张少华
- 作品数：98 被引量：99H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子Ts-serpin-2对人THP-1细胞炎性细胞因子的表达影响被引量：1
- 2023年
- 为了深入研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子(Ts-serpin-2)对THP-1细胞炎性细胞因子分泌的调节作用,本实验通过RTPCR从猪带绦虫成虫扩增获得Ts-serpin-2(TsM_000807300)的编码序列CDS,利用毕赤酵母表达Ts-serpin-2重组蛋白。利用发色底物特异性反应检测Ts-serpin-2蛋白对猪胰蛋白酶、胰弹性蛋白酶、牛α-糜蛋白酶、猪胃蛋白酶、木瓜酶、凝血酶和组织蛋白酶G的抑制效果。重组蛋白Ts-serpin-2处理THP-1细胞24 h,应用qRT-PCR和ELISA方法检测各炎性细胞因子差异表达水平。结果显示,真核酵母表达的重组蛋白Ts-serpin-2分子量约为48 kDa,具有蛋白酶抑制活性,对牛α-糜蛋白酶、猪胰弹性蛋白酶及猪胰蛋白酶的活性均有明显的抑制作用。重组蛋白Ts-serpin-2可抑制LPS活化的THP-1细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12α、IFN-γ和iNOS2 mRNA的转录水平,促进IL-4刺激的THP-1细胞抗炎性细胞因子IL-10的表达。ELISA结果显示,Ts-serpin-2能够抑制巨噬细胞分泌致炎因子TNF-α、IL-6和IFN-γ,刺激IL-10的分泌,与qRT-PCR检测结果基本一致。上述研究结果表明猪带绦虫Ts-serpin-2可通过调节宿主巨噬细胞分泌的炎性因子影响虫体入侵过程中宿主的免疫应答。
- 毕研丽刘仲藜郭爱疆张少华王帅才学鹏
- 关键词：猪带绦虫真核表达THP-1细胞炎性细胞因子
- 寄生蠕虫胰岛素受体的研究进展
- 胰岛素受体家族是一类重要的受体酪氨酸激酶(RTKs)。作为起始胰岛素信号传导的第一步，胰岛素(insulin)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)作为配体分别结合至胰岛素受体(IR)与胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)...
- 杨锐张少华骆学农史云洁才学鹏
- 关键词：胰岛素胰岛素样生长因子蠕虫
- 一种可视化快速检测莫尼茨绦虫的RPA-LFD引物、探针、试剂盒及方法
- 本发明公开了一种可视化快速检测莫尼茨绦虫的RPA‑LFD引物、探针、试剂盒及方法，本发明首次在莫尼茨绦虫M‑β‑tubulin基因(GenBank：JN980967)的第550bp～899bp位点设计出最佳引物和探针组合...
- 张少华王帅张月玥牟文杰李慧敏邹扬
- 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts-serpin-1对人巨噬细胞THP-1的免疫调节功能研究被引量：1
- 2021年
- 主要研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts-serpin-1(WormBase:TsM_000065700)对宿主THP-1细胞的免疫调节作用。通过设计特异性引物和RT-PCR扩增技术,获得Ts-serpin-1编码序列,用qRT-PCR分析Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫的表达情况;构建pCold-Ts-serpin-1原核表达载体,诱导表达纯化重组蛋白Ts-serpin-1;用重组蛋白Ts-serpin-1处理THP-1细胞,采用qRT-PCR和ELISA方法检测Ts-serpin-1处理THP-1细胞后,各炎性细胞因子的变化情况。结果显示:获得的Ts-serpin-1目的基因长度为1149 bp,编码382个氨基酸,含有Serpin家族特有的反应中心环。Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫均表达,且成虫表达量显著高于幼虫。重组蛋白Ts-serpin-1的分子质量约为43 ku,可抑制THP-1细胞促炎性细胞因子IL-6、IL-1β、IL-12、TNF-α、IFN-γ和iNOS2的表达,促进抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β的分泌表达。以上结果提示,Ts-serpin-1在寄生虫-宿主互作过程中可能发挥重要作用。
- 毕研丽刘仲藜郭爱疆张少华王帅才学鹏
- 关键词：猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂免疫调节
- 鸡毒害艾美耳球虫LZ株MIC5基因的重组表达及其表达产物的抗原性分析被引量：6
- 2008年
- 根据已发表的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)微线蛋白5(Microneme protein 5,MIC-5)基因的核苷酸序列设计引物,以毒害艾美耳球虫(E.necatrix)DNA为模板,利用PCR方法扩增出EnMIC-5部分基因片段。将基因片段与pMD18-T simple载体连接,重组质粒测序结果表明EnMIC-5基因大小为1 470 bp,编码490个氨基酸。EnMIC-5与pET-28a(+)载体构建重组表达质粒pET-EnMIC-5,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE检测,表达产物为相对分子质量约57.5 ku的融合蛋白。Western-blot分析结果表明表达蛋白可被鸡感染E.necatrix阳性血清识别。用重组蛋白免疫昆明鼠,一免后15 d即可检测到相应抗体,且抗体在三免后40 d仍维持较高水平,证实重组蛋白具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体。
- 刘红霞贾万忠郭爱疆张少华闫鸿斌岳城才学鹏
- 关键词：毒害艾美耳球虫基因克隆免疫原性
- 猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立
- 囊尾蚴病(Cysticercosis)是危害严重的食源性人兽共患病之一。利用重组蛋白和合成肽作为替代抗原,是解决该病诊断抗原来源问题的一条理想途径。目的制备猪带绦虫囊尾蚴TS-CC18重组抗原并鉴定其抗原特性,建立猪囊尾...
- 张少华骆学农贾万忠郭爱疆景志忠才学鹏
- 关键词：猪囊尾蚴原核表达间接ELISA
- 文献传递
- 豆状带绦虫actin基因全长cDNA的克隆及序列分析
- Actin蛋白广泛存在于生物细胞中,其功能与肌肉的收缩和细胞分裂等运动有关。众多研究表明,actin基因在核苷酸、氨基酸水平上都具有高度的保守性,这暗示actin基因作为管家基因在动物生命活动过程中起着非常重要的作用。
- 骆学农张少华侯俊玲郭爱疆王秋霞才学鹏
- 文献传递
- 猪带绦虫亲环蛋白CyP的克隆表达与活性分析
- 亲环蛋白(cyclophilin,CyP)家族是一类在生物体内普遍存在,结构上高度保守的多功能蛋白质,其最初作为免疫抑制剂环孢素A(cyclosporin A,CsA)的细胞受体,其它功能还包括肽基脯氨酸顺/反异构酶活性...
- 张少华李雪强骆学农才学鹏
- 关键词：猪带绦虫亲环蛋白克隆表达抗体制备
- 兔豆状囊尾蚴Tp14基因的克隆及其序列分析被引量：1
- 2010年
- 为鉴定兔豆状囊尾蚴(C.pisiformis)合适的诊断或免疫用抗原,本研究根据带科其他种属绦虫14ku基因的保守区设计引物,利用RT-PCR从C.pisiformis总RNA中成功扩增出长度为261bp的基因片段,命名为Tp14,预测其编码87个氨基酸。对其核苷酸同源性分析表明,该基因序列与泡状带绦虫、细粒棘球蚴、猪带绦虫基因序列的相似性均大于85%,处于同一进化分支上,表明该基因具有种属特异性;同时通过生物信息学软件对其蛋白二级结构、疏水性及抗原表位等方面的预测,认为其有望成为诊断或免疫用抗原。
- 王秋霞张少华骆学农翟军军贾万忠张海瑞才学鹏
- 关键词：豆状囊尾蚴RT-PCR
- 猪带绦虫六钩蚴重组蛋白TSOL18与BSA偶连蛋白的制备被引量：2
- 2007年
- 应用异型双功能连接剂MBS(间-马来酰亚胺苯甲酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯)将猪带绦虫六钩蚴18ku重组蛋白(TSOL18)和载体蛋白-牛血清白蛋白(BSA)进行连接,制备连接蛋白BSA-TSOL18,用以增强TSOL18的免疫原性.连接蛋白利用快速脱盐柱分离技术进行纯化;纯化后应用醋酸纤维薄膜电泳证明二者的结合情况;并用间接ELISA法检测不同摩尔比连接产物中抗原部分的活性.结果表明:TSOL18与BSA偶连摩尔比为1∶3时连接有效,且对抗原活性影响小,可满足进一步免疫的要求.
- 张少华李克生景志忠杜惠芬骆学农才学鹏
- 关键词：猪带绦虫MBSTSOL18BSA
