中的表达,初步鉴定表达蛋白的抑菌活性。方法:以PBMC细胞总RNA为模板,利用RT-PCR法,扩增得到α-HNP2基因,构建真核表达载体pc DNA3.1/myc-His(+)/α-HNP2,脂质体法转染CHO细胞,G418筛选稳定表达的阳性克隆。用RT-PCR和Western blot检测α-HNP2蛋白的表达,同时检测表达产物的抑菌活性。结果:经PCR、酶切和DNA测序分析表明重组载体构建成功,并在CHO细胞中表达融合蛋白,琼脂平板扩散实验结果表明融合蛋白在大肠杆菌平板上形成明显抑菌圈。结论:CHO细胞中表达有活性的融合蛋白α-HNP2,为进一步的实验研究奠定了基础。
- 邵敏余晓刘星葛正龙王燕周鹤峰
- 关键词：防御素CHO融合蛋白基因表达
- hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定被引量：2
- 2016年
- 目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础。方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中,构建重组载体pET-28a(+)-hISO。经PCR、酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE电泳、Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定。结果:经PCR、酶切及测序鉴定后,重组质粒pET-28a(+)-hISO构建正确,表达重组蛋白相对分子质量为68 860,将融合蛋白进行纯化,经40和60mmol·L-1咪唑缓冲液洗脱后能够得到浓度和纯度相对较高的蛋白。结论:成功地构建了hISO基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了融合蛋白表达。
- 邵敏王新颖刘星王燕周鹤峰葛正龙
- 关键词：原核表达Α-葡萄糖苷酶大肠杆菌
