孟巧
- 作品数：4 被引量：12H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅医学院分子生物学研究中心更多>>
- 发文基金：中华医学基金会基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 从K562细胞中筛选氯化血红素应答基因
- 氯化血红素(hemin)是一种重要的红系细胞分化诱导剂,可在体内及体外诱导红白血病细胞K562细胞的血红蛋白合成.Hemin诱导后表达上调的cDNA片段有:人类epsilon 1珠蛋白mRNA,人类自红蛋白Gγ(HBG2...
- 孟巧
- 关键词：K562细胞氯化血红素抑制消减杂交
- 文献传递
- K562细胞中氯化血红素诱导性表达基因的研究被引量：12
- 2003年
- 目的 鉴定K5 6 2细胞中氯化血红素 (hemin)诱导性表达基因。方法 分别提取经hemin诱导培养的K5 6 2细胞 (tester)和未加诱导剂培养的K5 6 2细胞 (driver)mRNA ,逆转录合成双链cDNA。采用抑制性消减杂交 (SSH)技术构建正向消减cDNA文库。筛选出阳性克隆。PCR扩增阳性克隆插入片段。反向Northern点杂交确定hemin诱导后表达上调的cDNA片段并测序后与GenBank序列进行Blast同源性比较分析。结果 发现 15个cDNA片段在hemin诱导后表达上调 ,其中大部分与GenBank中已知功能蛋白质的mRNA序列同源 ,包括珠蛋白epsilon 1(globinε1) ,类谷胱甘肽巯基转移酶Omega(GSTTLp2 8) ,含硒蛋白X1(SEPX1) ,磷酸丙糖异构酶 (TPI1) ,核糖体蛋白L7(RPL7) ,核糖体蛋白S13(RPS13) ,铁蛋白轻链 (ferritinLpolypeptide) ,珠蛋白gammaA(globinAγ) ,RAD5 1同系物C(RAD5 1C) ,铁蛋白重链 (ferritinHpolypeptide) ,X盒结合蛋白 (XBP1)。受hemin诱导性表达的基因克隆中的部分cDNA片段则同源于GenBank中已登录的mRNA序列 ,但相应蛋白质的功能尚不清楚 ,包括cDNADKFZp434I116 ,假定蛋白HSPC0 14及NOL1R2蛋白质。结论 hemin主要诱导K5 6 2细胞红系分化、蛋白质合成及代谢相关基因表达 。
- 陈汉春孟巧
- 关键词：白血病K562细胞氯化血红素抑制性消减杂交技术
- K562细胞消减cDNA文库的构建
- 2003年
- 目的 构建氯化血红素诱导性K5 62细胞抑制消减cDNA文库 ,以期鉴定出K5 62细胞中氯化血红素诱导性表达的珠蛋白合成调节因子cDNA基因。方法 采用不同浓度的氯化血红素诱导培养K5 62细胞 ,经联苯胺阳性细胞百分率及血红蛋白浓度分析 ,选择其最佳诱导浓度。分别提取氯化血红素诱导培养的K5 62细胞 (tester ,检测子 )和未加诱导剂培养的K5 62细胞 (driver ,驱赶子 )mRNA ,逆转录合成双链cDNA。经两轮消减杂交 ,两轮PCR扩增后 ,正向消减的PCR产物与T载体连接 ,构建K5 62细胞抑制消减cDNA文库 ,文库经蓝 -白筛选后 ,纯化阳性克隆质粒 ,EcoRⅠ酶切及PCR扩增插入片段。结果 以 5 0 μmol/L氯化血红素诱导K5 62细胞 ,其联苯胺阳性细胞百分率及血红蛋白浓度均达到最大值 ,故选择 5 0 μmol/L氯化血红素诱导培养K5 62细胞并构建K5 62细胞抑制消减cDNA文库。文库鉴定证实其阳性克隆中分别含有不同长度的插入片段。结论 成功构建了氯化血红素诱导性K5 62细胞抑制消减cDNA文库 ,该消减cDNA文库结合生物信息学 (Bioinformatics)分析可用于深入研究K5
- 陈汉春孟巧王吉伟
- 关键词：K562细胞抑制性消减杂交CDNA文库
- K562细胞中氯化血红素应答基因的鉴定
- 氯化血红素(hemin)是一种重要的红系细胞分化诱导剂,可在体内及体外诱导红白血病细胞株K562细胞的血红蛋白合成。前期研究证实经hemin诱导培养后的K562细胞抽提物能有效调节慢性粒细胞白血病(chronic mye...
- 陈汉春孟巧
- 文献传递
