张晓玮
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华中农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪MSTN前肽定点诱变载体在C2C12细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性。以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因,扩增产物进行克隆、测序。再将目的片段定向克隆到去除了EGFP基因的pEGFP-N1表达载体上。通过定点诱变方法将前肽编码序列第76位天冬氨酸突变为丙氨酸,获得定点诱变载体pEGFP(-)-N1-ProMstnD76A,并瞬时转染C2C12细胞。转染48 h后,通过RT-PCR和Real-time PCR方法检测目的基因的表达情况。结果表明:本研究成功克隆了通城猪含第1个内含子的MSTN前肽基因,并对该基因进行定点诱变修饰,构建了真核表达载体,转染后其前体mRNA能在C2C12细胞中进行正确剪接,目的基因mRNA表达水平较高。这为猪MSTN前肽基因在体内表达的研究奠定基础,并为制备转基因猪提供有用的分子材料。
- 张晓玮崔文涛伍晓雄杨述林牟玉莲唐中林李奎
- 关键词：定点诱变真核表达
