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DNA聚合酶β靶向siRNA对PC3细胞生物学行为的影响被引量：1: 2011年; 目的:观察DNA聚合酶(pol)β靶向siRNA表达载体转染人前列腺癌PC3细胞对细胞生物学行为的影响。方法:采用已构建的DNA polβ靶向siRNA真核表达载体(pSUPERneoGFP-PS1、pSUPERneoGFP-PS2和pSU-PERneoGFP-CS),利用脂质体包裹转染PC3细胞,并设未转染组和转染空pSUPERneoGFP组。观察各组DNA polβmRNA和蛋白的表达及相应的细胞周期和自发突变率等细胞生物学行为的变化。结果:转染pSUPERneoGFP-PS1和pSUPERneoGFP-PS2可沉默PC3细胞DNA polβ蛋白的表达。5组间DNA polβmRNA表达的比较,差异有统计学意义(F=126.264,P<0.001);转染pSUPERneoGFP-PS1和pSUPERneoGFP-PS2组细胞较未转染、转染空pSU-PERneoGFP和转染pSUPERneoGFP-CS组显著降低(P<0.05)。5组间S期细胞比例和自发突变率比较,差异有统计学意义(F=72.501和6.860,P<0.05);转染pSUPERneoGFP-PS2组细胞S期比例及自发突变率较对照组显著降低,而转染pSUPERneoGFP-PS1细胞S期比例及自发突变率显著高于对照组(P<0.05)。结论:适宜的DNA polβ低水平表达是PC3细胞遗传稳定性维持所依赖的。; 王明臣蒋薇薇张善锋王好东宋宇赵勤董子明; 关键词：DNA聚合酶Β RNA干扰细胞周期

前列腺癌特异突变DNA聚合酶β真核表达载体构建及鉴定被引量：2: 2009年; 目的构建前列腺癌(PCa)特异突变DNA聚合酶β(polβ)真核表达载体。方法提取有特异DNApolβ突变的PCa组织的总RNA,通用引物逆转录成cDNA;用设计带有接头的DNA polβ全基因引物,PCR扩增PCa组织中呈现的突变型DNApolβ全基因;构建T-A克隆并进行重组体的筛选鉴定;亚克隆入表达载体pcDNA3.1并进行重组体的筛选和鉴定。结果PCa特异突变DN Apolβ基因扩增选择出P4(M1-polβ)和P5(M2-polβ)两个标本,构建重组有特定突变位点的polβ目的基因的pcDNA3.1真核表达载体,经PCR扩增获得2个阳性集落。结论经鉴定成功构建2例PCa特异突变DNApolβ真核表达载体(pcDNA3.1-M1 and pcDNA3.1-M2)。; 王明臣宋宇张善锋付蕾文明赵勤金国平赵国强; 关键词：前列腺癌 DNA聚合酶Β 基因突变真核表达载体

前列腺癌特异突变DNA聚合酶β表达载体转染NIH3T3的细胞生物学行为变化被引量：1: 2010年; 目的观察前列腺癌(CPa)特异突变DNA聚合酶β(polβ)表达载体转染NIH3T3的细胞生物学行为变化。方法采用业已成功构建的2例特异突变polβ表达载体(pCDNA3.1-M1和pCDNA3.1-M2),采用脂质体包裹转染NIH3T3细胞,观察比较这些突变对细胞polβ基因mRNA和蛋白表达的影响以及引发的相应的细胞周期和细胞自发突变率等细胞生物学行为的变化。结果筛选得到高表达PCa特异突变polβ的NIH3T3细胞株(NIH3T3-M1,NIH3T3-M2)和高表达野生型polβ的NIH3T3细胞株(NIH3T3-W)。RT-PCR和Western印迹结果显示,外源DNApolβ在转化的NIH3T3细胞中呈现高表达。与转染空载体和未转染的NIH3T3细胞相比,转染PCa特异突变polβ的2个细胞株和转染野生型polβ的细胞株的细胞周期的S期比例及转染细胞的HGPRT(次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)基因的自发突变率均显著增加,且转染野生型polβ的细胞株亦显著高于转染PCa特异突变DNApolβ的细胞株。结论 DNApolβ高表达介导了肿瘤发生的分子机制。; 王明臣霍玉奇张善锋宋宇赵勤金国平董子明; 关键词：前列腺癌 DNA聚合酶Β NIH3T3

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宋宇