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基于弓形虫529-bp重复序列巢式PCR诊断方法的建立被引量：7: 2013年; 根据GenBank已发表的弓形虫529-bp重复序列(AF146527)设计巢式PCR引物,建立巢式PCR检测方法。结果表明,该方法能扩增出427bp的片段,敏感性试验表明该方法可以检测出0.1pg的弓形虫基因组DNA,敏感性是常规PCR的100倍。巢式PCR方法对蜥蜴利什曼原虫、隐孢子虫、细粒棘球绦虫基因组扩增无条带,特异性强。样品检测符合率达100%。巢式PCR方法的建立为弓形虫病的诊断及流行病学调查提供技术支持。; 张莹光曹利利徐丹宋鑫帅魏峰许越王巍杨桂连刘全; 关键词：巢式PCR 弓形虫

基于重组微线体MIC10的牛弓形虫抗体间接ELISA检测方法的建立: 引言弓形虫病是由弓形虫引起的一种世界范围内分布的人兽共患寄生虫病[1].牛感染弓形虫后常出现流产、死胎、弱胎,给畜牧业造成严重经济损失[2].含弓形虫包囊的牛肉是人弓形虫病的重要传染源.寻找到理想的治疗药物和安全有效的疫...; 李筱鑫王巍刘全魏峰

问号钩端螺旋体LigA基因的原核表达及其产物免疫保护性研究: 2015年; 构建问号钩端螺旋体LigA基因保守区和可变区的重组原核表达质粒,了解重组表达的LigAcon蛋白和LigAvar蛋白对金黄地鼠的免疫保护作用。采用高保真PCR扩增LigAcon和LigAvar基因并测序,构建LigAcon和LigAvar基因原核表达系统。SDS-PAGE和Western-blotting鉴定蛋白表达及其纯化情况。测定金黄地鼠的存活率来观察免疫LigAcon和LigAvar蛋白的金黄地鼠对感染问号钩端螺旋体56606株后的保护率。测序结果显示所得片段分别为LigAcon和LigAvar的编码序列,酶切及PCR分析证实重组质粒构建成功,SDS-PAGE和Westernblotting分析重组质粒可高效表达蛋白LigAcon和LigAvar。LigAcon免疫组,LigAvar免疫组,及LigAcon+LigAvar免疫组对金黄地鼠的免疫保护率均为100%。LigA蛋白是问号钩端螺旋体属特异性保护性抗原,未来可能在钩端螺旋体病的诊断和预防中发挥作用。; 王斐龚悦王巍张文龙曹永国丁壮; 关键词：问号钩端螺旋体原核表达免疫保护

弓形虫棒状体蛋白ROP18的原核表达及其免疫保护性研究被引量：6: 2013年; 目的克隆弓形虫ROP18基因并构建该基因的原核表达系统。方法根据GenBank发表的弓形虫ROP18序列设计合成1对特异性引物,PCR扩增ROP18抗原基因,并亚克隆到pET-28a原核表达载体,重组质粒转入大肠埃希菌BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达,重组蛋白用SDS-PAGE及Western blot鉴定。重组蛋白经纯化后免疫小鼠,ELISA法检测血清抗弓形虫IgG,并通过攻虫试验观察重组蛋白的免疫保护作用。结果成功构建了ROP18基因原核表达质粒pET-28a-ROP18,表达重组蛋白的分子质量单位约为55ku,该蛋白可被鼠抗弓形虫多抗血清识别;经ELISA检测,重组蛋白免疫小鼠产生了较高水平的血清抗体;攻虫试验中,重组蛋白免疫小鼠生存时间较对照组小鼠显著延长(P<0.05)。结论成功构建了ROP18基因原核表达质粒,表达的重组蛋白具有一定的免疫保护作用。; 许越张莹光徐丹曹利利王巍魏峰刘全; 关键词：弓形虫原核表达

重组微线体MIC10的牛弓形虫抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：1: 2015年; 为建立牛弓形虫抗体间接ELISA检测方法,根据弓形虫MIC10基因序列设计合成引物,应用PCR技术扩增MIC10基因,将其克隆至pET-22b载体,构建重组质粒pET-22b-MIC10,将其转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE及Western-blot分析表明,该重组蛋白能与弓形虫阳性血清发生特异性反应。重组蛋白经NiNTA纯化,应用牛弓形虫阳性、阴性血清建立了ELISA检测方法,抗原最佳包被质量浓度为5mg/L,二抗稀释倍数为1∶20 000,封闭液为含5%脱脂奶粉的PBST溶液。该方法重复性好、特异性强、敏感性高,为牛弓形虫流行病学调查奠定基础。; 李筱鑫王泽东刘全葛巍王巍魏峰; 关键词：弓形虫间接ELISA

基于重组微线体MIC10的牛弓形虫抗体间接ELISA检测方法的建立: 引言弓形虫病是由弓形虫引起的一种世界范围内分布的人兽共患寄生虫病[1]。牛感染弓形虫后常出现流产、死胎、弱胎,给畜牧业造成严重经济损失[2]。含弓形虫包囊的牛肉是人弓形虫病的重要传染源。寻找到理想的治疗药物和安全有效的疫...; 李筱鑫王巍刘全魏峰; 文献传递

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王巍