薛茜
- 作品数：24 被引量：35H指数：4
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- microRNA对模拟失重环境下T细胞功能的影响
- 长时间的太空飞行可以引起心血管和血液系统功能降低,肌肉萎缩,免疫功能下降和骨质疏松.研究表明,在微重力的航天飞行环境中,免疫细胞在体内的分布发生了变化,免疫细胞的活化和增殖受到抑制、细胞因子的产生和分泌以及细胞内信号转导...
- 王涛薛茜李伟杨安钢
- 关键词：模拟失重T细胞MICRORNA
- 醛糖还原酶通过cAMP反应元件结合蛋白通路调控小胶质细胞向M2型极化被引量：1
- 2014年
- 目的探讨醛糖还原酶(AR)调控小胶质细胞极化的机制。方法体外培养BV2小胶质细胞,给予醛糖还原酶抑制剂(ARI),通过免疫组织化学染色和酶标仪检测荧光强度的方法检测细胞4-羟基反式-2-壬烯酸(HNE)表达;体外培养N9小胶质细胞,分别用脂多糖(LPS)、HNE、醛糖还原酶抑制剂fidarestat(ARI)及其组合刺激后,利用Western blot法检测在不同刺激条件下N9细胞调控细胞极化和极化相关蛋白的变化;在上述刺激的条件下,联合应用cAMP反应元件结合蛋白(CREB)抑制剂KG-501,利用Western blot法检测极化相关蛋白的变化。结果阻断AR后使HNE在BV2细胞内堆积;Western blot法检测发现ARI通过增加磷酸化CREB的表达来调控N9细胞向M2型极化;应用CREB抑制剂后,能阻断上述过程。结论阻断AR可以使CREB的表达上调进而促进小胶质细胞向M2型极化。
- 张倩刘玲薛茜郭虹敏刘芳芳卞干兰于才勇鞠躬王键
- 关键词：醛糖还原酶脊髓损伤小胶质细胞CREB
- T细胞活化相关miRNA的筛选及靶基因报告系统的构建
- 目的：寻找并证实参与CD4+T细胞活化的miRNA,通过构建双荧光素酶报告系统进一步鉴定相关miRNA的靶基因。意义：筛选参与T细胞活化过程的miRNA及其靶分子有助于我们研究miRNA与适应性免疫应答之间的关系。方法：...
- 李伟薛茜郭张燕王涛韩涛孟艳玲杨安钢
- 关键词：MIRNAT淋巴细胞活化
- 人截短型凋亡诱导因子AIFΔ1-530的表达对HeLa细胞的促凋亡作用
- 目的:观察人截短型AIF(AIFΔ1-530)基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用。方法:在人截短AIF(AIFΔ1-120)基因克隆成功的基础上,进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH...
- 张巍张勇薛茜李伟杨安钢
- 关键词：凋亡诱导因子HELA细胞细胞凋亡
- 文献传递
- 针对S基因的siRNA或shRNA表达框对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用比较被引量：2
- 2007年
- 目的 化学合成针对乙型肝炎病毒（HBV）S基因的siRNA，同时制备针对相同区段的shRNA表达框，并比较二者对HepG2．2．15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用。方法 化学合成针对HBVS基因的带有FITC标记的siRNA，设计合成带有FTrc标记的引物，PCR扩增含有RNA聚合酶Ⅲ启动子H1序列和shRNA编码序列的表达框，并对扩增产物进行纯化，将等摩尔数siRNA和shRNA表达框分别用脂质体转染稳定表达HBV的HepG2．2．15细胞，转染1d后流式细胞仪检测转染效率，转染3d后RT-PCR检测靶基因mRNA的水平，用SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测HBsAg的表达。收集转染前和转染后1、3、5和7d的细胞培养上清，检测HBsAg水平，同时用荧光定量PCR方法检测HBV DNA的含量。结果成功制备了针对HBVS基因的shRNA表达框，将其与等摩尔数siRNA分别转染HepG2．2．15细胞后，RT-PCR证实细胞中HBV mRNA水平降低，SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测到HBsAg的表达受到抑制，细胞培养上清中HBsAg和HBV DNA含量下降。与siRNA相比，shRNA表达框对HBV的抑制作用虽然起效较慢，但持续时间更长。结论shRNA表达框和siRNA均可明显抑制HBV的转录和表达，与siRNA相比，shRNA表达框能够更持久地抑制靶基因的表达。
- 温伟红刘家云王凯薛茜孟艳玲赵晶贾林涛薛采芳王成济杨安钢
- 关键词：乙型肝炎病毒RNA干扰SIRNA
- 人抗HBsAg单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因的构建、表达及活性鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的:构建人抗HBsAg单链抗体(ScFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protam ine,tP)融合基因,在大肠杆菌中进行表达纯化并分析ScFv/tP融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HBsAg ScFvHBs15基因,在其3′端引物引入tP的编码基因,PCR扩增获得ScFv/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET-32 a后,在大肠杆菌BL2 l(DE3)LysS内诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及W estern b lot鉴定后,用N i-NTA螯合层析介质纯化.间接ELISA分析ScFv/tP融合蛋白的亲和活性,凝胶迁移阻滞实验检测ScFv/tP融合蛋白与DNA结合的情况.结果:成功获得人抗HBsAg ScFv/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中表达,表达的ScFv/tP融合蛋白不仅保持了与HBsAg结合的能力,同时具有DNA结合活性.结论:ScFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,为该ScFv的进一步应用奠定了基础.
- 孟艳玲温伟红薛茜张勇张巍鲍炜任君琳贾林涛王成济杨安钢
- 关键词：单链抗体乙型鱼精蛋白类
- 人CD4^+T淋巴细胞活化相关miRNA的筛选及其靶分子鉴定
- 2010年
- 目的:筛选与CD4+T淋巴细胞活化相关的miR-NA,确定其靶分子。方法:用抗CD3的单克隆抗体(mAb)和抗CD28的mAb诱导Jurkat细胞活化,利用miRNA芯片检测并筛选出活化前后表达丰度有显著变化的microRNA,用定量RT-PCR证实筛选出的miRNA在Jurkat细胞活化的差异表达。设计引物构建miRNA的表达载体。利用生物信息学软件预测miRNA的靶分子,将靶分子mRNA的3′UTR克隆入pGL3Luciferase报告基因载体中。观察转染的miRNA对报告基因表达的影响。结果:流式细胞术(FCM)证实了抗CD3的mAb和抗CD28的mAb可以诱导Jurkat细胞的活化。经miRNA芯片检测表明,Jurkat细胞活化前后有5种miRNA表达水平明显下降,定量RT-PCR证实了miRNA芯片的结果。成功构建了部分预测靶分子的荧光素酶报告基因载体。双荧光素酶报告系统检测了miR-181c对靶分子的干扰作用。结论:miR-181c与人CD4+T淋巴细胞的活化有着密切的关系,CD69可能是miR-181c的一个靶分子。
- 薛茜郭张燕李伟王涛孟艳玲杨安钢
- 关键词：MIRNAT淋巴细胞活化
- miRNA在免疫系统中的研究进展被引量：10
- 2010年
- 薛茜杨安钢
- 关键词：MIRNA核苷酸免疫系统
- Caspase-9特异性siRNA表达载体构建及基因沉寂效应研究
- 目的:构建Caspase9特异性siRNA表达载体,检测干涉效果及其对细胞功能的影响。方法:选取干涉靶序列证实,设计合成siRNA的编码序列,将其克隆进表达载体pSUPER-puro,经酶切鉴定和DNA测序,用脂质体介导...
- 张勇张巍薛茜李伟孟艳玲杨安钢
- 关键词：HELA细胞细胞凋亡
- 文献传递
- PB-GF转座子系统的构建及其在真核细胞中转座的研究被引量：1
- 2014年
- 目的构建能在真核细胞中发生转座的PB-GF(piggyBac gene-finder)转座子系统,作为发现和研究编码基因的工具。方法通过克隆技术,构建PB转座子载体pPB[CMV-neo]和PB转座酶表达载体pCAG-PBase,转染HeLa细胞,G418筛选和亚甲基蓝染色,验证PB转座酶在真核细胞中的转座能力。构建PB转座子载体pPB[β-Gal-pA/act-EGFP],使其包含两侧翼端加入PB转座酶识别位点反向末端重复序列(ITR),ITR1和ITR2,以及启动子陷阱和PolyA陷阱的DNA片段;同时与PB转座酶表达载体pCAG-PBase一起,构成PB-GF转座子系统。将PB-GF转座子系统转染HeLa细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测PolyA陷阱报告基因EGFP的表达;通过X-gal染色,观察启动子陷阱报告基因β-Gal的表达,明确PB-GF转座酶系统在真核细胞中的转座情况。结果成功构建成以转座子PiggyBac为基础的,含有启动子和PolyA陷阱的PB-GF转座子系统,并用该系统转染HeLa细胞24 h后观察到有相当数量的EGFP和LacZ阳性的细胞出现,转座效率高达26%。结论成功构建PB-GF转座子系统并可以在真核细胞中发生转座。
- 雷占翔刘芳芳于才勇卞干兰郭虹敏刘玲薛茜鞠躬王键
- 关键词：转座子基因组
