奚锦
- 作品数：19 被引量：9H指数：2
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 凤冈野生天麻抗真菌肽基因(gaf)的克隆与序列分析被引量：1
- 2011年
- 为了克隆凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf),以凤冈野生天麻的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增抗真菌肽基因(gaf),经克隆和测序结果显示:RT-PCR产物电泳扩增的目标条带长度为545 bp;经测序和序列分析,该基因与Genebank中公布的序列编码天麻抗真菌蛋白的基因序列(AY032588)同源性达97%。此研究成功地克隆了凤冈野生天麻抗真菌肽编码基因。
- 何光志田维毅王平王文佳奚锦俞琦黄高蔡琨王乾宇刘安胜安传伟查高武张鹏
- 关键词：野生天麻克隆
- 抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选
- 2012年
- 为了构建抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体库,从中筛选抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库特异性单链抗体,试验提取患者外周淋巴细胞总RNA,以总RNA为模板,通过RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,采用SOE-PCR方法将VH和VL片段随机拼接成ScFv片段,然后将ScFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转E.coil TG1,构建抗乙肝病毒人源单链抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果表明:经过5轮筛选,获得2株能与乙肝病毒抗原特异性结合的阳性克隆。说明利用噬菌体抗体技术可不经免疫制备抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体。
- 何光志田维毅高英王平王文佳奚锦俞琦王乾宇黄高蔡琨安传伟
- 蛔虫抗原基因ALAg克隆及序列分析
- 2011年
- 为了确定蛔虫基因工程疫苗的候选基因,试验以蛔虫幼虫的RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增出ALAg基因,扩增产物克隆到pMD18-T载体,筛选阳性克隆测序并进行Blast分析。结果表明:该基因与GenBank公布的猪蛔虫As37抗原基因(AB078971)的同源性为95%,与西式贝蛔虫Ag3抗原基因(EU927450)的同源性为92%。说明ALAg基因是线虫特有的抗原基因。
- 何光志田维毅王平王文佳奚锦俞琦曹峰黄高蔡琨韩洁王乾宇刘安胜安传伟查高武张鹏
- 关键词：蛔虫克隆及序列分析
- 抗类风湿人源单链抗体库的制备及筛选
- 2011年
- 目的通过噬菌体展示技术构建抗类风湿人源单链抗体库,为其进一步的临床应用研究奠定基础。方法提取患者外周淋巴细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以人源免疫球蛋白H链和L链可变区的扩增引物,分别扩增出H链和L链可变区基因。采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库。结果初级库库容量为3×106,在大肠杆菌TG1中重组后得到1.2×106的次级抗体库。结论本研究成功构建类风湿人源单链抗体库,拟为类风湿病的预防、诊断、治疗奠定基础。
- 何光志田维毅王平王文佳奚锦俞琦王乾宇黄高韩洁蔡琨安传伟
- 关键词：关节炎类风湿人源单链抗体
- 抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌鼠源化噬菌体抗体库的构建及筛选
- 2011年
- 用灭活的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌免疫小鼠后,取出小鼠脾脏提取总RNA,以RT-PCR扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)法将VH和VL拼接成ScFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,转化大肠杆菌E.coli TG1,构建鼠源抗金黄色葡萄天然噬菌体抗体库。研究结果表明,构建的鼠源性抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库库容为3.2×106,多样性良好,共筛选出8个阳性克隆。说明已成功构建抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库,为筛选有效治疗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌奠定了基础。
- 何光志田维毅高英王平王文佳王乾宇奚锦俞琦黄高安传伟
- 关键词：甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库单链抗体库
- 抗蛔虫人源单链抗体库的构建及鉴定
- 2011年
- 目的:构建抗蛔虫人源单链抗体库,从中筛选建抗蛔虫人源特异性单链抗体.方法:分离10个患蛔虫病人的淋巴细胞,提取总RNA反转录为cDNA,PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库.结果:初级库库容量为1.8×106,在大肠杆菌TG1中重组后得到1.6×106的次级抗体库.结论:本研究成功构建抗蛔虫人源单链抗体库,拟在为蛔虫病的预防、诊断、治疗奠定基础.
- 何光志田维毅高英王平王文佳奚锦俞琦王乾宇黄高
- 关键词：蛔虫单链抗体
- 手性柱在对映体药物分离中的应用
- 2007年
- HPLC法是对映体药物的重要拆分方法之一,手性柱的选择是拆分成败的关键,对映体药物拆分中常用到的手性柱主要有高分子聚合物型手性柱(直链淀粉类、纤维素衍生物类、蛋白质类)、空穴型手性柱(环糊精类、冠醚类)以及其它非聚合物型手性柱(P irkle型、大环抗生素类、生物碱类等),它们应用于不同的对映体药物拆分均取得良好的效果。
- 王颖曹娟奚锦
- 关键词：手性柱
- 贵州野生天麻抗真菌肽基因表达载体的构建被引量：1
- 2011年
- 为了构建凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf)的表达载体,经BamHI和HindIII酶切的pMD18-T-gaf和pET32a(+)质粒的纯化回收产物并进行连接,连接产物pET32a(+)-gaf转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,采用菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析。结果表明:构建的凤冈野生天麻抗真菌肽基因表达载体通过菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析,目的片段成功插入载体,目的片段与预期的gaf基因大小(545 bp)相符。试验成功构建了贵州野生天麻抗真菌肽基因表达载体,pET32a(+)-gaf可以用来制备抗真菌蛋白。
- 何光志田维毅王平王文佳奚锦愈奇刘蕾黄高蔡琨韩洁王乾宇刘安胜安传伟查高武张鹏
- 关键词：野生天麻抗真菌肽基因
- 抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库的构建及筛选
- 2012年
- 为了构建重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库,试验用重组蛋白AD41抗原免疫接种Balb/c小鼠,提取小鼠脾脏总RNA,以总RNA为模板经RT-PCR合成cDNA,再以cDNA为模板,用小鼠免疫球蛋白重链和轻链设计引物,分别扩增重链和轻链可变区基因,利用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成单链抗体(ScFv)片段,将其克隆入质粒表达载体pCANTAB5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库。结果表明:从30个噬菌体克隆中筛选到25个阳性克隆。说明成功地构建了抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库。
- 何光志王文佳田维毅王平奚锦俞琦黄高蔡琨王乾宇
- 关键词：猪蛔虫单链抗体库抗原
- 重组蛔虫ALAg蛋白抗原检测抗蛔虫抗体间接ELISA方法
- 本发明公开了一种重组蛔虫ALAg蛋白抗原检测抗蛔虫抗体间接ELISA方法，该方法以蛔虫成虫虫体或者感染性虫卵的RNA为模板，利用RT-PCR扩增出ALAg基因，构建ALAg表达载体并转化表达菌进行诱导表达，纯化重组蛋白，...
- 何光志田维毅安传伟王平黄高王文佳俞琦奚锦王乾宇
- 文献传递
