王程
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- 齐多夫定对原代大鼠肝细胞的毒性评价
- 2007年
- 采用二步灌流法分离大鼠肝细胞,苔盼蓝拒染试验测定细胞活力,活力达85%以上者用于实验。将肝细胞分为4组(药物剂量组、阳性对照组、阴性对照组和空白对照组),接种于各培养板(3×105个/ml):96孔板每孔200μl,每一剂量8个平行;24孔板每孔1ml,每一剂量6个平行;6孔板每孔2.5ml,每一剂量2个平行。各板置37℃、体积分数为5%的CO2培养箱培养4h,弃上清。药物剂量组分别加入齐多夫定(AZT)10、5.00、3.30、2.00、0.40和0.08mmol/L,阳性对照组加入四氯化碳(CCl4)10、2、0.5mmol/L,阴性对照组加入体积分数为1%的二甲基亚砜(DMSO)的DMEM,空白对照组加入DMEM培养液。96孔板于加样后6、12和24h测定细胞活性,24孔板于加样后6和12h收集培养上清,测定天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)及乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,6孔板加样后12h将细胞苏木素-伊红(HE)染色,观察细胞形态。结果显示,与阴性对照组相比,AZT和CCl4剂量分别高于3.3和2mmol/L时,在6、12和24h均能显著降低细胞活力(P<0.05),在6、12h对AST、ALT、LDH的释放量有统计学意义(P<0.05),CCl4剂量为10mmol/L时可使细胞变小、细胞膜破裂及核碎裂,AZT剂量在3.30mmol/L以上时可引起部分细胞膜破裂、核浓缩,空白组与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。试验表明,AZT剂量高于3.30mmol/L时有肝细胞毒性作用,且24h内不可逆,AZT毒性明显低于CCl4。
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- 关键词：大鼠肝细胞原代培养齐多夫定细胞毒性
