汤旭东
- 作品数：35 被引量：125H指数：7
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市杰出青年科学基金烧伤与复合伤国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠肝素酶H-2Kb限制性CTL表位的实验鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的实验鉴定H-2Kb限制性小鼠肝素酶(mHpa)CTL表位。方法5条mHpa表位分别负载C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞,并进一步诱导产生表位特异性的效应细胞,采用标准4 h51Cr释放试验检测效应细胞对不同靶细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果5条mHpa CTL表位中,仅mHpa398-405和mHpa519-526可以诱导小鼠产生特异性CTL,对同来源的B16黑色素瘤细胞、Lewis肺癌细胞和EL-4淋巴瘤细胞具有明显的免疫杀伤效应,而对H-2Kb阴性的P815肥大细胞瘤细胞不具有免疫杀伤效应,进一步研究发现,上述多肽特异性CTL对自体淋巴细胞和DC细胞不具有杀伤效应,另一方面,mHpa398-405和mHpa519-526还可促进效应细胞分泌IFN-γ的能力。结论mH-pa398-405、mHpa519-526为小鼠肝素酶来源且受H-2Kb限制性CTL表位,小鼠体内可以诱导产生表位特异性的CTL反应。
- 汤旭东万瑛房殿春陈陵熊震余松涛师红磊郭军杨仕明
- 关键词：肝素酶抗原表位肿瘤疫苗细胞毒T淋巴细胞
- 肝素酶RNAi对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响被引量：4
- 2008年
- 目的利用筛选出的肝素酶有效干扰细胞株HepG2/RNAi/1和HepG2/RNAi/3研究肝素酶RNAi对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响。方法通过MTT实验、流式细胞技术、平皿克隆形成实验、Transwell侵袭实验、裸鼠成瘤实验分别检测HepG2肝癌细胞肝素酶RNAi后生长速度、单个细胞形成克隆能力、侵袭能力及成瘤能力的变化。结果MTT实验表明HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3组细胞增殖能力明显低于HepG2组和HepG2/RNAi/N组;流式细胞生长周期实验表明,与HepG2和HepG2/RNAi/N细胞相比,HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3 G0/G1期细胞比例增加,而增殖指数下降;平皿克隆形成实验表明HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3组单个细胞形成克隆的能力与HepG2组和HepG2/RNAi/N组相比显著降低[分别为(34±4)、(26±5)和(138±7)、(123±22),P<0.05)];Transwell体外侵袭实验表明,HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3细胞穿膜数较HepG2和HepG2/RNAi/N细胞穿膜数明显减少[分别为(85.1±9.1)、(78.1±10.4)和(182.2±9.7)(、183.5±9.3),P<0.05)];裸鼠成瘤实验显示,HepG2、HepG2/RNAi/N细胞成瘤率为100%,虽然HepG2/RNAi/1细胞成瘤亦为100%,但裸鼠皮下肿瘤体积较HepG2、HepG2/RNAi/N细胞明显缩小[分别为(0.099±0.030)和(0.585±0.135)(、0.690±0.099),P<0.01)],而HepG2/RNAi/3细胞裸鼠皮下未见肿瘤形成。结论肝素酶RNA干扰可以明显抑制HepG2肝癌细胞增殖速度、单个细胞克隆形成能力、体外侵袭能力以及裸鼠皮下成瘤能力。
- 熊震汤旭东房殿春余松涛陈陵师红磊罗元辉杨仕明
- 关键词：肝素酶RNAI肝癌
- 一种MAP疫苗及其应用
- 本发明涉及一种MAP疫苗及其应用，其多肽序列如SEQ ID NO：1-3所示。所述MAP疫苗是基于人端粒酶逆转录酶的T细胞表位MAP疫苗。SEQ IDNO：1-3所示的多肽分别选自HLA-A2限制性显性表位P540、P8...
- 郭红杨仕明廖忠莉汤旭东宁琳红周圆圆周媛杨武晨柏健鹰张朋彬赵晓晏
- 文献传递
- 小鼠肝素酶H-2K^b限制性CTL表位预测及其MHC-I亲和力分析被引量：8
- 2007年
- 目的预测肿瘤转移相关基因肝素酶的CTL表位,为探索基于肝素酶的抗原表位的免疫治疗奠定基础。方法利用基于超基序、量化基序结合人工神经网络方案开发的H-2Kb限制性CTL表位预测软件,对小鼠肝素酶蛋白的CTL表位进行预测,然后人工合成相关待测表位肽,再对这些合成肽与MHC-I结合亲和力进行检测。结果采用机算机网络系统,预测了5条小鼠肝素酶抗原表位,即mHpa234~241(LGEDFVEL),mHpa351~358(FAAGFMWL),mHpa519~526(FSYGFFVI),mHpa386~393(VDENFEPL),mHpa398~405(LSLLFKKL),MHC亲合力实验表明,与阴性对照肽对比,随着预测肽浓度增加,H-2Kb的表达逐渐增加,与MHC-Ⅰ类分子的亲和力亦逐渐增强,当预测肽浓度达到30μmol/L时,其荧光系数(FI)均大于1.5。结论通过计算机软件预测到的5条小鼠肝素酶CTL表位与MHC-Ⅰ类分子均有较高的结合亲和力,为该表位的下一步体内鉴定及基于小鼠肝素酶抗原表位的肿瘤免疫治疗奠定基础。
- 汤旭东万瑛陈婷熊震陈陵余松涛罗元辉杨仕明
- 关键词：CTL表位
- 肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞表位多抗原肽负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究被引量：4
- 2011年
- 目的研究肝素酶(heparanase,Hpa)细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位多抗原肽(multi-ple antigen peptides,MAP)疫苗能否诱导更强的Hpa特异性CTL反应。方法 HLA-A2.1限制性肝素酶CTL表位多抗原肽负载正常人外周血来源(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)树突状细胞(dendritic cell,DC),诱导CTL,采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT实验检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的CTL对Hpa阳性且HLA-A2.1匹配的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大效应细胞/靶细胞(effector/target,E/T)时高出率均大于16%;其对HLA-A2.1阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但是对MCF-7/Hpa乳腺癌细胞和HepG2/HLA-A2肝癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大E/T时高出率均大于18%;其对自体淋巴细胞和DC不具有杀伤效应。另一方面人肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的IFN-γ分泌水平强于相应的单肽。结论肝素酶CTL表位MAP疫苗能激发较相应单肽更强的特异性和非特异性抗肿瘤效应。
- 王国珍汤旭东吴玉云李宁李长珠陈陵房殿春杨仕明
- 关键词：肝素酶CTL表位多抗原肽树突状细胞
- 人肝素酶RNAi序列的筛选及鉴定被引量：7
- 2007年
- 目的筛选及鉴定有效人肝素酶(heparanase,Hpa)RNA干扰(RNA interference)序列。方法通过在线网络软件选择3个Hpa RNAi的靶点,再设计1组无关序列作阴性对照。通过基因重组技术,把3个干扰片段及阴性对照片段分别克隆入质粒pGenesile-1,脂质体法稳定转染至HepG2肝癌细胞;经G418抗性筛选后各挑选2个阳性克隆进行扩大培养;Western blot检测不同克隆肝素酶蛋白的表达水平,并进一步采用RT-PCR验证筛选克隆肝素酶mRNA的表达水平。结果通过在线网络软件设计3个RNA干扰序列,分别为Hpa/RNAi-1:GGCTATCTCTTCTGTTCAA,Hpa/RNAi-2:TCCT-GTCCGTCACCATTGA,Hpa/RNAi-3:CTCAGTTGCTCCTGGACTA及阴性对照序列Hpa/RNAi-N:CTACCGTTGTATAGGTGT;测序证实克隆入pGenesil-1载体的3个干扰序列及阴性对照序列与设计序列完全一致;经G418抗性筛选后形成的阳性克隆采用Western blot检测其肝素酶蛋白的表达,结果表明3个干扰序列对HepG2细胞人肝素酶蛋白的表达均有抑制作用,其中Hpa/RNAi-1和Hpa/RNAi-3干扰链的抑制效果最好,分别达到57%和71%;RT-PCR检测结果亦表明Hpa/RNAi-1和Hpa/RNAi-3序列在mRNA水平对肝素酶有较好的抑制效果。结论成功筛选出有效的人肝素酶RANi序列。
- 熊震汤旭东房殿春陈婷余松涛陈陵罗元辉杨仕明
- 关键词：RNA干扰SIRNA肝癌
- 人肿瘤转移相关抗原肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及初步鉴定被引量：10
- 2007年
- 目的预测并鉴定肿瘤转移相关抗原肝素酶来源的HLA-A2.1限制性CTL表位。方法采用超基序、量化基序和分子模拟相结合的方法,对肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位进行预测,合成候选表位肽;利用T2细胞的特点,对合成的候选肽与HLA-A2.1分子进行亲和力分析,初步验证预测结果;利用标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性。结果在所筛选的5个候选CTL表位中,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)可在体外有效诱导肝素酶特异性CTLs的产生,对肝素酶阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ细胞具有明显的杀伤效应。结论Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)有可能是肿瘤抗原肝素酶HLA-A2.1的限制性CTL表位。
- 陈婷万瑛汤旭东房殿春余松涛熊震罗元辉杨仕明
- 关键词：肝素酶表位分子模拟
- hTERT基因修饰DC对不同类型肿瘤细胞的免疫杀伤效应研究
- 目的研究 hTERT 基因修饰树突状细胞(DC)诱导产生的细胞毒 T 淋巴细胞(CTLs)对不同肿瘤细胞系的免疫杀伤效应。方法采用密度梯度离心法分离并得到人外周血白细胞(PBMCs),利用 rhGM -CSF、rhIL-...
- 陈陵蔡永国房殿春汤旭东陈婷余松涛熊震罗元辉杨仕明
- 文献传递
- 翻转课堂在临床教学中的实践及探索被引量：10
- 2019年
- 临床医学课程是医学生学习的必备课程,是对基础医学理论知识的进一步拓展和延伸,具有很强的实践性和应用性。而医学生的培养必须以临床技能为核心,同时也应重视学生的创新性、科研性及自主学习能力。信息化技术的不断发展,使得医学生获取知识的途径及学习方式多元化,而传统的以讲堂授课为主的教育模式难以满足现代医学教学的要求[1]。
- 唐波张琳景汪苏敏唐黎杨敏雷媛媛刘姚江汤旭东杨仕明
- 关键词：临床教学
- 不同剂量利福平致小鼠肝损伤特点的研究被引量：7
- 2017年
- 目的观察连续2周给予不同剂量利福平(RIF)引起小鼠肝损伤的现象及特点。方法给予24只小鼠不同剂量的利福平(0、100、200、400 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续灌胃2周,设为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组4组(每组6只),末次给药后6 h取材,收集小鼠血液和肝组织样品进行血清学检测并观察小鼠肝病理改变。结果所有小鼠实验期均未死亡。高剂量组和对照组比较TBA、DBIL、TBIL均有升高,ALT、AST、ALP无明显变化。中剂量组和对照组比较TBA、DBIL有升高,TBIL、ALT、AST、ALP无明显变化。低剂量组和对照组比较TBA、DBIL、TBIL、ALT、AST、ALP均无明显变化。各实验组小鼠肝均发生明显病理改变;HE染色显示肝细胞水肿、羽毛样变性与脂肪变性,并伴有大量炎性细胞浸润,个别可见散在的胆汁淤积;随着利福平浓度的增大,肝病理改变越明显。电镜照片示各实验组肝组织电镜照片可见肝细胞包浆中充满大量的脂肪滴,部分毛细胆管轻微扩张、其内可见不同电子密度的不规则状胆汁样物质,也是随利福平浓度的增大肝病理改变越明显。结论连续2周给予不同剂量的利福平均可引起小鼠肝损伤,主要表现为肝细胞脂肪变性、炎性细胞浸润和散在胆汁淤积,利福平对小鼠肝的损伤呈浓度依赖性,但其机制有待进一步研究。
- 张刚陈磊陈静柴进汤旭东陈文生
- 关键词：利福平肝损伤胆汁淤积小鼠抗结核药物肝毒性
