谢小燕
- 作品数：57 被引量：46H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细胞培养基及其用途
- 本发明涉及细胞培养基及其用途。其中，培养基包含：基础培养基，该基础培养基为AminomaxC-100培养基；bFGF；以及DMOG。利用本发明的细胞培养基对分离的毛乳头细胞进行体外培养，能够有效地使得毛乳头细胞扩增，从而...
- 裴雪涛陈琳岳文习佳飞师伟姚海雷吕洋张秀媛谢小燕刘大庆
- 微小RNA miR-125b真核表达载体的构建及其对细胞增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:构建微小RNA125b(miR-125b)真核表达载体,研究其过表达后对细胞增殖的影响。方法:以pcDNA3.1(-)-myc-his载体为模板,PCR扩增CMV启动子,克隆入pHRS-1cla-EGFP慢病毒载体,构建pHRS-1cla-CMV-EGFP载体;以从人全血中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增pri-miR-125b序列,将其克隆到pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP慢病毒表达载体;将pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP表达载体瞬时转染入293FT细胞,用实时定量PCR技术对miR-125b在转录水平的表达进行检测,用MTT及Brdu法检测miR-125b过表达后对293FT细胞增殖的影响。结果:构建的pHRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP真核表达载体经质粒酶切和测序鉴定正确,转染细胞后72h经实时定量PCR检测,成熟miR-125b表达上调约750倍(P<0.01),说明其能有效高表达,MTT及Brdu法检测显示细胞增殖受到明显抑制(P<0.01)。结论:构建了pHRS-1cla-miR-125b-CMV-EGFP慢病毒真核表达载体,转染293FT细胞后能高效表达成熟miR-125b,同时证明过表达miR-125b能使细胞的增殖受到非常明显的抑制。
- 曾泉谢小燕赵爱华王静雪陈琳岳文裴雪涛
- 关键词：微小RNA真核表达载体细胞增殖
- 细胞角蛋白19启动子调控的双报告载体的构建及其在肝干/祖细胞分化研究中的应用被引量：3
- 2010年
- 肝干/祖细胞是肝细胞和胆管上皮细胞(biliary epithelial cells,BECs)共同的前体细胞,为了对这一前体细胞的分化情况进行研究,利用报告基因来监测肝干/祖细胞的分化走向.首先,通过PCR方法从肝癌细胞系HepG2的全基因组中克隆了细胞角蛋白19(CK19)启动子片段,构建了CK19启动子调控的海肾荧光素酶和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)双报告载体(pSicoR-CK19-hrl-mrfp).其次,将上述慢病毒载体转染肝干/祖细胞后,通过流式细胞分选获得稳定转染的细胞株.再次,将上述细胞株与表达"上皮形态发生素"(Epimorphin,EPM)的PT67细胞共培养后,整合有pSicoR-CK19-hrl-mrfp表达载体的肝干/祖细胞不仅形态发生了变化,而且排列为二维环状结构,另外还检测到由CK19启动子启动表达的海肾荧光素酶和RFP,细胞形态和基因表型都证明肝干/祖细胞经诱导已经分化成为BECs.与此形成对照的是肝干/祖细胞与不表达EPM的PT67细胞共培养后,没有观测到上述的变化.所以,CK19启动子调控的双报告载体不仅可以实时地显示肝原始细胞在不同的诱导环境下的分化走向,而且还可以定量地检测CK19启动子活性的变化情况.总之,这一载体的成功构建将为研究肝干/祖细胞的分化提供了便捷的工具,同时也有助于筛选可诱导肝干/祖细胞定向分化的分子.
- 张衡贾雅丽岳文陈琳谢小燕南雪何丽娟裴海云裴雪涛
- 关键词：细胞角蛋白红色荧光蛋白分化
- Wnt 3a在神经干细胞向多巴胺能神经元分化过程中作用的研究被引量：7
- 2006年
- Wnt信号在中枢神经系统发育过程中起重要的作用,控制着细胞的生长及分化.Wnt3a是Wnt家族的成员之一,对神经干细胞的增殖及分化有一定的调控作用.将重组Wnt3a腺病毒转入神经干细胞中,研究Wnt3a在定向诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化过程中的作用.将神经干细胞分为4组,对照组(不加任何诱导因子组)、抗坏血酸诱导组(AA组)、Wnt3a重组腺病毒诱导组(Wnt3a组)以及Wnt3a重组腺病毒加抗坏血酸诱导组(Wnt3a+AA组).结果显示,Wnt3a组细胞中的多巴胺能神经元前体细胞特异性标志Nurr1表达量显著增多,Wnt3a+AA组多巴胺能神经元明显多于AA组,酪氨酸羟化酶(TH)在mRNA水平上的表达是AA组的1.86倍.蛋白质印迹及免疫细胞化学染色显示,各诱导组均有TH的表达,Wnt3a组和AA组多巴胺能神经元阳性细胞数比例分别为(5.76±3.34)%和(37.42±2.54)%,与Wnt3a+AA组(73.96±2.61)%比较,差异有统计学意义(P<0.05).利用高效液相色谱法检测到诱导后的细胞可分泌多巴胺.结果表明,Wnt3a可促进神经干细胞向多巴胺能神经元前体细胞分化,再通过抗坏血酸的诱导作用,在体外可获得大量的多巴胺能神经元,这些神经元有分泌多巴胺的功能.
- 韩姝师伟李艳华姚海雷谢小燕陈琳施双双白慈贤南雪闫舫王韫芳裴雪涛
- 关键词：WNT3A神经干细胞分化多巴胺能神经元
- 红系祖细胞冻存液及其应用
- 本发明公开了红系祖细胞冻存液及其应用，其中，该红系祖细胞冻存液包含：DMSO；HSA；以及血浆。该冻存液能够有效保存红系祖细胞，并且保存时间长，细胞复苏后增殖能力强，细胞回收率高。
- 陈琳裴雪涛习佳飞谢小燕周军年李艳华岳文房芳南雪刘大庆
- 文献传递
- 高效诱导人胚胎干细胞成为内皮祖细胞
- 2013年
- 血管的发生和发育不仅对胚胎形成中各器官的发育分化十分重要,并且对成体的创伤修复和生殖功能也具有重要意义.血管内皮细胞是形成心血管封闭管道系统的形态基础,体外多种细胞可经诱导分化产生出内皮祖/内皮细胞(endothelialprogenitor/endothelial cells,EPCs/ECs),但是存在一些不足.鉴于人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)诱导分化的全能性和长期增殖能力,为EPCs/ECs提供了新的来源.现有文献报道,hESCs诱导分化为EPCs/ECs的比例较低,为了提高该诱导分化效率,我们使用分阶段的二维诱导方法,首先将细胞接种在超纯层纤连蛋白(Matrigel)上,之后通过在不同阶段添加不同的因子,最终获得CD31+KDR+细胞的比例可以达到16%.进一步内皮诱导分化的结果显示,获得的EPCs/ECs的比例可以达到约32%,这些细胞具有在Matrigel上形成血管样结构的能力,可结合植物凝集素.实时定量PCR的结果显示,诱导分化所得的细胞表达众多内皮相关基因,并且免疫荧光的结果也表明部分细胞表达内皮细胞特异性表面标志CD31.
- 房芳张博文何丽娟周军年王静雪岳文谢小燕裴雪涛
- 关键词：人胚胎干细胞内皮细胞诱导分化
- 神经元限制性沉默因子与胰岛素在成年小鼠胰腺中的表达
- 2011年
- 目的:观察神经元限制性沉默因子(NRSF)在正常成年小鼠胰腺组织中的表达情况。方法:以6～8周BALB/c小鼠胰腺为实验材料,制备冰冻切片,与地高辛标记的NRSF cDNA探针进行原位杂交,观察mRNA表达,并结合免疫组织化学方法检测NRSF和胰岛素的表达。结果:原位杂交显示,NRSF mRNA仅表达于胰腺组织外分泌部腺泡腺细胞中,胞浆呈蓝紫色,与免疫荧光组织化学检测NRSF蛋白表达的部位一致,而胰岛细胞中无NRSF mRNA及蛋白的表达。免疫酶组织化学染色显示,胰岛大部分细胞中表达胰岛素,胞浆染成黄棕色,而腺泡腺细胞则不表达胰岛素。结论:NRSF与胰岛素不存在共定位关系,即成年小鼠胰岛细胞不表达NRSF,而表达胰岛素。提示NRSF蛋白表达的消失可能是建立完全分化成熟、具有完好分泌反应的胰岛细胞所必需的。
- 陈琳郭小丽岳文吕洋谢小燕姚海雷陈海旭南雪李艳华裴雪涛
- 关键词：神经元限制性沉默因子胰岛素胰岛细胞原位杂交
- 脐带血造血干/祖细胞体外分化为不同阶段红系祖细胞的动力学观察被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨体外培养脐带血单个核细胞定向诱导分化为不同阶段红系祖细胞的动力学变化情况。方法:用0.5%甲基纤维素沉降脐带血红细胞及人淋巴细胞分离液密度梯度离心法得到单个核细胞,在含EPO、SCF、IGF-1等细胞因子的无血清培养体系中诱导其定向分化为红系祖细胞,观察细胞增殖、存活率、细胞集落形成情况,并检测不同阶段细胞红系特异性表面标志CD71和CD235a的表达。结果:随着培养时间的延长,细胞数逐渐增多,14 d细胞可扩增140倍左右,收集诱导后的细胞进行瑞氏吉姆萨染色,可见大量红系祖细胞,诱导后的细胞集落形成能力强,形成的克隆大部分为红系集落。诱导过程中,14 d前CD71、CD235a的表达逐渐增高。按细胞表面标志表达的不同可将诱导的细胞分为4群,分别对应红系祖细胞的不同阶段;随着诱导天数的增加,各时间点细胞对应的早期红系祖细胞群(P2、P3)比例逐渐下降,中晚期红系祖细胞群(P4、P5)的比例逐渐上升。结论:无血清培养基添加细胞因子组合的红系诱导培养体系可较好地诱导扩增红系祖细胞,流式分选可获得相对均一而处于不同分化阶段的红系祖细胞群体。获得了红系祖细胞体外分化的动力学数据,为今后进一步优化红系诱导分化体系获得均一的红系祖细胞奠定了基础,并对未来利用干细胞制备均一的红系祖细胞应用于临床治疗有一定的指导作用。
- 王金明习佳飞曲洺逸王静雪刘一鸣陈琳谢小燕李艳华南雪岳文裴雪涛
- 关键词：脐带血红系祖细胞单个核细胞细胞动力学
- 核酸在提高细胞巨核分化效率中的用途
- 本发明提出了核酸在提高细胞巨核分化效率中的用途以及提高细胞巨核分化效率的方法，所述细胞具有巨核分化的潜能，所述核酸具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。在细胞中过表达具有SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的核酸，...
- 裴雪涛谢小燕曲洺逸岳文房芳陈琳何丽娟张博文
- 文献传递
- 红细胞生成素基因修饰的间充质干细胞条件培养基促进人胚胎干细胞向造血细胞分化被引量：2
- 2010年
- 本研究探讨EPO基因修饰的间充质干细胞条件培养液对人胚胎干细胞向造血细胞诱导分化的影响。通过重组慢病毒系统感染人间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),建立能够稳定高效表达红细胞生成素(eryth ropoietin,EPO)的细胞株EPO/MSC。用EB培养液诱导人胚胎干细胞形成拟胚体,然后用EPO/MSC条件培养液处理拟胚体细胞;通过免疫荧光、集落形成实验和RT-PCR检测等方法对诱导的细胞进行了相关鉴定。结果表明:EPO/MSC体外能够稳定表达EPO。条件培养液诱导生成的细胞表达造血干/祖细胞抗原CD34和相关造血基因,可产生不同的造血集落,且明显高于对照组。结论:EPO基因修饰的间充质干细胞条件培养液能显著促进人胚胎干细胞向造血细胞分化。
- 杨超吉蕾岳文王若永李艳华习佳飞谢小燕何丽娟南雪裴雪涛
- 关键词：胚胎干细胞红细胞生成素造血细胞诱导分化
