张同海
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 供职机构：天津医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒的构建被引量：5
- 1994年
- 生长激素（ＧＨ）是动物垂体前叶分泌的一种多肽类激素．应用分子重组及ＰＣＲ等技术，构建了一种鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒ｐＯｓＧＨ１５３，使编码鲑鱼生长激素成熟肽的序列克隆在大肠杆菌分泌型表达载体ＰＩＮ－Ⅲ－ｏｍｐＡ内，直接位于编码大肠杆菌外膜蛋白Ａ信号肽序列的下游，在Ｌｐｐ－Ｌａｃ杂合启动子控制下，经ＩＰＴＧ诱导，分子量约２３０００的鲑鱼生长激素在大肠杆菌中获得高效表达，该产物具有天然鲑鱼生长激素的免疫活性，直接分泌到细胞周质，而信号肽被自动剪除．
- 张同海宋诗铎赵为诚陈昆明祁伟胡文芝王培福方佩华
- 关键词：鲑鱼生长激素分泌型表达质粒
- 应用电激法在大肠杆菌中导入外源性DNA被引量：7
- 1993年
- 本文报道用国产基因导入脉冲仪(LN-101型),采用高压脉冲电场,将质粒DNA和噬菌体DNA成功地转化或转导入大肠杆菌。该电场单次电压脉冲范围1.0kV—2.5kV(初电场强度2.8kV/cm—16kV/cm)、电容范围5—20μF,用质粒pUC18和受体菌株DH5α,获得10~9—10^(10)转化子/μgDNA。电场强度、电容及脉冲时间等不同的因素影响转化效率。转化率与DNA的强度呈线性关系,与受体细胞密度成正比。DNA和受体菌混合物在电激前、后的孵育时间,对转化效率影响不明显。用噬菌体M13mp 19 RF及受体菌株JM109,同样可获得较高的转化效率。
- 宋诗铎张同海祁伟赵为诚徐宝强刘建民
- 关键词：DNA转导大肠杆菌
- 高效液相色谱法测定UNASYN的血药浓度被引量：1
- 1991年
- 建立了反相离子对高效液相色谱法测定Unasyn中氨苄青霉素血药浓度。样品经酸法转入有机相,在中性条件下转入水相。色谱柱ODS-C18反相柱,流动相:甲醇/水(36/65)含0.01mol/L四甲基氯化铵,pH3.5。采用UV检测器,(λ=206nm)得出检测下限0.02μg,最低检出血药浓度1.0μg/ml,线性范围3.125-50μg/ml,抽提效率82.55％。本方法简便、灵敏、专一、适合用于Unasyn血药浓度测定。
- 官兰王培福胡文芝张同海李立津毛伟光
- 关键词：UNASYN氨苄青霉素血药浓度
- 应用聚合酶链反应改造鲑鱼生长激素cDNA被引量：2
- 1992年
- 为了在大肠杆菌中表达天然序列的鲑鱼生长激素基因,本研究应用聚合酶链反应扩增方法改造镇鲑鱼生长激素cDNA,成功地扩增出编码鲑鱼生长激素成熟肽的序列,并在该序列的5′端和3′端分别引入EcoRI和BamH1的识别序列,使之便于进入载体,获得亚克隆。结果表明:应用聚合酶链反应扩增及分子克隆方法改造鲑鱼生长激素cDNA较传统的DNA重组方法简便,效率高。文中对聚合酶链反应扩增中非预期突变进行了讨论。
- 宋诗铎张同海祁伟赵为诚王培福胡文芝李立津
- 关键词：聚合酶链反应CDNA鲑鱼生长激素
- 牛泌乳素mRNA的分离及鉴定被引量：2
- 1992年
- 本文报道了从牛脑垂体提取总RNA,经寡聚脱氧胸苷纤维素亲合层析分离获得牛脑垂体Poly(A)^+RNA。牛泌乳素mRNA经含羟甲基汞琼脂糖凝胶电泳分析,估计其长度约为1200个核苷酸。根据牛泌乳素的部分氨基酸序列推断并合成寡聚核苷酸探针,经Northern印迹杂交及放射自显影分析,证实了该mRNA中含有牛泌乳素mRNA的序列。在兔网织红细胞体外翻译体系中,牛泌乳素mRNA促进了~35S-甲硫氨酸参入,翻译合成的初级翻译产物能与兔抗羊PRL抗血清发生特异性免疫沉淀反应,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影分析结果表明,牛泌乳素前体的分子量约25000。
- 张同海宋诗铎李立津祁伟胡文芝王培福陈昆明方佩华
- 关键词：MRNA
