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高通量脂肪酶稳定性测定法-ANS法的建立被引量：2: 2011年; 根据蛋白质变性后结构变化的特点和荧光探针8-苯胺基-1-萘磺酸（8-Anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS）的特性,建立了一种快捷而准确的脂肪酶热稳定性（Tm）测定的新方法——ANS脂肪酶稳定性测定法,即将脂肪酶在25℃-65℃的不同温度下保温30 min后,加入到ANS反应体系（0.2 mg/mL酶蛋白,0.05 mmol/L ANS,20 mmol/L Tris-HCl（pH 7.2）,100-500 mmol/L NaCl）中。在激发波长378 nm,发射波长465 nm下测定荧光值。通过GraphPad Prism软件分析得出脂肪酶的Tm。利用该方法测定了野生型扩展青霉脂肪酶及其突变体的Tm值,结果与传统的NaOH滴定和平板透明圈法的测定结果相似。同时,利用该方法可在96孔板上快速完成数十个样品的Tm测定,从而成为一种快速、可靠、可用于高通量的酶稳定性的测定方法。; 冯蔚宗林俊涵菜少丽邹有土陈国仁黄平林雅静王冰冰林琳; 关键词：脂肪酶热稳定性

脂肪酶稳定性测定新方法的建立——ANS荧光分光光度法: ＜正＞人们通常采用脂肪酶温浴后测定其酶活的方法来确定脂肪酶的热稳定性,非常耗时和繁琐。根据蛋白质变性的结构变化的特点和荧光素ANS的特性,我们设计和建立了一种全新的、简单、快速和准确的脂肪酶热稳定性（Tm）测定的新方法—...; 冯蔚宗林雅静王冰冰林琳; 关键词：脂肪酶热稳定性荧光分光光度法 ANS; 文献传递

易错PCR对扩展青霉脂肪酶基因PEL的定向进化被引量：1: 2011年; 以带有野生型扩展青霉碱性脂肪酶cDNA全长的载体psk-lip07为模板,利用易错PCR技术以及高通量筛选,最终获得了一株最佳突变体GS-pPIC3.5K-lip07-ER04,其最适作用温度比野生型提高10℃,酶活提高了约22%,热稳定性Tm值也提高了3.28℃。基因测序结果表明,脂肪酶(PEL)第82位的Lys突变成Arg,第241位的Glu突变成Pro。; 陈彦司圣乾刘燕雅冯蔚宗林琳; 关键词：扩展青霉脂肪酶易错PCR 最适作用温度

低温脂肪酶的纯化及部分酶学特性的研究: 在不同的领域中需要不同性质的脂肪酶,因此需要寻找各种特性的脂肪酶来满足生产、生活的需要。低温脂肪酶不但在低温具有高催化活性,而且耐有机溶剂以及对热敏感,因此在食品、洗涤、制药、脂类加工、低温环境修复等工业上有着巨大的应用...; 司圣乾陈彦刘燕雅冯蔚宗林琳

易错PCR对扩展青霉脂肪酶酶活的改善: 扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)是一种在碱性条件下有非常好的催化三酰甘油酯分解的脂肪酶,其适宜的作用温度为20-37度,作用pH范围为9.0-10.5,最适为9.5,该酶的编码基因共855bp,由285个氨基酸组成,成熟太的...; 陈彦司圣乾刘燕雅冯蔚宗林琳

罗伦隐球酵母脂肪酶纯化与ANS快速测定脂肪酶热稳定性方法的建立: 脂肪酶作为一种重要的工业用酶，在造纸、医药、食品、日用化工、能源开发等领域有着广泛的研究与应用。作者通过过离子交换柱Sepharose Fast Flow纯化了罗伦隐球酵母B40（Cryptococcus Jaurent...; 冯蔚宗

随机突变对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的改善被引量：4: 2009年; 利用error-prone PCR和staggered extension process(StEP)相结合的方法对扩展青霉脂肪酶(PEL)进行定向进化,构建含有随机突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-mutantx,电转化引入毕赤酵母GS115中,进行异源表达。高通量筛选获得一株最适作用温度比野生型提高了5℃的突变株。15%的SDS-PAGE表明突变体分子量与野生型一致,约为28kDa。基因测序结果表明,突变体第270位丙氨酸变为苏氨酸,后者是氢键的供体,能形成具有稳定空间结构的氢键,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合。; 胡长浩邹有土刘燕雅冯蔚宗林琳; 关键词：扩展青霉脂肪酶随机突变最适作用温度

罗伦隐球酵母B40脂肪酶的分离纯化及N端测序: 2010年; 文章介绍了罗伦隐球酵母B40所产脂肪酶的分离纯化过程,摸索了分离纯化过程中盐析的最佳盐浓度和作用时间,并对离子交换填料进行了选择,确定了纯化效果好的填料及其缓冲体系的pH,同时也对该酶N端序列进行了测定。结果表明,在4℃,65%硫酸铵饱和度的条件下沉淀6h能获得蛋白量较大、活性较高的目的蛋白。将样品过DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱,缓冲体系为pH9.020mol·L-1Tris-HCl溶液中进一步洗脱后进行超滤浓缩、纯化得到单一脂肪酶,该脂肪酶的N端蛋白序列为:D-F-G-P-I-T-I-Y-T-P-P-A。; 冯蔚宗王冰冰林雅静林琳; 关键词：脂肪酶分离纯化

Pseudomonas sp. RT-1低温脂肪酶的纯化及酶学特性被引量：1: 2010年; Pseudomonas sp. RT-1是从低温环境下分离的低温脂肪酶产生菌,对该菌产生的胞外脂肪酶（PL-1）进行纯化,并对其酶学特性进行初步研究。Pseudomonas sp. RT-1的发酵上清液经60%（NH4）2SO4沉淀、12~14000截留相对分子质量（MWCO）透析袋透析、Sephadex G75分子筛和超滤浓缩后,得到了电泳纯的P-L1。SDS-PAGE电泳估算其表观相对分子质量为4.43×104。对其酶学特性研究表明：PL-1是低温碱性脂肪酶且对有机溶剂的耐受性较好。10~40℃内有较好的催化活性,最适作用温度为18℃;0~50℃该酶的稳定性较好,当温度超过50℃时则容易失活;最适作用pH为10.2,且pH在9~11时较稳定;该酶对有机溶剂的耐受性较好,10mmol/L的Ca2＋、K＋、Na＋和Fe3＋对PL1的酶活力有促进作用,其中Ca2＋促进作用最大,提高了146.07%,而10mmol/L的Cu2＋、Co2＋、Mn2＋、Mg2＋、Zn2＋、Ba2＋和Al3＋对酶活力具有不同程度的抑制作用,其中Al3＋抑制作用最强,抑制了98.55%;PL-1对C链长度小于或等于12的短链脂肪酸形成的甘油三酯具有较强的水解能力;1mmol/L的去氧胆酸盐（desoxycholate）和0.01%的Triton X100对酶活力具有提高作用,分别提高了30.74%和11.83%;0.01%的SDS和Tween-80、1mmol/L的EDTA和尿素对酶活都有抑制作用,其中EDTA的抑制作用最大,抑制了80%。; 司圣乾陈彦刘燕雅冯蔚宗林琳; 关键词：PSEUDOMONAS 低温脂肪酶纯化酶学特性

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冯蔚宗

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