张少华
- 作品数：105 被引量：103H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学经济管理更多>>
- 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子Ts-serpin-2对人THP-1细胞炎性细胞因子的表达影响被引量：2
- 2023年
- 为了深入研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子(Ts-serpin-2)对THP-1细胞炎性细胞因子分泌的调节作用,本实验通过RTPCR从猪带绦虫成虫扩增获得Ts-serpin-2(TsM_000807300)的编码序列CDS,利用毕赤酵母表达Ts-serpin-2重组蛋白。利用发色底物特异性反应检测Ts-serpin-2蛋白对猪胰蛋白酶、胰弹性蛋白酶、牛α-糜蛋白酶、猪胃蛋白酶、木瓜酶、凝血酶和组织蛋白酶G的抑制效果。重组蛋白Ts-serpin-2处理THP-1细胞24 h,应用qRT-PCR和ELISA方法检测各炎性细胞因子差异表达水平。结果显示,真核酵母表达的重组蛋白Ts-serpin-2分子量约为48 kDa,具有蛋白酶抑制活性,对牛α-糜蛋白酶、猪胰弹性蛋白酶及猪胰蛋白酶的活性均有明显的抑制作用。重组蛋白Ts-serpin-2可抑制LPS活化的THP-1细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12α、IFN-γ和iNOS2 mRNA的转录水平,促进IL-4刺激的THP-1细胞抗炎性细胞因子IL-10的表达。ELISA结果显示,Ts-serpin-2能够抑制巨噬细胞分泌致炎因子TNF-α、IL-6和IFN-γ,刺激IL-10的分泌,与qRT-PCR检测结果基本一致。上述研究结果表明猪带绦虫Ts-serpin-2可通过调节宿主巨噬细胞分泌的炎性因子影响虫体入侵过程中宿主的免疫应答。
- 毕研丽刘仲藜郭爱疆张少华王帅才学鹏
- 关键词：猪带绦虫真核表达THP-1细胞炎性细胞因子
- 寄生蠕虫胰岛素受体的研究进展
- 胰岛素受体家族是一类重要的受体酪氨酸激酶(RTKs)。作为起始胰岛素信号传导的第一步，胰岛素(insulin)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)作为配体分别结合至胰岛素受体(IR)与胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)...
- 杨锐张少华骆学农史云洁才学鹏
- 关键词：胰岛素胰岛素样生长因子蠕虫
- 一种可视化快速检测莫尼茨绦虫的RPA-LFD引物、探针、试剂盒及方法
- 本发明公开了一种可视化快速检测莫尼茨绦虫的RPA‑LFD引物、探针、试剂盒及方法，本发明首次在莫尼茨绦虫M‑β‑tubulin基因(GenBank：JN980967)的第550bp～899bp位点设计出最佳引物和探针组合...
- 张少华王帅张月玥牟文杰李慧敏邹扬
- 猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts-serpin-1对人巨噬细胞THP-1的免疫调节功能研究被引量：1
- 2021年
- 主要研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts-serpin-1(WormBase:TsM_000065700)对宿主THP-1细胞的免疫调节作用。通过设计特异性引物和RT-PCR扩增技术,获得Ts-serpin-1编码序列,用qRT-PCR分析Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫的表达情况;构建pCold-Ts-serpin-1原核表达载体,诱导表达纯化重组蛋白Ts-serpin-1;用重组蛋白Ts-serpin-1处理THP-1细胞,采用qRT-PCR和ELISA方法检测Ts-serpin-1处理THP-1细胞后,各炎性细胞因子的变化情况。结果显示:获得的Ts-serpin-1目的基因长度为1149 bp,编码382个氨基酸,含有Serpin家族特有的反应中心环。Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫均表达,且成虫表达量显著高于幼虫。重组蛋白Ts-serpin-1的分子质量约为43 ku,可抑制THP-1细胞促炎性细胞因子IL-6、IL-1β、IL-12、TNF-α、IFN-γ和iNOS2的表达,促进抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β的分泌表达。以上结果提示,Ts-serpin-1在寄生虫-宿主互作过程中可能发挥重要作用。
- 毕研丽刘仲藜郭爱疆张少华王帅才学鹏
- 关键词：猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂免疫调节
- 西藏日喀则地区羊梨形虫病原调查和分析
- 2025年
- 为了解我国西藏自治区日喀则市藏羊梨形虫病的流行情况,本试验采集了366份藏羊血液样品并提取基因组DNA,采用巢式PCR方法对藏羊梨形虫病病原进行检测和鉴定,并基于梨形虫18S rRNA基因序列构建系统进化树。结果显示,梨形虫阳性率为35.79%(131/366),其中绵羊泰勒虫阳性率为35.25%(129/366),环形泰勒虫阳性率为0.55%(2/366);系统进化树结果显示,该地区绵羊泰勒虫与中国新疆株(GenBank:FJ603460)、土耳其株(GenBank:AY260172)和苏丹株(GenBank:AY260171)处于同一分支;环形泰勒虫与意大利株(GenBank:MT341858)、土耳其株(GenBank:524666)和中国内蒙古株(GenBank:EU083801)处于同一分支。本试验首次报道了西藏地区存在绵羊泰勒虫,为西藏地区羊梨形虫病的流行病学调查和综合防控提供了数据参考。
- 朱浩瀚赵帅阳张少华张楚晗苏书晓关贵全殷宏罗建勋罗建勋
- 关键词：藏羊梨形虫巢式PCR系统进化树流行病学调查
- 多房棘球蚴Calpain A基因克隆、表达及其多克隆抗体制备
- 2025年
- 目的分析并克隆多房棘球蚴Calpain A(Em-Calpain A)基因开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)序列,进行体外诱导表达并制备兔多克隆抗体。方法从WormBase数据库下载多房棘球绦虫Em-Calpain A基因ORF序列。采用ProtParam、SMART等在线工具对其理化性质、蛋白结构域等进行分析和预测;利用MEGA 7.0软件的邻接法构建系统进化树。提取原头蚴总RNA并反转录为cDNA,PCR扩增Calpain A基因,构建pET28a-Em-Calpain A原核表达载体,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用10%SDS-PAGE、Western blot和ELISA对重组蛋白纯度和抗体滴度及反应性进行鉴定。结果序列分析表明Em-Calpain A基因ORF长度为2469 bp,编码822个氨基酸,推测理论分子质量约92.13 ku,等电点为5.3。蛋白结构分析显示Em-Calpain A具有1个高度保守的钙蛋白酶样硫醇蛋白酶结构域(CysPc)、1个钙蛋白酶Ⅲ结构域(CalpainⅢ)和2个E、F的螺旋-环-螺旋结构(EF-hand),说明其属于钙蛋白酶家族。系统进化分析显示Em-Calpain A序列与带科绦虫聚于一类,与肝片吸虫、日本血吸虫、人、犬、牛及原虫亲缘关系较远。重组蛋白主要以包涵体形式表达,蛋白分子质量约为93 ku,与预测分子质量大小基本一致。ELISA检测结果显示制备的多克隆抗体效价达1∶262144;该抗体可特异性识别His-Em-Calpain A和原头蚴天然Calpain A蛋白。结论成功构建Em-Calpain A基因的原核表达系统并制备了其多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定了基础。
- 李慧敏张少华张月玥王帅生鸿鹏李雅琪王得先蒋佳颖
- 关键词：多房棘球蚴表达纯化多克隆抗体
- 鸡毒害艾美耳球虫LZ株MIC5基因的重组表达及其表达产物的抗原性分析被引量：6
- 2008年
- 根据已发表的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)微线蛋白5(Microneme protein 5,MIC-5)基因的核苷酸序列设计引物,以毒害艾美耳球虫(E.necatrix)DNA为模板,利用PCR方法扩增出EnMIC-5部分基因片段。将基因片段与pMD18-T simple载体连接,重组质粒测序结果表明EnMIC-5基因大小为1 470 bp,编码490个氨基酸。EnMIC-5与pET-28a(+)载体构建重组表达质粒pET-EnMIC-5,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE检测,表达产物为相对分子质量约57.5 ku的融合蛋白。Western-blot分析结果表明表达蛋白可被鸡感染E.necatrix阳性血清识别。用重组蛋白免疫昆明鼠,一免后15 d即可检测到相应抗体,且抗体在三免后40 d仍维持较高水平,证实重组蛋白具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体。
- 刘红霞贾万忠郭爱疆张少华闫鸿斌岳城才学鹏
- 关键词：毒害艾美耳球虫基因克隆免疫原性
- 猪囊尾蚴TS-CC18蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立
- 囊尾蚴病(Cysticercosis)是危害严重的食源性人兽共患病之一。利用重组蛋白和合成肽作为替代抗原,是解决该病诊断抗原来源问题的一条理想途径。目的制备猪带绦虫囊尾蚴TS-CC18重组抗原并鉴定其抗原特性,建立猪囊尾...
- 张少华骆学农贾万忠郭爱疆景志忠才学鹏
- 关键词：猪囊尾蚴原核表达间接ELISA
- 文献传递
- 豆状带绦虫actin基因全长cDNA的克隆及序列分析
- Actin蛋白广泛存在于生物细胞中,其功能与肌肉的收缩和细胞分裂等运动有关。众多研究表明,actin基因在核苷酸、氨基酸水平上都具有高度的保守性,这暗示actin基因作为管家基因在动物生命活动过程中起着非常重要的作用。
- 骆学农张少华侯俊玲郭爱疆王秋霞才学鹏
- 关键词：带绦虫ACTIN克隆及序列分析
- 文献传递
- 猪带绦虫亲环蛋白CyP的克隆表达与活性分析
- 亲环蛋白(cyclophilin,CyP)家族是一类在生物体内普遍存在,结构上高度保守的多功能蛋白质,其最初作为免疫抑制剂环孢素A(cyclosporin A,CsA)的细胞受体,其它功能还包括肽基脯氨酸顺/反异构酶活性...
- 张少华李雪强骆学农才学鹏
- 关键词：猪带绦虫亲环蛋白克隆表达抗体制备
