周生
- 作品数：26 被引量：57H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人胎肝FL克隆的多样性
- 该研究用RT-PCR方法,首次从胎肝组织中克隆了人FL膜外片段cDNA.共得到四个长度分别为563bp、546bp、492bp和381bp的克隆.其中546bp克隆与从T淋巴细胞系和胸腺基质细胞系中的FL cDNA相同...
- 周生
- 关键词：人胎肝多样性体外扩增
- 多药耐药基因反义寡脱氧核苷酸对卵巢癌细胞株SKOV3多药耐药性逆转的作用被引量：11
- 2000年
- 目的 探讨多药耐药基因 (mdr1)反义寡脱氧核苷酸 (ASON)对卵巢癌细胞多药耐药性的逆转作用。方法 以人mdr1基因转导产生的耐药卵巢癌SKOV3/mdr1细胞为模型 ,采用 2 5 0 μg/mlmdr1 ASON ,作用于SKOV3/mdr1细胞 ,采用流式细胞术及罗丹明 12 3排出试验 ,检测SKOV3/mdr1细胞mdr1基因产物P 糖蛋白 (P gp)的阳性率及其功能。并进行SKOV3/mdr1细胞集落培养 ,观察耐药性。结果 mdr1 ASON作用后 ,SKOV3/mdr1细胞的P gp阳性率由 38 9%减少至 2 1 3% (P <0 0 1) ,SKOV3/mdr1细胞内罗丹明的潴留率 ,由 32 1%增加至 5 0 7% (P <0 0 1)。SKOV3/mdr1细胞加mdr1 ASON和空白对照细胞形成抗性细胞集落的相对百分数 ,在泰素浓度达 5ng/ml时 ,分别为 8%和 6 3%(P <0 0 1) ,在阿霉素浓度达 10 0ng/ml时 ,分别为 34 %和 79% (P <0 0 1)。结论 mdr1 ASON可一定程度的逆转卵巢癌细胞多药耐药性 ,从而提高卵巢癌细胞对化学治疗药物的敏感性。
- 童英潘凌亚周生吴英毛宁杨秀玉
- 关键词：MDR1基因ASON多药耐药性
- 造血干细胞及其相关的间充质干细胞和胚胎干细胞的基础与应用研究
- 毛宁张毅郭子宽周生张明伟刘兵江小霞李秀森于晓妉
- 课题组在对造血干/祖细胞（CD34+细胞）生物学特性研究基础上，获得人CD34+细胞分离纯化、体外扩增及定向诱导分化的较理想的条件与技术手段，并依据研究结果建立了可应用于临床细胞治疗的实验方法，为临床应用奠定了基础。进一...
- 关键词：
- 关键词：造血干细胞间充质干细胞胚胎干细胞
- 三种反义c-myc逆转录病毒表达载体的纯化、病毒包装、滴度测定及整合检测被引量：1
- 2000年
- 为了增强逆转录病毒构建体对靶细胞的转染能力 ,本实验使用 Wizard TMDNA纯化系统对构建成功的三种反义 c- myc逆转录病毒表达载体进行了纯化 ,并经脂质体介导包装 PA317细胞 ,使用 NIH 3T3细胞测定了 PA317抗性细胞克隆的病毒滴度 ,用 neo基因 PCR扩增检测外源基因的整合情况。结果显示纯化后的DNA达到了真核细胞转染的要求 ,但其包装滴度的高低还受靶细胞生长状态、 PA317抽样量的高度影响 ,而neo基因 PCR检测是一种敏感。
- 曾嵘李进周生刘原林沈继铭
- 关键词：C-MYC逆转录病毒脂质体病毒滴度
- 卵巢癌化疗耐药性的应用基础研究
- 潘凌亚周生
- 该项目采用了分子生物学和基因工程等技术，其创新点在于，以人脐血CD34＋细胞作为mdr1基因的靶细胞，首次组合细胞因子SCF+FL+IL-3和SCF+FL+IL-3+IL-6体外扩增人脐血CD34＋细胞，发现其对有核细胞...
- 关键词：
- 关键词：卵巢癌药物疗法基因疗法抗药性人脐血细胞
- 双基因导入人脐血CD34^+细胞共表达的调控被引量：1
- 1999年
- 目的 观察携带双基因的逆转录病毒载体转导人脐血CD3 4+细胞后 ,猴病毒 4 0 (SV4 0 )早启动子和内部核糖体进入位点 (IRES)对载体上、下游双基因共表达的影响。方法 分别构建含SV4 0早启动子和IRES的双基因逆转录病毒载体pLESN和pLEIN ,两者均携带增强型绿色荧光蛋白和新霉素抗性neo基因。重组载体经包装以其病毒上清感染经磁性细胞分离仪富集的人脐血CD3 4+细胞 ,而后进行集落形成细胞测试。结果 流式细胞仪检测表明 10 %的脐血CD3 4+细胞表达绿色荧光蛋白。集落形成细胞测试发现pLESN转导的脐血CD3 4+细胞体外培养形成的G4 18抗性集落中 ,4 1 1%的集落有绿色荧光 ,而pLEIN组全部为绿色荧光集落。结论 与SV4 0早启动子相比 ,含有IRES序列的重组双基因逆转录病毒载体转导人脐血CD3 4+细胞时 ,能保证上、下游双基因的协同表达。
- 刘兵吴英童英张双喜周生毛宁
- 关键词：造血干细胞基因治疗脐血
- 动脉内膜损伤及三种反义c-myc RNA的作用被引量：6
- 2000年
- 目的 了解反义c myc基因导入对血管壁的影响。方法 将分别载有c myc第 1、2和 3外显子反义片段的三种重组逆转录病毒表达载体aM1、aM2和aM3导入球囊损伤的兔股动脉壁 ,并于术后 2 1天进行表达检测。结果 (1 )兔股动脉区域不仅利于控制损伤、给药和取材 ,而且血管内膜和中膜的面积比达到了 1 37∶1 ,其中膜c myc表达强度和面积增至正常的 1 8倍和 1 5倍 ;(2 )三个反义实验组中膜和内膜c myc表达则显著减少 ,其中aM2、aM3和aM1中膜强度分别减少了 37 5 %、2 0 8%和 1 7 8% ,面积分别减少了 71 5 %、5 7 2 %和 6 1 6 % ,内膜强度分别减少了 31 3%、2 0 8%和 1 7 8% ;(3)aM2组内膜 /中膜比下降了 72 6 % ,aM3组下降了 35 2 % ;(4)三种反义转染组内膜和中膜增殖细胞核抗原 (PCNA)表达出现强度增加而面积显著减少的现象 ;(5 )与内膜 /中膜比下降相平行 ,三个反义转染组中膜和内膜α SMactin的表达明显增加 ,增加程度为aM2 >aM3>aM1。结论 兔股动脉损伤模型可以取得满意的模型效果 ,而反义c myc导入能减少和抵消损伤血管myc的表达增加 ,对抗损伤所造成的血管壁内膜增生和平滑肌细胞去分化 ,并以aM2作用最强。
- 曾嵘刘小蓉宋立功郑梦利周生李进
- 关键词：血管内膜损伤基因治疗反义C-MYCRNA
- 提高多药耐药基因导入人CD_(34)^+细胞转导效率的探讨
- 2000年
- 目的 探讨逆转录病毒介导的多药耐药基因 (mdr1)导入人CD34+ 细胞的影响因素 ,以提高基因转导效率。方法 用流式细胞术 (FCM)检测不同组合细胞因子及人骨髓基质细胞 +细胞因子支持的基因转导效率 ;用造血祖细胞集落培养观察耐药性 ;用FCM检测不同浓度紫杉醇素对基因转导细胞的作用。结果 细胞因子SCF +Flt配体 (FL) +IL 3组合支持的基因转导效率高于其它组合 (SCF+IL 6 +IL 3,SCF +IL 6 +IL 3+Tpo ,SCF +IL 3)。骨髓基质细胞 +细胞因子 (SCF +FL +IL 3)支持的基因转导效率 (2 0 .5 % )又高于单纯用该组细胞因子的转导效率 (15 .2 % ) ,并且前者形成的抗性集落形成细胞数多于后者。在 10ng ml紫杉醇作用下基因转导CD34+ 细胞的阳性率可达 38.5 %。结论 骨髓基质细胞 +细胞因子 (SCF +FL +IL 3)对基因转导有较强的促进作用 ;
- 童英潘凌亚周生吴英毛宁杨秀玉
- 关键词：CD34^+
- 人肿瘤浸润淋巴细胞的克隆化
- 1992年
- 肿瘤组织经机械剪切和酶消化分离肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。TIL在含1000U/ml重组人白细胞介素-2(rhIL-2)的培养液中培养6d后,植入含1000U/ml rhIL-2的软琼脂半固体培养基中培养,7d后将形成的克隆转移到含rhIL-2的培养液中培养。^(51)Cr释放法测定结果表明,约30％的克隆对NK敏感的K562细胞和对NK不敏感的H7402肝癌细胞有细胞毒性,为具有杀瘤活性的TIL杀伤克隆(TIL-K)。60％以上TIL-K克隆在含IL-2的培养液中可持续地增殖2～3个月,其细胞数可扩增至10~8～10~9,并始终保持对肿瘤细胞的细胞毒性。TIL-K克隆的表型为CD3^+、CD4^-、CD8^+、CD16^-,有T细胞抗原受体β链基因的表达,说明其属T细胞系统。采用半固体-液体两步培养法可获取大量高纯度具有广谱杀瘤活性的TIL,本研究有助于TIL的深入研究和临床应用。
- 周生毛宁张明伟江飞子李秀森杜德林
- 关键词：肿瘤淋巴细胞克隆化
- 双特异抗体在肿瘤免疫治疗中的意义被引量：3
- 1992年
- 双特异抗体在肿瘤免疫治疗中的应用以导向药物和导向细胞毒细胞最为重要。用于导向药物其效力比单抗高;用于导向细胞毒细胞时,可改变细胞毒细胞的靶特异性。NK 细胞、CTL 及LAK 细胞均可被双特异抗体导向而杀伤肿瘤细胞。经双特异抗体导向的细胞毒细胞用于治疗肿瘤已初步显示其重要作用。
- 周生杜德林毛宁
- 关键词：抗体双特异性肿瘤免疫疗法
- 全文增补中
