孙钒
- 作品数：19 被引量：45H指数：3
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 苏云金芽孢杆菌两株溶原性噬菌体的生物学特性被引量：3
- 2007年
- 研究苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的溶原性及其噬菌体的生物学特性，从生产菌株MZI中分离了两株溶原性噬菌体。MZI经诱导后产生直径约为3mm和1mm的噬斑，分离获得属长尾噬菌体科的噬菌体MZTP01和MZTP02两株；分别对6株和7株不同亚种的Bt菌株具有侵染力；免疫血清与相应噬菌体的中和反应K值分别为45和326，且两者无相关抗原性。MZTP01抵抗酸、碱、紫外线和热的能力比MZTP02强，但抵抗有机溶剂的程度比MZTP02弱。MZTP01的潜伏期为80min，裂解量为55；MZTP02的潜伏期为40min，裂解量为175。核酸结构分析均表明为线性dsDNA分子。两基因组DNA的凝胶电泳表明分子量均在9．4-23kb之间，并被Hind Ⅲ酶切分别产生8条和9条清晰条带。该菌株被证明为二元溶原菌，可能是造成生产损失的主要原因；为防治溶原性噬菌体提供了生物学信息。
- 廖威孙钒宋少云石微庞义艾云灿
- 关键词：苏云金芽孢杆菌噬菌体生物学特性
- 苏云金杆菌辅助蛋白P19对杀虫晶体蛋白Cry11Aa表达的影响被引量：2
- 2006年
- 苏云金杆菌以色列亚种的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操纵子上,据推测辅助蛋白P19可能与Cry11Aa蛋白的晶体化相关。本研究利用穿梭载体pHT3101构建了两个重组质粒pHcy1和pHcy3,两质粒均携带cry11Aa基因,但后者完全缺失了cry11Aa基因上游的p19基因。将重组质粒电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株4Q7中进行蛋白表达,SDS-PAGE结果表明在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)中均能检测到正常表达的Cry11Aa蛋白,但单位体积培养液的Cry11Aa蛋白在辅助蛋白P19存在时的表达量明显高于其单独表达的表达量;透射电镜观察显示两菌株中的Cry11Aa蛋白形成了大小相近、形状相似的双梯形晶体;另外,生物测定结果表明重组菌株4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)对三龄致倦库蚊的杀虫活性没有显著性差异。该现象说明辅助蛋白P19的缺失对Cry11Aa蛋白的晶体形成和杀蚊活性没有影响,但P19作为分子伴侣在一定程度上帮助提高了Cry11Aa蛋白的表达水平。
- 师永霞曾少灵袁美妗孙钒庞义
- 关键词：苏云金杆菌生物测定
- 苏云金芽孢杆菌的cry2A芽孢期启动子和分子伴侣ORF1-ORF2对Cry11Aa蛋白表达的影响被引量：1
- 2008年
- 【目的】分析苏云金芽孢杆菌的cry2A型芽孢期启动子对晶体蛋白Cry11Aa的协调作用和分子伴侣ORF1-ORF2对Cry11Aa表达的促进功能。【方法】3个包括cry11Aa编码区的重组质粒pHcy1、pHcy2和pHcy4被构建并电激转化到苏云金芽孢杆菌晶体缺陷株4Q7中,其中pHcy1质粒携带cry11Aa基因自身启动子和分子伴侣p19基因,pHcy2携带cry2A型芽孢期启动子和分子伴侣orf1-orf2基因,pHcy4质粒在pHcy1的上游插入了cry2A型芽孢期启动子和分子伴侣orf1-orf2基因。SDS-PAGE分析了Cry11Aa蛋白在各重组苏云金菌株中的表达情况,并通过生物测定确定了其对蚊虫的生物活性。【结果】SDS-PAGE结果表明,Cry11Aa蛋白在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy4)均获得了表达,在4Q7(pHcy2)中未检测到Cry11Aa蛋白,推测晶体蛋白Cry11A不能利用cry2A型启动子进行表达调控;Cry11Aa蛋白在等体积4Q7(pHcy4)培养液中的表达量是4Q7(pHcy1)菌株的1.25倍,暗示着分子伴侣ORF1-ORF2在某种程度上能提高Cry11Aa的蛋白表达量。4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy4)形成的Cry11Aa蛋白晶体的形状和大小相似,两者对致倦库蚊的生物活性没有明显差异,LC50s分别为59.33ng/mL和66.21ng/mL。【结论】推测晶体蛋白Cry11A能否成功表达与其使用启动子的类型和两者的协调配合有关。分子伴侣ORF1-ORF2虽然在某种程度上能提高Cry11Aa的蛋白表达量,但对提高Cry11Aa蛋白的杀蚊毒力没有显著性帮助。
- 师永霞曾少灵袁美妗孙钒庞义
- 关键词：苏云金芽孢杆菌分子伴侣
- 苏云金芽孢杆菌以色列亚种cyt1 Aa基因在球形芽孢杆菌中表达被引量：2
- 2000年
- 将编码cyt1Aa基因和 p2 0蛋白基因的DNA片段分别克隆连接于两个不同的穿梭载体 pBU 4和pMK 3上 ,构建了重组质粒 pBA 30和 pMA 6,通过电击法 ,将重组质粒分别转化 B .s野生株2 2 97,获得了转化菌株Bs 97 30和Bs 97 6。SDS PAGE和Westernblot分析证实了cyt1Aa基因在转化菌株Bs 97 30中获得了表达 ,而在转化菌株Bs 97 6中未检测到cyt1Aa基因表达的蛋白。转化菌株Bs 97 30中 ,cyt1Aa基因与B .s二元毒素基因同步于菌体生长的对数期起始表达 ,并持续至芽孢形成。生测结果表明 ,转化菌株Bs 97 30中cyt1Aa基因的表达并未明显增强其对敏感和抗性致倦库蚊幼虫的毒力。其原因可能是弱毒性的 cyt1Aa蛋白在转化菌株中的表达量不高。
- 李田勇孙钒袁志明张用梅余健秀庞义
- 关键词：苏云金芽孢杆菌以色列亚种球形芽孢杆菌基因表达
- 四株球孢白僵菌对红火蚁的毒力测定
- 红火蚁(Solenopsis invicta)是一种危险性的外来入侵生物,原产于南美洲巴拉那河流域,2005年首次在我国广东省吴川县发现,目前己扩散到广东、广西、湖南、福建等省。红火蚁的防治目前主要采用化学杀虫剂,生物防...
- 杨佳后孙钒庞义
- 文献传递
- 球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌以色列亚种杀蚊毒素间的协同作用被引量：3
- 2000年
- 本研究测定了分别表达苏云金芽孢杆菌Cry4Aa、Cry4Ba、Cry11Aa、Cyt1Aa和球形芽孢杆菌二元毒素Bin的转化菌株Bt B60 1、Bt B611、Bt B640、Bt U 30和Bt CW 3全发酵培养物两两或两两以上不同组合对抗性库蚊的毒力 ,分析了杀蚊毒素间的协同作用。结果表明 ,Bin和Cry4Aa、Bin和Cry 4Ba间有明显的协同作用 ,此外 ,Cry4Aa和Cry4Ba、Cry4Aa和Cry11Aa。
- 孙钒袁志明张用梅余健秀庞义
- 关键词：苏云金芽孢杆菌球形芽孢杆菌
- 球形芽孢杆菌C_3—41菌株胞外蛋白酶特性
- 1997年
- 球形芽孢杆菌能够合成具杀蚊活性的蛋白晶体,该晶体在蚊中肠碱性条件下降解产生毒性,尽管球形芽孢杆菌蛋白酶与杀蚊毒素的降解无关,但它在球形芽孢杆菌杀蚊制剂的产生中有重要意义。同时球形芽孢杆菌产生的碱性蛋白酶具有潜在的医疗价值。 我们以本实验室分离的高效杀蚊菌C_3—41菌株为材料,研究了球形芽孢杆菌蛋白酶的产生特性及其理化性质,在国内尚属首次报道。
- 孙钒刘娥英张用梅
- 关键词：芽孢杆菌球形芽孢杆菌胞外蛋白酶
- 杀蚊细菌分子生物学和媒介昆虫免疫学研究
- 该文主要进行了构建对媒介昆虫蚊幼虫具有毒杀作用的苏云金芽孢杆菌工程菌,并且研究了一氧化氮与长红猎蝽免疫的关系.该研究包括以下几个方面:高效杀蚊工程菌的构建;脂多糖注射长红猎蝽的总硝酸盐和亚硝酸盐含量测定;长红猎蝽一氧化氮...
- 孙钒
- 关键词：球形芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌一氧化氮合成酶昆虫免疫
- 文献传递
- 苏云金杆菌辅助蛋白P20对营养期杀虫蛋白Vip3A表达的影响被引量：4
- 2006年
- 为检测苏云金杆菌辅助蛋白P20对Vip3A表达和杀虫活性的影响,将p20基因与vip3A基因相连构建了重组质粒pHVP20,然后电激转化至Bt中进行了共表达,以仅携带vip3A基因的质粒pHPT3作为对照质粒。Westernblot结果显示,当vip3A基因和p20基因在Bt无晶体缺陷株CryB中共表达时,Vip3A蛋白的最大表达量约是其在CryB(pHPT3)菌株中单独表达的1.5倍。生物测定结果表明,CryB(pHVP20)和CryB(pHPT3)菌株对初孵斜纹夜蛾幼虫的LC50值分别为48.79μg/mL和78.00μg/mL,这说明P20蛋白可以促进vip3A基因在Bt中的表达,但对提高Vip3A蛋白的杀虫毒力没有显著性帮助。
- 师永霞袁美妗陈建武孙钒庞义
- 关键词：苏云金杆菌营养期杀虫蛋白生物测定
- 用PCR法检测苏云金杆菌的溶原性噬菌体被引量：2
- 2006年
- 根据苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)溶原性噬菌体G IL01(GenBank Accession Number:AJ536703)的同源序列设计一对引物,用35株B.t标准菌株和生产菌株MZ1(血清型H3 a3b)的过夜培养物作模板,结果有16株菌株包括MZ1能扩增出大小约为750 bp的预期产物,推测这16株菌为溶原菌。MZ1菌株的过夜培养液与指示菌ZK1(血清型H25)混匀并在双层琼脂上培养12 h后出现了滴度为2×107pfu的噬菌斑,从而证明生产菌株MZ1确为溶原菌;又以G IL01同源性较高的其它四个基因设计引物,分别以MZ1的培养物及其溶原性噬菌体基因组为模板进行PCR扩增,结果两者得到几乎一致的带型,进一步证明了生产菌株MZ1为溶原菌,说明利用PCR法检测鉴定苏云金杆菌的溶原性是可行的。比较指示菌方法、直接电镜法和DNA鉴定法,PCR法快速简便,对B.t生产上快速检测其溶原性噬菌体有实用意义。
- 廖威宋少云陈维春薛清华孙钒艾云灿庞义
- 关键词：苏云金杆菌噬菌体
