张东旭
- 作品数：22 被引量：126H指数：7
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程农业科学更多>>
- 液体培养中Streptomyces hygroscopicus产谷氨酰胺转胺酶的活化过程受内源蛋白酶及内源蛋白酶抑制因子调控
- 谷氨酰胺转胺酶(Transglutaminase,TGase)是一种通过形成异肽键[ε-(γ-谷氨酰)赖氨酸]来催化蛋白质或多肽链之同的酰基转移反应的酶系.微生物TGase最早是作为食品加工用酶制剂引起人们重视的,它在纺...
- 张东旭崔莉程力刘和堵国成陈坚
- 关键词：谷氨酰胺转胺酶
- 文献传递
- 用筛选抗分解代谢阻遏突变株法选育谷氨酰胺转胺酶的高产菌株被引量：3
- 2009年
- 以吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)CCTCCM203062为出发菌株,采用N离子注入和紫外诱变处理,得到MTG酶活达到7.19U/ml的高产菌株BB-2。对BB-2再进行紫外诱变,选育出具有较好稳定遗传性的抗2-脱氧-D-葡萄糖的高产突变株DG-1,酶活达到9.21U/ml,比出发菌株提高了118.5%。
- 许晓娟李江华张东旭陈坚堵国成
- 关键词：谷氨酰胺转胺酶吸水链霉菌紫外诱变
- 吸水链霉菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶的补料研究被引量：2
- 2009年
- 在吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)分批发酵研究的基础上,通过在菌体生长阶段指数流加葡萄糖,进行高细胞密度培养,获得了较高的菌体量;待菌体生长进入产酶期后,通过补加氮源,为产酶提供充足的氮源,其中通过流加蛋白质氮源,可以减少蛋白酶对成熟MTG的分解,促进产酶。结果表明,8～16h采用较高的的比生长速率(0.15h-1),后期降低比生长速率(0.10h-1),此时得到的菌体量较高,可达到36g/L,比分批发酵下的菌体量提高了80%。同时在培养基中添加50g/L的豆饼粉,最终酶活可达到5.79U/ml,提高了83%。
- 许晓娟张东旭王淼李江华陈坚堵国成
- 关键词：吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶氮源
- Streptomyces hygroscopicus WSH03-13产谷氨酰胺转胺酶发酵过程优化及放大
- 对影响Streptomyces hygroscopicus WSH03-13产谷氨酰胺转胺酶（MTG）的重要因素进行了优化，确定在7 L发酵罐上最佳的工艺条件是：斜面培养21天，种龄28小时，发酵初始pH 7.0，接种量...
- 张东旭刘和张程杰崔莉黄亮陈坚
- 关键词：谷氨酰胺转胺酶发酵工艺发酵罐
- 文献传递
- 超滤法浓缩谷氨酰胺转胺酶的影响因素研究被引量：1
- 2006年
- 对微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)超滤浓缩的工艺条件进行了探讨及优化。实验采用截留分子量为30 kDa的聚醚砜(PES)膜,当发酵液初始pH为7,超滤浓缩倍数为4倍时,可以得到理想的MTG回收率。同时对超滤液中蛋白酶的变化进行了分析,发现随着超滤倍数的提高蛋白酶也逐渐提高,但在浓缩4倍以后达到较稳定的水平。聚醚砜(PES)超滤膜使用后用稀释的NaOH溶液浸泡清洗处理50 min后,膜通量可以恢复98.12%。
- 黄亮刘和张东旭崔莉堵国成陈坚
- 关键词：超滤
- 超滤法浓缩谷氨酰胺转胺酶的影响因素研究
- 膜分离技术具有物质不发生相态变化、不消耗相变能、耗能耗质少、效率高的特点,可用生物活性物质如酶的浓缩和分离过程。采用膜分离技术不仅酶活损失小,而且操作简单,易于实现工业规模生产放大。膜技术与酶催化合成、遗传工程、超临界萃...
- 黄亮刘和张东旭崔莉堵国成陈坚
- 文献传递
- 微生物谷氨酰胺转胺酶制备过程中蛋白酶的抑制研究被引量：6
- 2005年
- 针对微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)制备过程中含有蛋白酶的问题,研究了抑制蛋白酶活性的方法,确定了以六偏磷酸钠作为MTG酶制剂中的蛋白酶抑制剂,并且考察了六偏磷酸钠的最小有效添加量。在喷雾干燥前添加六偏磷酸钠可以有效地抑制蛋白酶的活力,可以达到酶制剂的应用要求。酪蛋白交联实验与凝胶电泳实验验证了添加六偏磷酸钠不会影响MTG对蛋白质的交联作用。
- 黄亮张东旭刘和崔莉堵国成陈坚
- 关键词：蛋白酶抑制剂六偏磷酸钠
- Paecilomyces sp. S152胞外漆酶的合成调控被引量：2
- 2010年
- 探索了不同碳氮源营养条件下,Paecilomyces sp.S152胞外漆酶的分泌情况,发现麦芽糖(20 g/L)、大豆蛋白胨(10 g/L)及酵母粉(1 g/L)最适于Paecilomyces sp.S152胞外漆酶的合成,发酵7～8 d后,漆酶酶活达到5064 U/L。研究发现Paecilomyces sp.S152漆酶在细胞内及细胞外均有分布,添加1.5 g/L的Tween 80可促进胞内漆酶的释放,提高胞外漆酶酶活,缩短发酵周期(6 d),生产强度提高至946 U/(L·d)。
- 刘志钰张东旭堵国成陈坚
- 关键词：拟青霉胞外漆酶营养条件同工酶
- Streptomyces hygroscopicus谷氨酰胺转胺酶酶原基因的鉴定及在大肠杆菌中的表达被引量：10
- 2008年
- 【目的】鉴定来源于吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶基因;研究其在大肠杆菌系统的克隆与表达;分析该酶与其同源酶的活性中心氨基酸序列。【方法】从本实验室筛选的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus;CCTCC M203062)发酵液中,分离纯化得到谷氨酰胺转胺酶酶原(pro-MTGase),测得N-端前十个氨基酸序列并与其它链霉菌来源的相应基因序列比较设计引物,扩增得到pro-MTGase基因,将该基因插入到表达载体pET-20b(+)信号肽pelB下游,构建分泌型表达载体pET/pro-MTG,并转化不同的大肠杆菌宿主BL21(DE3)和Rosetta(DE3)pLysS。【结果】获得了pro-MTGase的完整基因序列,多重碱基序列比对表明其与S.platensis和S.caniferus的pro-MTGase基因同源性高达92%。利用Rosetta(DE3)pLysS通过降温至24℃诱导策略,获得部分胞外表达的酶原。SDS-PAGE显示,胞外表达重组蛋白的分子量约为44kDa,与吸水链霉菌表达的天然酶原相符。诱导4h后发酵液中的重组酶原经胰蛋白酶活化为成熟酶后测得最高酶活为0.24U/mL。【结论】该研究是对吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶基因的首次报道,也是国内首次利用大肠杆菌实现pro-MTGase的胞外可溶性表达。
- 任增亮张东旭俞梅英赵庆新堵国成陈坚吴敬
- 关键词：吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶大肠杆菌克隆
- 碱性果胶酶的生物制造及其在纺织工业清洁生产中的应用研究进展被引量：15
- 2009年
- 以下综述了碱性果胶酶的生物制造及其在纺织工业清洁生产中的应用研究进展。微生物发酵法是目前生产碱性果胶酶的主要方式,枯草芽孢杆菌是碱性果胶酶工业发酵生产中效果较好的野生菌株。影响发酵法生产碱性果胶酶的主要因素有:底物浓度及其流加方式、细胞浓度、搅拌转速、通气速率、pH、温度等。构建基因工程菌为碱性果胶酶的发酵生产开辟了一条有效途径,其中重组毕赤酵母的产酶水平最高,在10吨发酵罐上酶活达1305U/mL。碱性果胶酶可用于棉织物前处理的精练工艺,与传统高温碱煮相比,具有保护纤维、提高精练效率、降低能耗和污染的优势。通过分子定向进化技术对碱性果胶酶进行分子改造,使其催化特性更加适合于纺织精练工艺,进而实现纺织工业的清洁生产是未来的研究重点和热点。
- 刘龙汪志浩张东旭李江华堵国成陈坚
- 关键词：碱性果胶酶发酵法生产重组毕赤酵母
