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濒危南药白木香悬浮细胞体系的建立被引量：3: 2014年; 以白木香（Aquilaria sinensis）茎尖为材料,利用诱导形成的愈伤组织构建悬浮细胞体系。结果表明,诱导愈伤组织最适培养基为MS＋2.0 mg·L^-1 NAA＋1.0 mg·L^-1 6-BA;经12次继代培养的愈伤组织生长旺盛、质地疏松适于悬浮培养;将其置于液体培养基MS＋2.0 mg·L^-1 NAA＋1.0 mg·L^-1 6-BA＋500.0 mg·L^-1 CH中震荡培养,建成悬浮细胞体系。悬浮细胞生长曲线呈S型,初期增长缓慢,4~6天为对数增长期,7~12天进入平台期,12天以后细胞生长速度及活力迅速下降;GC-MS结果显示,培养0、3、6、9、12天悬浮细胞不含沉香倍半萜,使用100μmol·L^-1 MeJA处理24 h可检测到倍半萜。本实验构建的白木香悬浮细胞体系均一稳定、细胞活力良好,可作为研究伤害诱导白木香形成倍半萜的离体体系,同时也具备离体生产沉香倍半萜的潜力。; 刘娟韩晓敏梁良刘庆昌徐艳红杨成民张争孙晶魏建和; 关键词：白木香愈伤组织悬浮细胞培养

白木香乙酰乙酰基辅酶A硫解酶基因(AsAACT)的克隆与表达分析被引量：9: 2014年; 目的:对国产沉香的基原植物白木香Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-CoA C-acetyl transferase,AACT)基因AsAACT全长进行克隆并展开生物信息学分析和表达分析,为解析沉香萜类次生代谢产物的生物合成机制奠定基础。方法:根据获得的白木香转录组数据库AACT部分转录本序列设计引物,采用RT-PCR及RACE技术,以白木香茎cDNA为模板,克隆获得AsAACT全长,进行生物信息学分析;采用荧光定量PCR,以GADPH为内参,分析白木香愈伤组织受不同伤害胁迫AsAACT的表达模式。结果:AsAACT开放阅读框(opening reading frame,ORF)为1 236 bp,编码411个氨基酸残基,酶命名为AsAACT;白木香愈伤受物理伤害(切割)后表达量没有明显变化,但受化学伤害(MeJA)后4 h表达量升高了5.5倍,说明该基因对MeJA诱导的化学伤害较敏感,且能够在早期响应伤害胁迫。结论:通过AsAACT基因的全长cDNA克隆和表达特性分析,为后续深入研究其在沉香倍半萜合成途径的功能奠定基础。; 刘娟徐艳红杨勇梁良韩晓敏高志晖张争杨云魏建和; 关键词：白木香

北京、河北地区荆芥挥发油的GC特征图谱被引量：6: 2015年; 目的建立北京、河北地区不同品种荆芥挥发油的GC特征图谱。方法 GC-FID法测定挥发油的乙酸乙酯萃取液,并对其进行相似度评价、聚类和主成分分析。结果 40批荆芥样品的GC特征图谱中有10个共有峰,通过欧式距离可归为4类,即中荆1号、中荆2号、安国荆芥和玉田荆芥。结论该图谱能可靠地鉴定荆芥的品种,可用于其质量控制。; 赵立子金钺韩晓敏褚庆龙魏建和; 关键词：荆芥挥发油 GC

珍稀濒危南药沉香主要成分检测方法研究: 沉香是沉香属植物含树脂的心材，具行气止痛、温中止呕、纳气平喘的功效。健康的白木香不产生沉香，只有在受到外界伤害等胁迫时会产生沉香，但是其机理尚不明确。沉香中的主要化学成分为挥发油类及部分非挥发性成分。其中，挥发油的主要组...; 韩晓敏; 关键词：色酮 HPLC GC-MS SPME

白木香倍半萜合酶基因AsSS4的克隆、原核表达与功能鉴定被引量：3: 2014年; 通过RT-PCR方法从伤害处理的白木香树木质部中克隆得到沉香倍半萜合酶4(sesquiterpene synthase 4,As SS4)基因的全长开放读码框,该基因全长读码框为1 698 bp,编码包含565个氨基酸的蛋白质。将As SS4基因与原核表达载体p ET28a相连构建重组载体p ET28a-As SS4,把重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S中,用IPTG诱导重组菌,经SDS-PAGE电泳分析,获得分子质量约为64 k D的重组As SS4蛋白。利用镍凝胶亲和色谱法获得纯度较高的As SS4蛋白,以法尼基焦磷酸(FPP)为底物进行蛋白酶促反应,共催化产生5种倍半萜类成分:cyclohexane,1-ethenyl-1-methyl-2,4-bis(1-methylethenyl)-、β-elemene、α-guaiene、α-caryophyllene和δ-guaiene。本研究首次证实了白木香倍半萜合酶As SS4基因的功能,为揭示伤害诱导沉香倍半萜形成的分子机制奠定了理论基础。; 梁良郭庆梅张争徐艳红韩晓敏刘娟; 关键词：白木香原核表达基因功能

可可毛色二孢菌对白木香产生倍半萜诱导作用被引量：16: 2014年; 为了明确可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae对白木香产生倍半萜的诱导作用。采用气质联用(GC-MS)对可可毛色二孢菌PDA发酵液进行检测,发酵液中检测到茉莉酸类化合物(jasmonates,JAs)。利用固相微萃取-气质联用(SPME-GC-MS)检测发酵液处理后白木香愈伤中沉香倍半萜成分,发现其能够诱导白木香愈伤产生α-愈创木烯(α-guaiene),δ-愈创木烯(δ-guaiene),α-蛇麻烯(α-humulene)3种沉香倍半萜。推测可可毛色二孢菌可产生茉莉酸类物质,其作为伤害信号分子诱导白木香产生倍半萜。; 韩晓敏梁良张争李秀锦杨云孟慧高志晖徐艳红; 关键词：茉莉酸类物质白木香

白木香茎中内源茉莉酸类和倍半萜类物质对机械伤害的响应被引量：15: 2013年; 为揭示伤害信号——茉莉酸类(JAs)对倍半萜可能的调控作用,以 3 年生白木香[Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg]树苗为试材进行机械伤害和外施茉莉酸甲酯(MeJA)处理,测定其茎中内源 JAs和倍半萜含量。结果表明,机械伤害处理 1 h 后,内源 JAs 含量显著增加,随后迅速下降;伤害处理 24 h后又有小幅升高。伤害处理诱导白木香产生 3 种倍半萜(δ–愈创木烯、α–愈创木烯和α–葎草烯)且含量随着伤害时间延长而增多。外源 MeJA 处理也能够诱导产生相同种类的倍半萜且诱导强度大于伤害处理。伤害早期(1 h)内源 JAs 含量升高和伤害后期(48 h)倍半萜含量增多是植物启动相应的防御反应和抵御伤害胁迫的重要机制。; 张争杨云魏建和孟慧汪孟曦韩晓敏隋春; 关键词：白木香茉莉酸类机械伤害

白木香肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)基因的克隆及表达分析被引量：10: 2014年; 对国产沉香的基原植物白木香Aquilaria sinensis肉桂酸-4-羟基化酶基因C4H编码区进行克隆,并对其进行生物信息学分析和表达分析。根据已报道的白木香伤害转录组高通量测序结果分析获得1条具有肉桂酸羟化酶酶保守结构域的C4H基因序列,采用RT-PCR技术克隆得到白木香C4H基因编码区序列,并对C4H蛋白进行生物信息学分析。另外,采用qRT-PCR方法对C4H基因在伤害胁迫下的表达模式进行分析。序列分析表明,所克隆的C4H基因编码区开放阅读框(opening reading frame,ORF)长为1 515 bp,编码514个氨基酸,GenBank登录号为KF134783。qRT-PCR实验证明C4H基因受不同伤害处理的诱导,分别在8,20 h达到最高表达水平。白木香C4H基因的编码区序列的分离克隆为进一步研究C4H蛋白在白木香中黄酮及芳香族类化合物合成途径中的功能及表达调控奠定基础。; 梁良韩晓敏张争郭庆梅徐艳红刘娟廖永翠; 关键词：白木香芳香族化合物

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韩晓敏