孙建华
- 作品数：5 被引量：22H指数：3
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区重大科技专项国家级星火计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪2型圆环病毒新疆株全基因组的克隆与序列分析
- 2012年
- 根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)的核苷酸序列,设计了一对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出一株PCV2全基因组,将其克隆到pMD simple18-T载体上,筛选获得了重组质粒pMD18-T-PCV2。对此重组质粒进行序列测定及同源性分析,结果表明,该PCV2新疆株的全基因组大小为1 767bp,与其它PCV2核苷酸序列同源性为95.0%～99.6%,而与PCV1的同源性仅为76.8%～76.9%。
- 吴星星郭春娟王璐宫玉玲孙建华冉多良
- 关键词：猪2型圆环病毒全基因组
- H3N8亚型马流感病毒HA1基因原核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2013年
- 采用RT-PCR方法从马流感病毒中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)中扩增的HA1基因片段,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,测序正确后转化入Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌表达出约53ku,以沉淀性形式存在的重组蛋白,且在37℃,0.4mmol/L IPTG条件下诱导8h表达效果最好。表达产物经切胶纯化后得到纯度较高的目的蛋白。经Western-blot分析,表达的蛋白与抗马流感病毒阳性血清发生特异性反应,证实该蛋白具有良好的反应原性。
- 何晶马伟孙建华徐泉源冉多良
- 关键词：H3N8亚型马流感病毒HA1基因克隆原核表达
- 牛白细胞介素-4真核表达载体的构建及免疫佐剂效应研究
- 2013年
- 应用RT-PCR技术从植物血凝素(PHA)活化的牛外周血淋巴细胞中扩增出牛白细胞介素4(IL-4)特异性目的片段,将其克隆到真核表达载体pVAX1,双酶切及测序鉴定正确后,将构建好的重组质粒pVAX1-IL-4应用脂质体LipofectamineTM2000转染至293T细胞,经RT-PCR检测IL-4可进行转录表达,且MTT检测其具有生物学活性,表明IL-4在转染细胞中可以成功表达。然后将构建好的pVAX1-IL-4作为基因佐剂来研究其对牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVD)核酸疫苗pVAV1-E0的免疫增强作用。经ELISA和MTT检测结果表明,pVAX1-IL-4同pVAV1-E0联合免疫组小鼠的特异性抗体水平、淋巴细胞增殖水平与pVAV1-E0单疫苗免疫组相比差异显著(P<0.05)。证明重组质粒pVAX1-IL-4可作为佐剂与核酸疫苗共同作用来提高后者的免疫原性。
- 宫玉玲王克栋孙建华熊浩石明冉多良
- 关键词：克隆真核表达白细胞介素-4293T细胞免疫佐剂
- 马疱疹病毒1型gD基因主要中和抗原区原核表达载体的构建和表达被引量：5
- 2013年
- 根据GenBank上已发表的马疱疹病毒1型(EHV-1)和马疱疹病毒4型(EHV-4)gD基因序列,设计一对特异性引物。将扩增的EHV-1gD基因片段克隆至pET-30a表达载体,筛选获得重组质粒pET-30a-gD。经鉴定证明pET-30a-gD原核载体构建成功。将其转化入BL-21大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,并对培养时间、IPTG诱导浓度等培养条件进行优化,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示pET-30a-gD获得了高效融合表达,其表达的蛋白分子量约为29kD。Western blot分析结果表明,显示获得的融合蛋白与EHV-1/EHV-4阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性。
- 孙建华何晶石明徐全圆杨夷平冉多良
- 关键词：原核表达GD基因
- 新疆部分地区马鼻肺炎的血清学调查被引量：15
- 2014年
- 为了解新疆马鼻肺炎(ER)的流行情况,利用间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)对2012年—2013年采自新疆5个地区的3 195份马血清进行马鼻肺炎血清学流行病学调查。结果显示,3 195份马血清中共检出阳性血清1 237份,平均阳性率为38.71%,其中,马鼻肺炎在秋季的阳性率最高(45.85%),其次是夏季的阳性率(43.44%),冬季的阳性率最低(19.32%)。而且,XJ-C地2013年马鼻肺炎的阳性率显著低于2012年(P<0.01)。此次调查数据可为新疆马鼻肺炎的防控工作及马产业的健康发展提供参考。
- 李娜孙建华石明徐全圆杨夷平刘建华加尔肯冉多良
- 关键词：马鼻肺炎血清流行病学调查间接ELISA
