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纪振钢: 作品数：12 被引量：12H指数：2; 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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HER2靶向性重组tBid分子对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用: 骨肉瘤/(osteosarcoma/)是儿童和青少年最常见的骨原发性恶性肿瘤。20世纪70年代以前,主要治疗方法是截肢和关节离断,从外科治疗到出现肺转移的平均时间为8个月,5年生存率<25/%。随着外科技术和影像学的发展...; 纪振钢; 关键词：凋亡 TBID 基因治疗; 文献传递

重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用被引量：1: 2008年; 目的:构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,并探讨其对骨肉瘤E10细胞的促调亡作用。方法:通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪(FCM)检测E10细胞膜表面HER2的表达。将抗HER2单链抗体基因e23sFv与铜绿假单胞菌外毒素PE的转膜结构域基因(PEⅡ)和tBid基因连接,构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,将其克隆入真核表达载体pCMV中构建重组pCMV-ScFv/tBid载体,转染骨肉瘤E10细胞。间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,Annexin V染色流式细胞术及TUNEL法检测E10细胞的凋亡情况。结果:流式细胞仪检测到E10细胞膜表面有HER2的表达。成功构建重组融合蛋白基因质粒pCMV-ScFv/tBid。重组质粒转染E10细胞后,间接免疫荧光双标记染色检测到E10细胞中tBid的过表达;细胞色素C在细胞质中出现;细胞出现明显的固缩、核浓缩等形态特征。Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高(16.1% vs 4.5%);TUNEL染色显示,E10细胞出现典型的凋亡特征。结论:重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid可以在转染的骨肉瘤E10细胞中表达,并诱导骨肉瘤细胞发生凋亡。; 裘秀春单乐群纪振钢杨彤涛龙华许彦鸣周勇马保安杨安钢范清宇; 关键词：TBID 人表皮生长因子受体2 融合蛋白骨肉瘤细胞

HER2靶向重组截短型Bid片段融合蛋白对骨肉瘤细胞的促凋亡作用被引量：1: 2007年; 目的:观察人上皮细胞生长因子受体2(HER2)靶向重组的活性截短型Bid(tBid)融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗HER2单链抗体基因e23sFv、与绿脓杆菌外毒素(PE)的转膜结构域基因(PEII)和tbid基因连接,构建成immuno-tbid(e23sFv-PEII-tbid)基因,将其克隆入真核表达载体pCMV中,转染SOSP-9607细胞,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测观察其促凋亡作用。结果:转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测出tB id的表达,SOSP-9607细胞出现明显的固缩,核浓缩等凋亡特征。AnnexinⅤ染色、流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,凋亡率为42%,对照组细胞仅6%,表明细胞膜表面有磷脂酰丝氨酸外翻,提示重组immuno-tbid基因表达后有促凋亡作用。结论:重组immuno-tbid基因可在转染的SOSP-9607细胞中表达,并诱导其细胞凋亡。; 纪振钢裘秀春杨彤涛龙华马保安周勇张明华许彦鸣杨安钢范清宇; 关键词：融合蛋白细胞凋亡

肝细胞生长因子受体c-met在骨肉瘤中的表达及其临床意义被引量：6: 2010年; 目的:探讨骨肉瘤组织中肝细胞生长因子受体c-met蛋白的表达情况,分析其临床意义及与预后的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测行手术的35例骨肉瘤及13例骨样骨瘤患者标本肝细胞生长因子受体c-met的表达,并分析其与临床因素和预后的关系。结果:骨肉瘤组织中肝细胞生长因子受体c-met的阳性表达率为80%(28/35),而在骨样骨瘤中的表达率为7.7%(1/12),两者比较显著差异(P<0.01);结合临床资料分析,其表达与患者性别、年龄、发病次数、肿瘤体积、病理分型无关(P>0.05),而与临床分期、有无转移有关(P<0.05)。结论:C-met可能在骨肉瘤细胞侵袭、转移的过程中起重要作用;肝细胞生长因子受体c-met可以作为骨肉瘤诊断和预测转移的指标。; 刘云燕纪振钢杨连甲文艳华裘秀春张殿忠马琼许啸范清宇; 关键词：骨肉瘤

人存活素特异性siRNA促进SOSP-9607细胞凋亡的实验研究: 2008年; 目的:构建人存活素(survivin)基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞SOSP-9607凋亡的影响。方法:利用pSilencer3.0-H1neo,构建人存活素特异性的RNA干涉载体,转染SOSP-9607细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。western blot检测survivin蛋白水平变化。透射电镜等形态学观察、AnnexinV法、Hoechst染色检测细胞凋亡。结果:成功构建了人存活素基因siRNA真核表达载体PS。获得了稳定转染的细胞系。与正常SOSP-9607细胞、阴性对照细胞相比,SOSP-9607/PS生长曲线十分平缓,存在显著差异(P<0.01)。westernblot显示SOSP-9607/PS细胞中蛋白表达减少。SOSP-9607/PS凋亡率增加(P<0.01)。结论:特异性siRNA能够明显抑制survivin基因在SOSP-9607细胞中的表达并明显促进细胞凋亡,这为进一步研究survivin在SOSP-9607细胞中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。; 孙宏慧范清宇孙嗣国于哲陈翔纪振钢; 关键词：骨肉瘤存活素 RNA干涉

人骨肉瘤甲氨蝶呤耐药细胞系的建立及其生物学特性: 2010年; 目的:诱导并建立耐甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)的人骨肉瘤细胞系,观察耐药细胞系(SOSP-9607/MTX)的生物学特性。方法:以MTX为诱导剂,采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法,诱导建立人成骨肉瘤耐药细胞系SOSP-9607/MTX。利用光学显微镜观察细胞形态及其结构变化;MTT法检测原细胞株与耐药细胞株对MTX、顺铂(cisplatin,DDP)、卡铂(carboplatin,CBP)、阿霉素(doxorubicin,ADM)、异环磷酰胺(ifosfamide,IFO)、紫杉醇(paclitaxel,PTX)的药物敏感性;细胞生长曲线检测耐药细胞增殖能力;利用流式细胞仪检测细胞周期比例。结果:经12个月的诱导,建立SOSP-9607/MTX耐药细胞系,其对MTX的耐药指数(resistantindex,RI)为原细胞株的4.63倍;耐药细胞系对ADM、DDP、IFO、PTX产生不同程度的耐药指数,对CBP敏感;光镜观察SOSP-9607/MTX细胞异型性与多核现象较原细胞株明显增加,细胞生长曲线显示耐药细胞株增殖能力下降,流式细胞仪检测表明,G2期细胞减少,G1和S期细胞增加(P<0.05)。结论:建立了耐MTX人成骨肉瘤细胞株SOSP-9607/MTX,并观察了耐药株细胞的生物学特性,为进一步研究甲氨蝶呤的耐药机制提供了良好的实验模型。; 马琼裘秀春纪振钢文艳华刘云燕范清宇; 关键词：骨肉瘤 MTX

重组抗HER2融合蛋白基因ScFv／tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用: 2008年; 目的构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv／tBid，并探讨其对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用。方法通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪（FCM）检测E10细胞膜表面HER2的表达。将抗HER2单链抗体基因e23sFv与铜绿假单胞菌外毒素PE的转膜结构域基因（PEⅡ）和tBid基因连接，构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv／tBid，将其克隆入真核表达载体pCMV中构建重组pCMV-ScFv／tBid载体，转染骨肉瘤E10细胞。间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化，AnnexinV染色流式细胞术及TUNEL法检测E10细胞的凋亡情况。结果流式细胞仪检测到E10细胞膜表面有HER2的表达。成功构建重组融合蛋白基因质粒pCMV-ScFv／tBid。重组质粒转染E10细胞后，间接免疫荧光双标记染色检测到E10细胞中tBid的过表达；细胞色素C在细胞质中出现；细胞出现明显的固缩、核浓缩等形态特征。AnnexinV染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高（16．1％VS4．5％）；TUNEL染色显示，E10细胞出现典型的凋亡特征。结论重组抗HER2融合蛋白基因ScFv／tBid可以在转染的骨肉瘤E10细胞中表达，并诱导骨肉瘤细胞发生凋亡。; 裘秀春单乐群纪振钢杨彤涛龙华许彦鸣周勇马保安杨安钢范清宇; 关键词：流式细胞仪检测融合蛋白基因促凋亡作用 SCFV 骨肉瘤

缺氧诱导因子1α、多药耐药相关蛋白1在脊索瘤中的表达及其临床意义被引量：1: 2010年; 目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白、多药耐药相关蛋白1(MRP1)在脊索瘤中的表达水平及其与脊索瘤病理特征和放化疗抵抗之间的关系。方法收集2000年1月-2008年12月接受手术治疗的50例脊索瘤患者的肿瘤组织石蜡标本,另取15例骨软骨瘤标本作为对照。50例脊索瘤患者中男35例,女15例;年龄17～77岁,平均53.3岁;原发病例26例,复发病例24例;病理类型包括普通型48例,去分化型1例,外周型1例。采用免疫组化Envision法检测HIF-1α、MRP1蛋白表达情况,分析其与放化疗抵抗的关系,并探讨HIF-1α、MRP1表达与脊索瘤临床病理特征的关系。结果50例脊索瘤组织HIF-1α、MRP1的阳性表达率分别为80%和74%,均明显高于骨软骨瘤组织(分别为20%和27%,P<0.01)。相关性分析显示,脊索瘤组织中HIF-1α与MRP1的表达呈正相关关系(r=0.80,P<0.01)。脊索瘤组织中HIF-1α、MRP1的表达水平与患者性别、年龄、发病次数及肿瘤大小、部位、分化程度、分期、淋巴结转移均无明显关系。结论脊索瘤组织中HIF-1α和MRP1表达明显增高,且两者表达水平呈正相关,其过度表达可能在脊索瘤的放化疗抵抗中具有重要作用。; 纪振钢龙华裘秀春孙宏慧陈翔杨连甲马保安周勇张明华王育才范清宇; 关键词：缺氧诱导因子1 Α亚基多药耐药相关蛋白质类脊索瘤

人重组caspase-6融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞靶向促凋亡作用被引量：2: 2007年; 目的:探讨Her2靶向重组的caspase-6融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗Her2单链抗体基因e23sFv与绿脓杆菌外毒素PE的转膜结构域基因(PEⅡ)和活性caspase-6基因连接,构建成Immunocasp-6(e23sFv-PEⅡ-casp-6)基因,将其克隆入真核表达载体pCMV中,转染SOSP-9607细胞,间接免疫荧光法检测目的基因表达和细胞形态学变化,通过AnnexinV染色、流式细胞术、MTT法检测来观察其促肿瘤细胞凋亡的作用。结果:转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测出caspase-6的表达,SOSP-9607细胞出现明显的核浓缩、碎裂;电镜观察到细胞质浓缩,胞内空泡,核染色质浓集等典型的凋亡特征;MTT法检测发现细胞的增殖明显被抑制;AnnexinV染色流式细胞术检测可见明显的凋亡细胞,凋亡率为31.4%,较对照组细胞(凋亡率为6.0%)有非常显著的增加(P<0.01)。结论:重组Immunocasp-6基因可以在转染的SOSP-9607细胞中表达,并诱导细胞发生凋亡。; 周本根许彦鸣裘秀春杨彤涛纪振钢苟永胜任民周勇杨安钢范清宇; 关键词：CASPASE-6 HER 融合蛋白骨肉瘤

脊索瘤细胞系CM-319中放化疗抵抗相关基因的表达及临床意义: 2009年; [目的]探讨多药耐药相关基因如缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、多药耐药基因(MDR1)及多药耐药相关蛋白(MRP1)在脊索瘤细胞系CM-319中的表达及临床意义。[方法]用RT-PCR检测HIF-1α、MDR1、MRP1基因表达,间接免疫荧光及免疫细胞化学Envision法检测HIF-1α、MRP1蛋白在CM-319中的表达情况,并分析其与放化疗抵抗的关系。[结果]常氧条件下,在脊索瘤细胞系中能检测到HIF-1α及MRP1 mRNA的表达,但未检测到MDR1 mRNA的表达(P<0.01),间接免疫荧光及免疫细胞化学可以检测到HIF-1α表达在细胞浆及核中,而MRP1主要表达在细胞浆中。[结论]HIF-1α与MRP1的过度表达在脊索瘤的放化疗抵抗中可能具有重要作用,而MDR1表达未被检测到,提示脊索瘤的放化疗抵抗主要与HIF-1α和MRP1相关。; 纪振钢龙华张殿忠裘秀春孙宏慧马琼刘云燕文艳华王育才范清宇; 关键词：缺氧诱导因子1Α 多药耐药基因1 多药耐药相关蛋白1 脊索瘤

纪振钢

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