杨永平
- 作品数：16 被引量：50H指数：5
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- 新型HCVEIA诊断试剂盒的研制被引量：5
- 1994年
- 丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组结构区核壳蛋白（Ｃ）区抗原、膜蛋白Ｅ１和Ｅ２区抗原，以及非结构区ＮＳ３－ＮＳ５区抗原的区段，已经在原核细胞中获得有效的表达。同时，相应区段中的优势抗原表位肽也经化学合成法大规模地制备。ＨＣＶ基因组上各区段抗原性的分析发现，由Ｃ区和ＮＳ３区分别编码的Ｃ抗原和Ｃ３３ｃ抗原是ＨＣＶ基因组上两个优势抗原区段。其相应的抗体出现早（感染后６周可检出抗Ｃ３３ｃ抗体），阳转率高（约９９％阳性检出率），特异性和重复性均优于其它区段抗原。以中国人ＨＣＶ的Ｃ３３ｃ重组蛋白和分支状合成肽ＭＡＰ－Ｃ－１９为复合抗原，研制了适合我国抗ＨＣＶ抗体检测的新型丙型肝炎病毒酶免疫测定（ＨＣＶＥＬＡ）诊断试剂盒。它同当代美国Ａｂｂｏｔｔ／ＵＢＩＨＣＶＥＬＡ诊断试剂的符合率约９８％，同加拿大ＹＥＳ公司ＨＣＶＥＩＡ诊断试剂的符合率约９７．８％，阳性检出率提高了约２％，３次重复性达１００％，表明其特异性、敏感性和重复性均达到了当代第二代ＪＣＶＥＬＡ诊断试剂的水平。我国人群中抗ＨＣＶ抗体的分布情况为：正常人群的检出率１％－２％；外科类住院病人检出率约２８．８％；肝炎患者抗ＨＣＶ阳性率为３４．４％，慢活肝、肝硬化和重症肝炎患者?
- 杨永平曹经缓金冬雁江永珍汤权夏宁邵李景源孟庆玲鲁健刘崇柏
- 关键词：丙型肝炎病毒诊断试剂盒
- 从中国病人克隆丙型肝炎病毒基因组C区基因及其在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 1994年
- 本文通过逆转录（ＲＴ）－聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从两份分别来自湖南省娄底地区丙型肝炎病人和河北省秦皇岛市职业献血员丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ打点杂交阳性的血清中，扩增并克隆到１段５６３ｂｐ的ＨＣＶ基因组Ｃ区抗原基因Ｃ２６９／８３１，并通过ＰＣＲ得到了３个表达片段Ｃ８３１、Ｃ８０１和Ｃ５８７。测定Ｃ２６９／８３１基因的全序列后发现，中国人ＨＣＶ湖南分离株与ＨＣＶ－Ⅰ型株ＨＣＶ－ＵＳ和Ⅱ型株ＨＣＶ－ＢＫ在该基因区段的核苷酸／氨基酸序列的同源性，分别为９０．３％／９４．６％和９５．２％／９４．６％。利用原核高效表达载体ｐＢＶ２２０在大肠杆菌中有效地表达了非融合的Ｃ区抗原基因重组蛋白ＣＬ、ＣＭ和ＣＳ。通过免疫筛选法及Ｗｅｓｔｅｍ印迹法对约占菌体可溶性蛋白１１％的表达产物进行了鉴定。采用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００和盐析处理表达产物，再进行离子交换层析纯化，得到可用于检测ＨＣＶ血清抗体的核壳蛋白（Ｃ）抗原。通过不同分子量抗原的表达，发现由Ｃ区Ｎ端８９个氨基酸组成的多肽ＣＳ其抗原性与由１５８或１６８个氨基酸组成的多肽ＣＭ或ＣＬ相同，但抗原的稳定性和表达量显著优于后两种抗原。本研究为研制ＨＣＶ抗体诊断试剂盒奠定了重要基础。
- 杨永平刘崇柏夏宁邵丛勉尔汤权曹经缓
- 关键词：CDNA克隆丙型肝炎病毒基因组
- 丙型肝炎病毒核壳蛋白抗原的化学合成及其在血清学诊断中的应用被引量：7
- 1992年
- 选取丙型肝炎病毒(HCV)核壳蛋白区两个可能含有优势抗原表位的19和16氨基酸的肽殴(C-19肽和C-16肽),利用固相多肽合成技术进行了化学合成。经用反相高压液相层析(HPLC)及脉冲液相多肽测序技术检定合成肽产品的纯度及序列后,以C-19和C-16肽作为包被抗原组装成检测HCV血清抗体的ELISA诊断试剂。用所组装的合成肽试剂检测中国药品生物制品检定所提供的HCV标准参比血清,并比较利用该试剂和美国Abbott实验室生产的HCV第二代EIA诊断试剂平行检测109份献血员血清的结果,表明C-19肽能够特异、重复、灵敏地检出HCV血清抗体,可以作为我国第一代HCV诊断试剂的合成肽抗原。
- 金冬雁李景源杨永平薛水星吴长龙刘崇柏李玉英侯云德
- 关键词：丙型肝炎病毒ELISA肝炎病毒
- 献血员丙型肝炎病毒感染的危险性及其影响因素被引量：2
- 1992年
- 本文对河北省27个县市区、117个自然村的440人献血员进行丙型肝炎病毒(HCV)感染及其影响因素的分析,发现献血员丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)阳性率为27.0％,无献血史成人为5.2％,相对危险性(RR)为5.19,归因危险度(AR)为80.7％。单采浆还输血球献血员和全血献血员抗-HCV 阳性率分别为41.1％和14.6％,RR 分别为7.90和2.81,AR 分别为87.3％和64.4％。通过非条件 Logistic 回归分析,献血员 HCV 感染率高低与性别、血站类型、血清谷丙转氨酶(ALT)异常和 ALT 异常史有关,而与年龄、献血次数和年限无明显关系,但在单因素分析中,献血次数与抗-HCV 阳性率呈正相关关系。我们还发现,有ALT 异常史的献血员抗-HCV 阳性率高达55.6％,血站通过 ALT 筛检并不能剔除这类人群,这是造成我国输血后丙型肝炎的重要原因。
- 陈素良田伟王秀玲孟宋达杨永平刘崇柏
- 关键词：丙型肝炎病毒献血员影响因素
- 全文增补中
- 丙型肝炎病毒RNA打点杂交检测方法同RT－PCR方法的比较被引量：4
- 1994年
- 采用ＨＣＶ基因组结构区Ｃ区ｃＤＮＡ探针和非结构区ＮＳ３－４区ｃＤＮＡ探针，建立了用打点杂交（ｄｏｔｂｌｏｔｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的方法，同采用ＨＣＶ基因组５’端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的方法相比较，发现两种方法都能快速早期和特异地检出血清中ＨＣＶＲＮＡ，但ＲＴ－ＰＣＲ法敏感性优于ＲＮＡ打点杂交法。对于无血清学指标的慢性ＮＡＮＢ肝炎病人的诊断，可采用这两种方法。这两种方法的敏感性在很大程度上依赖于引物和探针的敏感性，以及ＲＮＡ提取方法。ＲＴ－ＰＣＲ法适用于诊断病毒血症和复制，打点杂交法适用于研究ＨＣＶＲＮＡ量的变化，对治疗的评价，以及为实验筛选较高滴度的ＨＣＶＲＮＡ阳性样本。
- 杨永平丛勉尔夏宁邵曹经瑗刘崇柏
- 关键词：丙型肝炎病毒RNA
- 丙型肝炎病毒基因组C区和NS3区基因cDNA的融合及其在大肠杆菌中的表达与初步应用被引量：6
- 1994年
- 通过逆转录（ＲＴ）－聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从中国人丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）携带者的血清中扩增并克隆到２段ｃＤＮＡ片段，即ＨＣＶ基因组Ｃ区抗原基因Ｃ８３１ｃＤＮＡ片断（约５３０ｂｐ）和ＮＳ３区抗原基因Ｃ３３ｃｃＤＮＡ片段（约８６０ｂｐ）。Ｃ３３ｃｃＤＮＡ片段同Ｃ８３１ｃＤＮＡ片段经连接 肽Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ连接成为基因嵌合体Ｃ３３ｃ－Ｃ８３１（约１４００ｂｐ）。Ｃ３３ｃ－Ｃ８３１基因嵌合体同温控型原核表达载体ｐＢＶ２２０重组，构建成表达质粒ｐＢＶ／Ｃ３３ｃ－Ｃ８３１，并在大肠杆菌细胞中获得了重组嵌合抗原Ｃ３３ｃ－ＣＬ的表达。通过酶切分析和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹法，对约占菌体可溶性蛋白９％的表达产物做了鉴定。采用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００和盐析处理，获得粗提表达产物。粗提的表达产物经尿素裂解和离子交换层析纯化，得到可用于检测抗ＨＣＶ核壳蛋白和抗ＮＳ３区抗体的重组嵌合抗原Ｃ３３ｃ－ＣＬ。对Ｃ３３ｃ－ＣＬ做抗原性分析发现，它同时具有完整的Ｃ３３ｃ抗原和Ｃ２２抗原的免疫反应活性，完全能替代单纯的Ｃ３３ｃ和Ｃ２２抗原。该嵌合抗原在血清学诊断中有重要的应用价值，可望成为新一代ＨＣＶＥＩＡ诊断试剂的优选抗原。
- 杨永平江永珍毕胜利刘崇柏
- 关键词：CDNA
- 开展献血者丙型肝炎病毒抗体筛检的迫切性
- 1992年
- 我国目前尚未普遍开展献血者抗-HCV筛检,面仅通过ALT检查。究竟有多少HCV感染者能被间接筛除,尚有多少HCV感染者仍作为“合格”献血者继续献血,值得研究。现将我们的调查结果报告如下: 材料与方法 (一)对象的选择按河北省的地理分布,在南部、中部、北部和东部,对729名献血者诃查和采血。献血者来自28个县、市、区的143个自然村、工厂及部队等。包括农民、工人、解放军战士、城市待业青年、大学生和小学教师。
- 陈素良田伟孟宗达孙永德杨永平刘崇柏李春明
- 关键词：献血员丙型肝炎病毒抗体
- 一种快速有效的丙型肝炎病毒cDNA克隆的筛选和鉴定方法
- 1993年
- 在丙型肝炎病毒(HCV)eDNA克隆的过程中,将eDNA的PCR产物克隆入载体pGEM-3Zf的SmaI酶切位点,使用PCR法标记的Digoxigenin cDNA探针,通过原位杂交筛选特异的重组体。实验证明用此法进行cDNA克隆具有高度的特异性和实用价值,尤其适用于cDNA PCR产物量小的情况。改进的方法比其它方法更为快速、简便。应用该法,我们成功地克隆并表达了HCV基因组的两个区(C和NS3基因)。
- 汤权杨永平夏宁邵刘崇柏
- 关键词：原位杂交探针丙型肝炎病毒
- 中国人HCV基因组NS3区c33-c抗原基因cDNA克隆和在大肠杆菌中表达被引量：4
- 1993年
- 本文通过逆转录(RT)-聚合酶链式反应(PCR)从一份来自山东省泰安市的丙型肝炎病毒(HCV)RNA打点杂交阳性的中国人血清中扩增并克隆到一段约850bp的HCV基因组NS3区c33-c抗原基因,测定该基因的全序列后发现,中国人HCV泰安分离株与HCV Ⅰ型株HCV-US和Ⅱ型株HCV-BK在该基因区段的核苷酸/氨基酸序列同源性分别为79.2％/91.3％和91.3％/93.9％。利用原核高效表达载体pBV220在大肠杆菌中有效地表达了非融合的c33-c重组蛋白,通过免疫筛选法及Western印迹法对约占菌体可溶性蛋白14％的表达产物进行了鉴定。采用Triton X-100和尿素处理表达产物后再进行离子交换层析,纯化得到可用于检测HCV血清抗体的c33-c抗原。利用该抗原与HCV核壳蛋白区的分支状合成肽一起组装成中国第二代免疫酶法(E1A)测定HCV抗体试剂盒,其检测特异性、灵敏度和精密性完全符合HCV诊断试剂的国家质控标准,已基本达到国际上第二代HCV E1A主流试剂的水平。
- 杨永平刘崇柏金冬雁詹美云汤权夏宁邵曹经媛李景源
- 关键词：CDNA克隆丙型肝炎病毒
- 河北省献血员丙型肝炎病毒感染的血清流行病学研究被引量：1
- 1993年
- 本文对来自河北省6所血站及2个自然村的729名献血员和135名无献血史成人进行了丙型肝炎病毒(HCV)感染的血清流行病学研究,发现献血员HCV感染率为22.1％。无献血史成人为5.2％;献全血血员HCV感染率为15.2％,单采浆还输血球献血员为39.7％。结果表明。无论献全血,还是献血浆,均易感染HCV,尤以献血浆更为危险。血清谷丙转氨酶(ALT)异常及持续异常的献血员HCV感染率分别为41.5％和78.6％;仅有ALT异常史的献血员为50.8%,ALT正常献血员为16.7％。由此可见,ALT异常是HCV感染的重要表现形式之一。目前,血站通过对献血员ALT的筛检,只能间接的将17.4％的HCV感染者筛除,尚有82.6％的感染者仍做为“合格”献血员继续献血。因此。
- 田伟陈素良孟宗达孙永德杨永平刘崇柏李春明
- 关键词：献血员丙型肝炎血清流行病学
