黄妤
- 作品数：25 被引量：53H指数：4
- 供职机构：湖南农业大学生物科学技术学院更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生文化科学更多>>
- 双分子荧光增强法实时观察烟草BY2细胞内Ca^(2+)信号转导被引量：1
- 2018年
- 钙离子作为第二信使是细胞信号转导的重要成员,也是细胞信号转导研究的重要对象。为了更有效地实时观察植物细胞中的钙离子信号,将响应钙离子的水母素(aequorin, AEQ)基因转化到已由绿色荧光蛋白(GFP)标记的分泌载体膜蛋白SCMP2(secretive carrier membrane proteins2)的烟草BY2细胞(SCAMP2-GFP)。经过对转化细胞的筛选和分子检测,获得了双价转化的BY2细胞株。转化细胞经腔肠素处理并实时显微观察,能较清晰地观察到细胞中钙离子响应的荧光信号,水母素单价转化细胞则几乎观察不到荧光信号,说明水母素响应钙离子并作用于腔肠素所发弱荧光能进一步激发GFP荧光,使弱荧光有效增强。尽管响应钙离子的双价自激发荧光较利用外施激发光对GFP的激发荧光稍弱,但已能满足在显微镜下直接观察和采集信号的荧光强度,实现对细胞内钙离子的实时观察。通过拍照采集钙离子响应的荧光图像,在3倍于外激发的曝光时间条件下获得清晰的荧光图片。以上结果证明了双价标记法能有效地实时观察细胞的钙离子信号。对应于Aequorin与GFP融合表达的体系,双价转化法还能利用GFP不同亚细胞内定位的特定蛋白标记,对亚细胞水平的不同部位开展钙离子信号研究,体现出其优势。
- 翟翔赵燕曹哲高晗徐茂盛黄妤黄丽华陈金军张学文
- 关键词：钙离子信号转导
- 生长素结合蛋白与纤维素合成酶在同一细胞中的标记与定位
- 2012年
- 生长素通过其结合蛋白(ABP1)促进细胞纤维素合成并使细胞伸长生长。为探明ABP1与纤维素合成酶(CesA1)这2种蛋白质之间的相互关系,分别对这2种蛋白质进行了荧光标记,构建了绿色荧光蛋白(GFP)对ABP1融合标记以及青色荧光蛋白(CFP)对CesA1融合标记的2种载体。采用烟草叶片侵注法,将2种重组体转入烟草叶片同一细胞进行瞬时表达。扫描激光共聚焦显微成像观察到转基因瞬时表达的烟草铺列细胞的细胞膜上有强烈两色荧光信号,表明这2种蛋白集中在细胞膜上分布,其分布区域存在明显的重叠。在细胞的内膜系统中绿色荧光信号相对较强,青色荧光信号较弱,表明内膜系统中也分布着一定量的ABP1,而纤维素合成酶在内膜系统中不会集中分布。在叶片铺列细胞间嵌合交错区可以观察到青色荧光的高亮点,表明此处存在纤维素合成酶的高密度分布,也说明在此部位有更多的纤维素合成。
- 陈宗星刘晓柱黄妤黄丽华张学文
- 关键词：生长素结合蛋白纤维素合成酶荧光标记细胞定位
- 苎麻纤维素合成酶基因BnCesA4 cDNA序列的克隆与表达分析被引量：8
- 2014年
- 利用本地BLAST工具,从先期获得的苎麻转录组数据中发掘出与多种植物纤维素合成酶基因有较高同源性的序列CL6473。以苎麻(Boehmeria nivea)栽培种湘苎3号为材料,根据CL6473设计引物,先采用PCR扩增克隆了苎麻一个纤维素合成酶基因cDNA的核心片段,再运用5'及3'RACE获得该基因全长cDNA,序列分析表明该cDNA为一个新的苎麻纤维素合成酶基因cDNA,命名为BnCesA4。BnCesA4 cDNA序列全长4 008 bp,其中编码区全长3 270 bp,编码一个含1 090 aa的多肽,具有植物纤维素酶的保守结构域及特征氨基酸序列。根据该cDNA高可变区序列设计其特异性引物,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对BnCesA4基因在几个代表性苎麻品种:湘苎3号、湘苎1号、湘潭大叶白及城步青麻的木质部和韧皮部两种组织中的表达情况进行了定量分析。qRTPCR显示BnCesA4基因在不同品种苎麻的木质部及韧皮部均有表达,表达量差异不大。
- 刘昱翔陈建荣彭彦黄妤赵燕黄丽华郭清泉张学文
- 关键词：苎麻克隆
- ABP1参与BY2细胞生长素响应的Ca^(2+)信号转导过程
- 2021年
- 将Ca^(2+)响应实时荧光报告系统引入雌二醇诱导生长素结合蛋白(ABP1)调控表达的BY2细胞中,获得了ABP1过表达(ABP1-ox)、抑制表达(ABP1-anti)同时对Ca^(2+)标记的几个BY2细胞株。对这些细胞株进行雌二醇诱导调控其ABP1过表达或抑制表达后,分析ABP1的表达量,并通过在细胞外添加IAA处理,实时观察ABP1调控表达后细胞的Ca^(2+)信号变化。结果表明:ABP1-ox细胞在雌二醇诱导后细胞内ABP1表达量显著提高,细胞经IAA处理后,细胞膜内、核膜周围均有迅速而强烈的荧光信号,说明ABP1过表达后细胞能快速响应胞外的IAA作用,将信号转导到细胞内,使细胞质内Ca^(2+)信号迅速增强;而ABP1-anti细胞经雌二醇诱导后,细胞内ABP1表达显著下调,细胞经IAA处理后,相对于对照,细胞内的荧光信号微弱且呈点状,细胞核附近的荧光不明显,说明细胞内Ca^(2+)信号的转导受到抑制。这证明BY2细胞中ABP1参与生长素信号与细胞内Ca^(2+)响应的信号转导过程。
- 徐茂盛赵燕翟翔廖李玲黄妤黄丽华陈金军张学文
- 关键词：ABP1
- 烟草WS38生长素结合蛋白基因cDNA的克隆及序列分析被引量：1
- 2010年
- 以烟草WS38为材料,根据GenBank中登录的烟草生长素结合蛋白(ABP1)氨基酸序列设计引物,通过RT-PCR克隆了烟草WS38ABP1基因cDNA分子编码区,序列全长为564bp,可编码1条188个氨基酸的多肽.利用ClustalX软件对该序列翻译获得的多肽序列与报道的烟草生长素结合蛋白氨基酸序列比较,两者同源性为98.4%,存在2个氨基酸的差异,但差异氨基酸对ABP1结构和功能影响微弱.认为克隆的cDNA序列即为烟草WS38ABP1cDNA,不同品种烟草ABP1基因存在的核苷酸单位点多态性(SNP)造成了两者氨基酸序列的差异.
- 刘晓柱黄妤彭珍子周晶辉洪亚辉张学文
- 关键词：烟草生长素结合蛋白CDNA克隆
- 烟草和拟南芥表皮毛中特异表达iaaM后的遗传效应被引量：4
- 2018年
- 利用色氨酸单加氧酶基因iaaM与拟南芥表皮毛特异表达GL2基因启动子重组后,构建了在植物表皮毛细胞中特异表达iaaM基因的重组基因载体;采用根癌农杆菌叶盘转化法将重组基因转化到烟草WS38(对照)中,筛选和鉴定出了6株转化烟草植株;将该重组基因以根癌农杆菌花序浸渍法转至拟南芥(Colombia ecotype,对照),筛选出9株拟南芥转化植株,并对稳定转化的转基因植株表皮毛进行观察。结果表明:转基因烟草表皮毛较对照植株显著增长,其长度最长为对照的2.2倍,但转基因拟南芥表皮毛长度与对照间无显著差异。对烟草幼叶进行生长素浓度检测,转iaaM基因烟草吲哚乙酸含量显著提高,说明iaaM在烟草表皮毛细胞中表达,使其合成和积累更多的生长素;转基因拟南芥和烟草表皮毛密度均较对照显著增加,证明植物表皮毛发育模式中GL2表达的特异性受细胞内生长素的影响。
- 谢德雄潘嘉立赵燕黄丽华黄妤陈金军张学文
- 关键词：烟草拟南芥表皮毛生长素
- 琥珀酰辅酶A转移酶硝基化酪氨酸位点特异单克隆抗体的制备
- 2011年
- 线粒体琥珀酰辅酶A转移酶(SCOT)含有4个酪氨酸残基,其4、76位点酪氨酸(Tyr4、Tyr76)的硝基化可导致其酶活性下降,制备特定的抗体可对其硝基化水平和位点进行检测。应用淋巴细胞杂交瘤技术,以化学合成的含琥珀酰辅酶A转移酶硝基化Tyr4和Tyr76肽段为半抗原,偶联钥孔血蓝蛋白(KLH)后,作为免疫原免疫Balb/c小鼠,分离免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了多株融合细胞。经对融合细胞多次筛选和检测,最终获得4株单克隆抗体,分别对应SCOT Tyr4和Tyr76硝基化后表位,其间接ELISA检测效价分别达到1∶128 000、1∶32 000、1∶512 000和1∶4 096 000,表明抗体具有较强特异性和灵敏度。
- 何靖玄黄丽华黄妤张学文
- 关键词：单克隆抗体
- 苎麻UDPGDH基因的cDNA克隆及表达分析被引量：7
- 2008年
- 【目的】分离苎麻尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(UDPGDH)基因。【方法】通过简并引物RT-PCR结合RACE技术和半定量RT-PCR。【结果】成功克隆苎麻Boehmeria nivea(Linn.)Gaud.尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(UDPGDH)基因cDNA序列,序列长1837bp,编码一480个氨基酸的蛋白质(GenBank No.EF178294)。半定量RT-PCR分析显示,UDPGDH在苎麻根、皮、茎和叶组织中均有表达,其表达量为茎>皮>叶>根,相对表达量依次为0.7075,0.3051,0.2651,0.1490。【结论】苎麻UDPGDH与其它植物相应序列具有较高同源性,在苎麻茎中有较高的表达。
- 刘峰黄妤郭清泉张学文李良勇邓晶谢玲玲
- 关键词：苎麻CDNA克隆
- 一种提高棉秆生物质降解及糖醇转化效率的研究方法
- 本发明公开了一种提高棉秆生物质降解及糖醇转化效率的研究方法，研究了汽爆后秸秆细胞壁组分及其精细结构和预处理降解效率，并探讨分析了它们之间的关系，为棉秆的有效利用提供了理论基础。本发明通过对陆地棉和海岛棉棉秆的研究比较发现...
- 黄妤乔波
- 文献传递
- 生长素在烟草表皮毛中的极性运输及对细胞伸长的影响被引量：2
- 2020年
- 利用生长素极性运输转运蛋白PIN1与增强绿色荧光蛋白EGFP的融合,对PIN1进行了荧光标记,并以烟草表皮毛为模式,开展了PIN1对生长素极性运输及对细胞伸长生长影响的研究。采用DNA重组技术,将融合标记基因EGFP–PIN1置于拟南芥表皮毛特异表达基因GL2的启动子调控下,构建成含GL2pro::EGFP–PIN1的Ti质粒,以根癌农杆菌叶盘共培转化法将重组标记基因转化至烟草WS38中,筛选鉴定出多株转基因烟草。通过对这些转基因烟草表皮毛进行显微荧光观察,结果发现,标记的绿色荧光信号集中分布在表皮毛细胞的间隔区,表现为明显的极性分布现象。用生长素极性运输抑制剂三碘苯甲酸(TIBA)处理后,表皮毛的伸长生长受到抑制,细胞中荧光的分布极性减弱。说明生长素在烟草表皮毛中的极性分布对烟草表皮毛伸长起关键作用,抑制生长素的极性运输不只抑制表皮毛的细胞伸长,同时还影响到生长素极性运输蛋白PIN的极性分布。
- 潘嘉立赵燕黄丽华高晗黄妤陈金军张学文
- 关键词：烟草生长素极性运输表皮毛细胞伸长
