张学明
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学农学院更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 大豆豆荚特异性启动子的克隆及功能分析被引量：7
- 2014年
- 【目的】克隆大豆豆荚特异性启动子,并对其进行功能分析,为研究抗病虫基因在大豆荚中的特异性表达奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆得到豆荚特异性启动子(Pod Specific Promoter,PSP)的核心序列,用PSP序列取代质粒pBI121中的CaMV 35S启动子,构建与GUS基因融合的豆荚特异性报告载体pPSP-GUS,通过农杆菌介导法转化烟草"NC89",对转基因植株进行分子生物学检测,将鉴定为阳性的植株经GUS组织化学染色,验证PSP片段的功能。【结果】所获得的豆荚特异性启动子PSP大小为1 270bp,与已报道序列的同源性为98%,具有多种典型的启动子表达调控元件,如A/T-rich core、CAATBOX、TATABOX、GATABOX等。将pPSP-GUS质粒转化烟草后,经PCR和Southern blot检测结果显示,成功获得了转基因阳性烟草植株。GUS活性检测结果显示,在转pPSPGUS质粒的烟草根和叶片中均未检测到GUS活性,在萼片中可检测到低水平的GUS活性;而在花荚中可检测到高水平的GUS活性,且明显高于转pBI121质粒的对照植株。【结论】克隆得到的豆荚特异性启动子PSP片段具有启动基因在豆荚中特异性表达的功能。
- 宋阳王丕武张学明曲静
- 关键词：大豆GUS染色
- 植物广谱抗病基因NPR1的研究进展被引量：3
- 2013年
- NPR1基因是影响植物广谱抗病性发生的重要调控因子,它主要调控病程相关蛋白的表达,对提高植物的抗病能力极为重要。目前对NPR1的研究已成为植物抗病基因工程的热点领域之一,但对其种类和同源基因等方面的研究却鲜有报道。因此,本文对NPR1基因的结构、功能、分类和最新的应用情况进行综述,对未来的发展趋势进行展望,为进一步丰富NPR1基因的研究提供一定的参考。
- 宋阳王丕武张学明曲静
- 关键词：NPR1基因
- 大豆凝集素和脂肪氧化酶双价RNAi表达载体的构建及其遗传转化被引量：1
- 2015年
- 【目的】应用RNA干扰技术，同时抑制大豆凝集素（Soybean agglutinin，SBA）和脂肪氧化酶（Lipoxy—genase，Lox）基因在种子中的表达，改良大豆营养品质，为培育优质大豆材料奠定基础。【方法】根据RNAi原理，酶切获得Lox目的片段，构建以除草剂Bar基因为筛选标记、种子特异性启动子P7aP启动SBA和Lox双干扰的pCAMBIA3301-SBA—Lox（pSBA—Lox）干扰表达载体，并通过农杆菌介导法转化大豆（品种为吉农28），采用PCR、Southern杂交和实时荧光定量PCR对转基因植株进行检测。【结果】质粒PCR和酶切鉴定结果表明，双价RNAi植物表达载体pSBA-Lox构建成功。将其转入到大豆中，对转化植株进行PCR、Southern杂交检测，结果显示，外源基因以单拷贝形式整合到植物基因组中，并能遗传给后代。T1代转基因植株的实时荧光定量PCR分析显示，转基因植株中SBA基因和Lox基因在籽粒中的表达量比未转化受体植株均明显降低，SBA基因表达量降低了35．9％～47．2％，Lox基因表达量降低了32．8％～56．1％，而在幼嫩叶片中的表达量相比对照植株变化不大。【结论】获得了大豆凝集素和脂肪氧化酶表达量均明显降低的T2代转基因大豆。
- 张学明宋阳王丕武马建晏佳琳付永平曲静张卓董环宇李琦
- 关键词：大豆凝集素脂肪氧化酶RNA干扰技术
