丁林贤 作品数:58 被引量:163 H指数:8 供职机构: 浙江师范大学 更多>> 发文基金: 浙江省自然科学基金 国家自然科学基金 浙江省科技计划项目 更多>> 相关领域: 环境科学与工程 生物学 农业科学 文化科学 更多>>
藤黄微球菌Rpf活性蛋白的制取及其对红球菌VBNC菌体的复苏作用 被引量:17 2012年 【目的】克隆藤黄微球菌Micrococcus luteus IAM 14879(=NCIMB 13267)的复苏促进因子Rpf(resuscitation promoting factor)的基因,在大肠杆菌中表达获取基因重组蛋白,考察对近缘高GC革兰氏阳性菌红球菌Rhodococcus sp.DS471活的非可培养VBNC(viable but non-culturable)菌体的复苏促进生长能力。【方法】抽提制备藤黄微球菌的DNA,确定rpf基因引物进行PCR扩增,利用pET15b质粒载体并转化大肠杆菌DE3表达,以SDS-PAGE检验获取纯化重组蛋白;在培养基中添加Rpf,以MPN(most probable number)法计数、评价对VBNC状态菌体的复苏促进生长效果。【结果】基因测序证实获得藤黄微球菌的rpf基因并在大肠杆菌中表达;SDS-PAGE分析表明获得rpf基因的重组蛋白;该蛋白对处于VBNC状态的红球菌具有近100倍的复苏促进生长能力。【结论】成功克隆了藤黄微球菌的rpf基因,在大肠杆菌中获得了表达,表明了Rpf蛋白对处于VBNC状态的红球菌具有复苏促进生长效果。 丁林贤 张萍华 洪华嫦 林红军 横田明关键词:藤黄微球菌 VBNC 红球菌 提高环境微生物学教学效果的途径探讨 被引量:5 2012年 环境微生物学是环境科学相关专业重要的专业知识与技能课程。分析了环境微生物学常见问题与教学难点,设计教学小道具、科研简易小设备、利用多媒体介绍国内外最新科研动态等教学新亮点,以及调整学期专业课程安排时间等教改措施,营造课堂学习氛围,缩短理论学习与实际应用间的距离,增强学生课外科研积极性,引导学生成功考研等方面收到了良好的效果。 丁林贤 黄芳 王方园 洪华嫦关键词:环境微生物 教学方法 课程安排 基于VBNC状态复苏的荧光假单胞杆菌CHZYR63对毒死蜱的酶降解效果 2015年 利用复苏可培养化VBNC(Viable but non-culturable bacteria)资源菌筛选了对毒死蜱有降解性能的菌种及其酶.应用最大或然数计数(MPN)法,添加复苏促进因子Rpf蛋白分子,获取可培养化VBNC菌种,确定菌种的系统进化属性,并用常规培养法筛选了高效毒死蜱降解菌及其酶,探索了适宜的酶降解优化条件.从分离到的可培养化VBNC菌株中筛选出一株降解毒死蜱效果达70%的菌株CHZYR63,经16S r RNA基因序列分析,初步鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens).继而,从该菌株提取出粗酶,其降解毒死蜱能力为50%.降解条件优化研究表明:降解酶促反应的最适温度为35℃,最适p H值为7;在最适条件下该降解酶在30 min内对毒死蜱(100 mg/L)的降解率可达60.26%. 丁林贤 吴咚咚 付惠玲 王强 蔡慧慧 施洁莹 王新全 周育关键词:毒死蜱 酶促降解 PH 温度 水质净化微生物生态单元、水质净化微生物生态系统及其方法 本发明实施例公开了一种水质净化微生物生态单元,该水质净化微生物生态单元包括框架,框架的底端外壁面上分别设有进水口、出水口,框架内设有滤材层以及出水管道;滤材层自上到下将框架分割成第一容纳腔、第二容纳腔,出水管道具有进水端... 丁林贤 苏晓梅 付惠玲广西蚕沙细菌组成多样性解析和VBNC菌群的发掘 被引量:4 2020年 【目的】解析广西蚕沙中细菌群落组成与多样性,为蚕沙中菌种资源发掘和蚕沙的综合利用提供科学依据。【方法】通过高通量测序技术研究细菌群落组成特征,同时利用常规稀释涂布平板法和基于复苏促进因子(Rpf)的MPN培养系统解析并筛选蚕沙中可培养和活的非可培养(VBNC)状态的优势菌群,并经16SrRNA基因测序对筛选得到的菌株作初步分类鉴定。【结果】高通量测序表明,广西蚕沙样品中细菌归属于10个门、18个纲、27个目、57个科、96个属,其中4个属的丰度达1%以上,优势菌群为变形菌门(Proteobacteria)肠杆菌属(Enterobacter);通过稀释涂布平板法共获得14个属的33株可培养细菌,其中4个属(Citrobacter、Weissella、Chitinophaga、Pseudoclavibacter)在高通量测序中未被检测到;而在MPN培养系统中,基于复苏促进因子的处理组细菌总数最大检出丰度提高了100倍,并从中共检出21株对Rpf敏感的VBNC菌株,其中6个属(Paenibacillus、Caulobacter、Roseomonas、Pantoea、Erwinia、Acinetobacter)为传统分离法中未能获得的菌属,2个属(Paenibacillus和Caulobacter)在高通量测序中未被检测到。【结论】蚕沙细菌多样性丰富,不同方法解析蚕沙细菌组成多样性存在一定差异,而且通过添加Rpf首次发现了蚕沙中存在大量过去未被认知的VBNC状态细菌,其中从16S rRNA基因序列同源性推测有3个VBNC菌株为潜在新种。此研究结果为深入挖掘蚕沙中微生物资源提供了新的视角与途径,为蚕沙的综合处理提供了研究基础。 张艳军 陈宝婷 张玉梅 张逸飞 朱宝琳 苏盼 丁林贤 谢乃钧 张萍华关键词:高通量测序 蚕沙 细菌多样性 荧光假单胞菌CHZYR6 3菌株及其酶制剂和对毒死蜱农药降解的应用 本发明涉及利用Rpf复苏VBNC菌,尤其涉及一种荧光假单胞菌(Pseudomonassp.)CHZYR6 3菌株及其应用。荧光假单胞菌(Pseudomonassp.)CHZYR6 3菌株,该菌株保藏在位于中国典型物保藏中... 吴咚咚 王强 蔡慧慧 丁林贤 王新全 周育文献传递 活的但非可培养(VBNC)状态菌的研究进展 被引量:20 2011年 VBNC(viable but non-culturable)是指处于"活的但非可培养"状态的微生物,此微生物体的细胞仍有代谢活性,但用常规方法无法分离培养。本文阐述了VBNC状态菌的形成机理、转变与种类、复苏、研究意义及其应用展望。并报道了我们在十余年间针对生态环境中处于VBNC状态菌的复苏、可培养化、系统进化关系及潜在功能等方面的一些研究成果,拟为微生物资源的开发与应用提供新的科学依据。 丁林贤 苏晓梅 横田明关键词:微生物资源 基于生物反应器制药废水中活的但非可培养状态细菌的分离(英文) 2014年 [目的]探究制药废水中活的但非可培养(viable but non-culturable,VBNC)状态细菌的组成与系统关系。[方法]利用土质滤材构建生物反应器,基于复苏促进因子(resuscitation promoting factor,Rpf)对VBNC细菌的复苏刺激生长作用,采用MPN(most probable number)法,稀释平板法分离其中复苏可培养化的VBNC菌株并解析其16S rRNA基因系统关系。[结果]在MPN培养系中,Rpf对部分细菌有生长刺激作用。制药废水中存在对Rpf敏感、复苏可培养化的VBNC优势菌群;制药废水中对Rpf敏感的VBNC优势细菌主要有革兰氏阳性放线菌Microbacterium、Gordonia和Leucobacter属近缘菌,革兰氏阴性菌Candidimonas、Xanthobacter和Aminobacter属近缘菌,其中菌株ZYM1、ZYM3、ZYZR4和ZYXR1可能属于新种。[结论]研究结果揭示了制药废水中存在VBNC状态细菌,为研究其形成机理、复苏活性化机制以及制药废水的深度处理等提供重要的思路与方法。 邹艳艳 付惠玲 陈雅红 翟竟余 韦彦斐 梅荣武 丁林贤关键词:制药废水 生物反应器 纳米银-葛根纤维敷料的制备方法及应用 本发明提供的纳米银‑葛根纤维敷料的制备方法,包括以下步骤:利用Ag<Sub>2</Sub>SO<Sub>4</Sub>溶液对葛根纤维进行脱胶处理,并生成银‑葛根纤维沉淀物;对银‑葛根纤维沉淀物表面进行中性化处理;用75%... 宋娜 陈建荣 丁林贤 杨利宁文献传递 一种藤黄球菌固定化小球的制备方法及其应用 本发明公开了一种藤黄球菌固定化小球的制备方法,本方法是将藤黄球菌包埋在海藻酸钠‑多孔土质滤材混合液中,可稳定保持藤黄球菌活性,使其成为长期提供复苏促进因子Rpf蛋白的来源,Rpf蛋白可复苏促进有毒难降解有机污染环境中的潜... 苏晓梅 张硕 张云鸽 丁林贤 林红军 陈建荣