陈奇
- 作品数：12 被引量：24H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 我国野生动物狂犬病流行与病毒特征
- 自2008年至2012年，本实验室采集来自浙江和江西等鼬獾狂犬病报道较多地区的鼬獾脑组织1650份，分离获得狂犬病病毒38株。对全部毒株的糖蛋白和核蛋白基因及部分毒株的全基因组进行了序列测定及系统发生分析，并对主要结构蛋...
- 张守峰赵敬慧刘晔陈奇张菲扈荣良
- 关键词：狂犬病流行病学病毒感染野生动物
- 文献传递
- 狂犬病病毒SRV9株糖蛋白333位氨基酸变异对其免疫原性的影响
- 2012年
- 目的探讨狂犬病病毒(Rabies virus,RV)SRV9株糖蛋白(G)333位丝氨酸(S)分别突变为精氨酸(R)和谷氨酸(E)后,对其免疫原性的影响。方法采用RT-PCR法扩增RV SRV9株G蛋白基因,经测序鉴定正确后,通过PCR将编码糖蛋白333位丝氨酸的核苷酸分别突变为编码精氨酸和谷氨酸的核苷酸,并分别构建复制缺陷型重组人5型腺病毒rAd5-SRV9-G333E、rAd5-SRV9-G333S和rAd5-SRV9-G333R,经形态学观察、RT-PCR检测及直接免疫荧光试验鉴定重组腺病毒,并免疫小鼠,检测小鼠中和抗体水平及阳转率,评价3种重组腺病毒免疫原性的差异。结果 SRV9株G蛋白基因及其突变体经测序鉴定正确;制备的重组腺病毒镜下可见典型的腺病毒外形特征,感染HEK293AD细胞后出现明显的细胞病变;RT-PCR及直接免疫荧光试验结果显示,3种重组腺病毒在HEK293AD细胞中均已成功表达;rAd5-SRV9-G333E诱导小鼠产生的中和抗体效价和阳转率均明显高于rAd5-SRV9-G333S(P<0.05)。结论 RV SRV9株糖蛋白333位丝氨酸突变为谷氨酸后,可显著增强其免疫原性。
- 孙程龙杨洋王颖宫婷刘祥义陈奇王景龙刘晔张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白氨基酸免疫原性
- 从流行毒株的系统发生看中国目前狂犬病流行的主要特征被引量：8
- 2012年
- 以2006~2012年本实验室狂犬病病毒分离株核蛋白基因完整核苷酸序列和GenBank收录的主要数据为基础,通过构建系统发生树和比对病毒分离株相互间的同源性,对中国狂犬病流行特征进行分析。结果显示,目前涉及中国17个狂犬病主要流行省区的62个狂犬病病毒代表流行株,均为基因1型,但在系统发生树上可分为i、ii、iii、iv、v共5个基因群,群内同源性91.4%~99.9%,群间同源性84.5%~90.1%。其中,i、ii群占国内新分离株的绝大多数,为2个主要流行基因群。i群遍布各主要流行省区,主要为来源于犬的分离株。ii群主要分布于南方省区,迄今分离到的多个鼬獾狂犬病病毒株在系统发生上也属于ii群。iii群仅见于广西壮族自治区、云南省两地,与东南亚国家狂犬病分离株同源性高达97.7%。iv群的地区分布不规律,在中国东北、中原、东南和西部地区均有零星报道,分离株较少。v群近年来仅偶见于内蒙东北部及黑龙江省与俄接壤地区,与俄罗斯远东及韩国流行株同源性高达98.5%。综上,中国狂犬病流行以犬间传播为主,野生动物狂犬病的流行日益严重,东北和西南地区存在境外狂犬病传入。犬等动物种群免疫覆盖率低应是狂犬病持续传播的主因。
- 张守峰刘晔赵敬慧张菲陈奇王颖张锦霞扈荣良
- 关键词：狂犬病流行病学
- 表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组复制缺陷型人5型腺病毒的构建及小鼠免疫试验被引量：3
- 2013年
- 构建表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组复制缺陷型人5型腺病毒,评价其对小鼠免疫效果。本研究将编码PCV2Cap蛋白的ORF2克隆到腺病毒表达系统穿梭质粒,构建了重组穿梭质粒pacAd5CMV-Cap。将被限制性内切酶PacI线性化后的骨架质粒和重组穿梭质粒共转染HEK293AD细胞,两者在真核细胞内同源重组并包装出携带PCV2-Cap基因的复制缺陷型重组人5型腺病毒,命名为rAd5-Cap;以同样方法重组获得了不含任何靶基因的野生型重组腺病毒wt-rAd5。病毒增殖稳定后,rAd5-Cap与wt-rAd5滴度可达到108.5 TCID50/mL左右;一步增殖实验证明,相对于wt-rAd5,rAd5-Cap中Cap基因的引入几乎没有给重组腺病毒增殖造成影响。RT-PCR和间接免疫荧光实验显示,rAd5-Cap能够有效介导PCV2Cap蛋白在真核细胞HEK293AD细胞中表达。以107 TCID50的rAd5-Cap肌肉注射接种小鼠,14d后小鼠血清中产生可检测水平的针对Cap蛋白的体液免疫应答,并且至少在免疫后28d之前抗体水平持续加强。对重组腺病毒的分子生物学鉴定和在小鼠上的初步免疫试验结果表明,重组腺病毒rAd5-Cap可介导Cap蛋白在真核细胞中的表达,并且表达的靶蛋白具有较好的免疫原性,为进一步将其开发成新型PCV2疫苗奠定了基础。
- 宫婷张守峰刘晔孙程龙杨洋陈奇钱方刘博浩扈荣良
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白重组腺病毒免疫原性分析
- 鲤鱼春季病毒出血症病毒G基因在昆虫细胞中的表达与鉴定
- 2012年
- 采用RT-PCR方法扩增鲤鱼春季病毒出血症病毒(SVCV)的糖蛋白(G)基因,将PCR产物插入到杆状病毒转移载体pFastBac 1中,获得重组转移载体pFastBac 1-G,将其转化入含有Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,经3种抗性和蓝白斑筛选,获得含有G基因的重组穿梭质粒rBacmid-G。在脂质体转染试剂的介导下,将rBacmid-G转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。提取重组杆状病毒基因组,用M13引物PCR鉴定。对重组杆状病毒感染的sf9细胞,通过电镜观察、SDS-PAGE、Western blotting进行检测,结果表明,重组蛋白在sf9细胞中获得正确表达,相对分子质量约58 000,与鼠抗SVCV阳性血清具有良好的反应原性。本试验为研究鲤鱼春季病毒出血症病毒G蛋白的生物学活性和亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 李月红付云红陈奇王永志扈荣良
- 关键词：G基因杆状病毒表达
- 狂犬病病毒不同毒株糖蛋白免疫原性的比较研究被引量：3
- 2016年
- 我们之前研究发现,狂犬病病毒(RABV)BD06株与SRV9株糖蛋白的免疫原性存在明显差异。为进一步探究其他不同毒株RABV糖蛋白的免疫原性,利用来源于5种狂犬病病毒株的糖蛋白基因分别构建了以杆状病毒为载体的重组病毒Ac-BD06-G、Ac-CVS-11-G、Ac-Flury-LEP-G、Ac-ERA-G、Ac-SRV9-G,并用其表达的等量糖蛋白分别免疫小鼠,之后进行中和抗体水平测定和脑内攻毒保护试验。结果发现,一定量的不同毒株RABV糖蛋白诱导小鼠产生的VNA水平存在差异,由高到低依次为Ac-Flury-LEP-G、Ac-CVS-11-G、Ac-BD06-G、Ac-ERA-G、Ac-SRV9-G。此外,针对标准毒CVS-24脑内攻毒,不同毒株糖蛋白提供的保护率也存在差异,在Ac-Flury-LEP-G、Ac-CVS-11-G、Ac-BD06-G均为100%,而在Ac-ERA-G仅为6.7%,在Ac-SRV9-G则为0。结果显示,重组糖蛋白的免疫原性和保护性与其来源毒株本身的毒力强弱不存在线性关系,与攻击毒株之间核苷酸同源性的高低也没有直接关系。但总的来说,强毒株糖蛋白重组杆状病毒的免疫原性均明显好于弱毒株,并能提供更好的攻毒保护效果。据此推测,强毒糖蛋白基因更适合作为重组疫苗候选基因。本研究结果为RABV亚单位疫苗或者重组活载体疫苗研究过程中目的基因的选择提供了一定的参考和理论依据。
- 陈腾张锦霞张静远陈奇张菲米丽娟张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒免疫原性
- 两株狂犬病病毒糖蛋白的杆状病毒表达及其免疫原性研究
- 狂犬病是指由狂犬病病毒（rabies virus,RV）感染动物机体而引起的一种以脑脊髓炎为主要病理特征，以神经症状为主要临床表现的人兽共患传染病。古埃及时代该传染病就已经开始流行，直到2012年，全球范围内仍有90多个...
- 陈奇
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒免疫原性
- 文献传递
- 犬细小病毒VP2蛋白重组人5型腺病毒的构建被引量：1
- 2013年
- 目的构建犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)VP2蛋白重组人5型腺病毒。方法将从CPV中PCR扩增的VP2基因克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA中,经酶切及测序鉴定,将构建正确的重组穿梭质粒pacAd5-cVP2与骨架质粒pacAd5 9.2-100经PacⅠ酶切线性化,共转染293AD细胞,进行同源重组,包装出重组腺病毒rAd5v-cVP2,按Karber法计算重组腺病毒的病毒滴度(TCID50)。电镜下观察重组腺病毒的形态;RT-PCR及Western blot法检测CPV VP2基因mRNA的转录及蛋白的表达水平。结果重组穿梭质粒pacAd5-cVP2经酶切及测序证明构建正确;包装出的重组腺病毒rAd5v-cVP2的病毒滴度可稳定在108.25TCID50/ml;电镜下观察可见典型的腺病毒外型特征;重组腺病毒感染的293AD细胞可检测到VP2基因的转录和表达。结论已成功构建了CPV VP2蛋白重组人5型腺病毒。
- 杨洋宫婷米立娟赵敬慧陈奇钱方刘晔张守峰扈荣良
- 关键词：VP2基因
- 狂犬病病毒糖蛋白的杆状病毒表达及其免疫原性研究被引量：5
- 2012年
- 构建表达狂犬病病毒SRV9株糖蛋白(GP)的重组杆状病毒,评价其表达出的SRV9株糖蛋白对小鼠免疫效果。将狂犬病病毒SRV9株GP基因的完整开放阅读框克隆入穿梭质粒Bacmid中,构建重组穿梭质粒Bacmid-G,以此转染Sf9细胞。对病变细胞培养物进行电镜观察,获得正确重组杆状病毒后,通过Western-blot、IFA及小鼠免疫实验鉴定表达产物的免疫反应性及免疫原性。正确构建重组穿梭质粒Bacmid-G;获得表达SRV9株糖蛋白的重组杆状病毒,其表达产物具有良好免疫原性;表达产物接种小鼠可诱导其产生抗狂犬病病毒中和抗体,中和抗体达到保护水平的比例为100%。本实验所获得的重组杆状病毒表达出的SRV9株糖蛋白具有较好的免疫原性,可诱导小鼠产生保护性中和抗体,该实验为进一步开发狂犬病亚单位疫苗奠定了基础。
- 陈奇张守峰刘晔付云红孙程龙杨洋宫婷宋菲菲扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒免疫
- 一种高免疫原性狂犬病毒糖蛋白及其制备方法与应用
- 本发明公开一种高免疫原性狂犬病毒糖蛋白及其制备方法与应用，以人工合成方式获得包含全部优势中和抗原表位并经密码子优化的狂犬病毒糖蛋白基因，再以重组腺病毒、重组杆状病毒或慢病毒为表达载体，在哺乳动物细胞系、昆虫细胞系或家蚕表...
- 张守峰扈荣良刘晔王颖陈奇张菲
- 文献传递
