公共文化服务平台

共 2 条记录，以下是 1-2

全选清除导出

排序方式：

Nogo66-siRNA和hNGFβ双基因共表达腺相关病毒骨架质粒的构建与鉴定: 背景介绍:脊髓损伤是一种常见而且严重的临床疾患。脊髓组织作为成熟的中枢神经系统,神经元已失去分裂和再生新神经元的能力,但成熟神经元具有再生轴突的能力。近年来,包括神经生长因子(NGF)和神经轴突再生抑制因子(Nogo)在...; 李若飞党晓谦李建伟王坤正柏传毅包理中娄高杰; 关键词：腺相关病毒双基因共表达; 文献传递

双基因共表达腺相关病毒穿梭质粒的构建与鉴定: 2009年; 目的合成和筛选nog066-siRNA干扰片段，克隆神经生长因子-β（NGF-β），构建含nog066-siRNA和NGF-β双基因的重组腺相关病毒穿梭质粒。方法设计针对nog066的siRNA，插入载体pGenesil-1．1，转染大鼠胶质瘤C6细胞，通过RT-PCR和Western-blot检测筛选有效的干扰质粒；培养人MIApaca-2细胞，提取总RNA，进行RT-PCR得到人NGF-β基因，插入T-easy载体；将pGenesil-1．1与pAAV-MCS进行重组，得到含u6和CMV双启动子的重组腺相关病毒穿梭质粒pAAV—U6／CMV—EGFP；将nog066一siRNA和NGF-β分别插入pAAV-U6／CMV-EGFP中，构建含nog066-siRNA和NGF-β双基因的重组腺相关病毒穿梭质粒。结果干扰质粒pGenesil-nogo66-siRNA测序显示十扰序列正确；RT-PCR结果显示转染后各条带相对亮度有差异，转染pGenesil-nog066-siRNA-1和pGenesil-nog066-siRNA-2使nogo基因表达降低；Western-blot结果显示转染pGenesil-nogo66-siRNA、1使NOGO蛋白表达下降73％，转染pGenesil-nog066-siRNA-2使NOGO蛋白表达下降78％，与未转染组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；质粒T-easy-NGF-β酶切可见3000bp、736bp条带，测序显示基因序列正确；酶切pAAV-U6／CMV-EGFP、pAAV-U6-nog066-siRNA／CMV-EGFP町见4300bp、800bp条带．转染细胞后均可见绿色荧光蛋白表达；酶切pAAV-U6／CMV-NGF-β、pAAV-U6-nog066-siRNA／CMV-NGF-β可见4300bp、736bp条带；质粒pAAV-U6-nog066-siRNA／CMV-NGF-β测序显示载体中的基因序列正确。结论成功构建了含有nog066-siRNA与NGF-β双基因的重组腺相关病毒穿格质粒，为深入研究脊髓损伤的修复提供了实验基础。; 李若飞李建伟党晓谦王坤正柏传毅包理中娄高杰; 关键词：神经生长因子基因表达腺相关病毒

全选清除导出

共1页<1>

包理中

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

包理中

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈