李攀
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：昆明理工大学医学院更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究计划面上项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人星状病毒非结构蛋白酵母双杂交诱饵表达载体构建及酵母转化子特性鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建人星状病毒非结构蛋白3（non．structureproteinla／3，nsPla／3）基因酵母双杂交诱饵重组质粒，电转化酵母感受态细胞后鉴定酵母转化子特性。方法聚合酶链反应扩增人星状病毒nsPla／3编码的基因序列，定向插入到穿梭表达载体pGBKT7改造后的pGBST7中，测序确定无误后将其电转化到Y2HGold酵母感受态细胞中，对细胞特性即nsPla／3一pGBST7诱饵质粒表达产物的毒性和报告基因自激活作用进行鉴定。结果测序结果表明诱饵重组质粒构建正确，阅读框无误。电转化酵母后，其表达产物对酵母细胞无毒性作用，对报告基因亦无激活作用。结论成功构建了用于酵母双杂交的酵母转化子，为研究nsPla／3蛋白与宿主细胞具体作用的靶蛋白和HAstV在细胞内的复制机制奠定了基础。
- 李攀崔成成杨思达黄芬曾韦锟井申荣
- 关键词：酵母双杂交
- 宿主细胞与人星状病毒nsP1a/3互作蛋白筛选及多克隆抗体制备
- 星状病毒(Astrovirus)是感染哺乳动物和鸟类的病原体,属于星状病毒科(Astroviridae),基因组为不分节段的正链RNA,无囊膜且核衣壳为20面体结构,形状为星状。人星状病毒(Human Astroviru...
- 李攀
- 关键词：酵母双杂交真核表达载体多克隆抗体
- 文献传递
- 昆明地区人输血传播病毒分子流行病学研究被引量：2
- 2014年
- 目的检测昆明市体检人群血清输血传播病毒,研究该地区第4和第5组群输血传播病毒分子流行病学特征。方法聚合酶链反应检测血清输血传播病毒,阳性样品测序后进行同源性和系统进化分析。结果检测了224份血清,通过序列测定和比对确定了151份阳性样品,病毒感染率为67.41%(151/224),第4组群和第5组群分别检测到48份和79份,混合感染10份,两组群输血传播病毒流行率为21.43%(48/224)和35.27%(79/224),混合感染率为4.46%(10/224)。结论获得了昆明地区第4和第5组群输血传播病毒流行病学数据,为昆明地区输血传播病毒的预防奠定基础。
- 李攀张成崔成成杨思达曾韦锟黄芬井申荣
- 关键词：输血传播病毒分子流行病学
- 具有增强蛋白质表达活性序列ER3的筛选及其功能区域的初步鉴定
- 2015年
- 目的：利用构建的增强子样序列筛选载体,筛选在大肠杆菌中增强外源蛋白质表达的序列,并利用删除突变体初步鉴定其功能区域.方法：以氯霉素乙酰转移酶（CAT）基因序列与人乳头瘤病毒（HPV）主要衣壳蛋白基因 L1 的截短序列L11连接作为报告基因,从采集的样品中筛选增强子样序列,通过蛋白质表达来检测其增强活性,并通过构建删除突变体来初步鉴定其功能区域.结果： 成功筛选到一条增强子样序列,可使检测载体氯霉素抗体提高11倍,融合蛋白表达水平提高2.26倍,其功能区域主要集中在1~265bp.结论：从收集的样品中成功筛选出一个增强子序列,能提高外源基因在大肠杆菌中的表达.
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- 人星状病毒非结构蛋白nsP1a/3的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2015年
- 目的原核表达、纯化人星状病毒(human astrovirus,HAstV)非结构蛋白nsP1a/3,并制备多克隆抗体。方法酶切质粒nsP1a/3-pCDNA3.1,获得nsP1a/3基因,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒nsP1a/3-pET-28a,转化大肠埃希菌BL2(DE3),IPTG诱导表达,并优化表达条件。表达的重组蛋白经Ni2+亲和层析纯化后,经腹腔免疫SD大鼠,共4次,最后1次免疫7 d后,经心脏采血,分离血清,ELISA法检测多抗效价,Western blot鉴定多抗的特异性。结果重组表达质粒nsP1a/3-pET-28a经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为22500,以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度为86.6%,浓度为1.26mg/ml;制备的多克隆抗体效价较高,可达1∶30 000,且特异性较好。结论成功地原核表达、纯化了HAstV非结构蛋白nsP1a/3,并制备了特异性良好的鼠多克隆抗体,为进一步研究nsP1a/3蛋白在病毒侵染靶细胞时的作用机制奠定了基础。
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- 关键词：原核细胞纯化多克隆抗体
- 原核增强子样序列筛选及其功能区域鉴定
- 2015年
- 目的从污水和土壤中富集的微生物菌体中筛选原核增强子样序列,构建包含增强子样序列的表达载体,并通过构建缺失突变体鉴定其功能区域。方法将人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）主要衣壳蛋白基因L1截短序列L11与氯霉素乙酰转移酶基因（chloramphenicol acetyltransferase,CAT）连接,作为报告基因,从污水和土壤富集的微生物菌体中筛选具有增强子活性的序列,构建包含增强子样序列的表达载体,表达HPV L11蛋白,检测其增强活性;通过构建ER1的缺失突变体,测定不同突变体对L11蛋白表达的作用情况,确定其功能区域。结果从样品基因组DNA中筛选出1条具有一定增强蛋白表达功能的增强子样序列,可使检测菌株氯霉素抗性提高5倍,HPV L11蛋白表达水平提高1.78倍。其增强活性主要位于117~317 bp区域。结论从污水和土壤中成功筛选到1条增强子样序列,携带有增强子样序列的表达载体可提高目的蛋白表达水平。
- 崔成成王应明毕艳红李攀杨思达黄芬曾韦锟井申荣
- 关键词：外源基因蛋白表达
