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酿酒酵母荧光定位报告菌株的开发: 2020年; 【目的】为了给外源蛋白在酿酒酵母细胞中的定位提供参考,构建酿酒酵母荧光定位报告菌株。【方法】运用染色体同源重组的方法,将突变的、已进行酵母表达优化的红色荧光蛋白RedStar分别整合到12个酵母细胞器标记蛋白的C端,与之进行融合表达,用特异性引物对每一个酵母荧光定位报告菌株进行PCR扩增和测序验证,用激光共聚焦显微镜进行荧光检测,对线粒体和细胞核进行特异性染料染色,用EGFP标记沙门氏菌已知定位蛋白SipA,与构建的相应荧光定位报告菌株进行共定位。【结果】构建的酿酒酵母荧光定位报告菌株可分别标示酵母细胞的肌动蛋白、晚期胞内体、细胞核、核周质、纺锤体、线粒体、过氧化物酶体、脂滴、初级内吞体、次级内吞体、高尔基体顺面及高尔基体反面。PCR扩增及测序验证、荧光检测、染料与相应报告菌株的共定位、已知定位蛋白SipA与相应报告菌株的共定位均提示报告菌株构建成功。【结论】这些报告菌株的构建,为日后在酵母中观察细胞器动态变化,以及未知蛋白在酵母中的定位提供了基础性工具。; 杨丽娟赖芬菊谢宁清戴益民; 关键词：蛋白定位共定位

猪黑素皮质素受体1(MC1R)基因与毛色表型的研究被引量：29: 2003年; 猪的毛色表型虽然与经济性状没有直接相关 ,但它却对经济效益产生重要影响 ,在猪育种实践、商品猪生产等方面都有应用。结合PCR AccⅡ RFLP、PCR BspHⅠ RFLP及PCR SSCP技术 ,分析了 16个全同胞家系和金华猪、嘉兴黑猪、玉山黑猪、乐平花猪、上高两头乌猪及嵊县花猪等 6个地方猪种随机采样个体的黑素皮质素受体 1(MC1R)基因型。结果显示 ,地方猪种在MC1R位点携带高频率的显性黑等位基因ED1 ,表明我国地方猪种的黑毛色可能主要由显性黑等位基因ED1 调控。通过对嵊县花猪MC1R位点的分析 ,首次发现PCR SSCP证据的新序列 ,与已知的其他 5个等位基因带型不同。家系个体的分析结果进一步验证了ED1 对EP、e为完全显性 ,EP; 邓素华高军任军陈克飞丁能水艾华水林万华王文君刘宝生赖芬菊黄路生; 关键词：PCR-SSCP 毛色

酵母双杂交筛选与呼肠孤病毒σ1、σ1S互作宿主蛋白被引量：2: 2018年; 提取猪肠上皮细胞IPEC-1的总RNA,构建了IPEC-1的靶标cDNA文库。随机挑取文库克隆子进行PCR扩增,发现插入片段长度为200～1 500bp,文库的重组率为100%。以猪源呼肠孤病毒GD-1株S1基因节段为模板,通过PCR扩增,定向克隆构建诱饵载体pGBKT7-S1、pGBKT7-S1s。通过菌落PCR和测序验证的质粒被转化至酵母菌株Y2H Gold,诱饵载体pGBKT7-S1、pGBKT7-S1s均能在酵母细胞中正确表达出对应的σ1和σ1S蛋白,且无自激活活性,对酵母细胞无毒性,满足文库筛选实验的要求。将含有pGBKT7-S1、pGBKT7-S1s的酵母菌株Y2H Gold分别与靶标cDNA文库菌株Y187进行杂交,筛选、验证、测序后得到13个与σ1、6个与σ1S相互作用的宿主蛋白,其中的1个蛋白与σ1、σ1S同时存在相互作用。本试验成功构建了适用于研究肠道细菌、病毒作用机制的猪肠上皮细胞IPEC-1cDNA文库,筛选出18个与猪呼肠孤病毒σ1或σ1S的互作蛋白,为研究呼肠孤病毒与宿主相互作用,以及鉴定疾病控制的新靶标提供了线索。; 杨丽娟张兰桥段怡芸戴益民赖芬菊; 关键词：呼肠孤病毒酵母双杂交

犬胆小症的成因与防治: 2012年; 随着我国家庭宠物饲养量的不断攀升，宠物心理健康越来越受到关注。现就常见的犬胆小症进行分析，希望能给广大养犬爱好者提供参考。; 陈蓉蓉刘剑飞赖芬菊; 关键词：养犬家庭宠物心理健康饲养量

酵母双杂交筛选与胞内劳森菌LI0902互作宿主蛋白被引量：2: 2020年; 为了鉴定胞内劳森菌(Lawsonia intercellularis,LI)外膜蛋白LI0902在细菌感染中的作用,本试验以胞内劳森菌疫苗DNA为模板,设计特异性引物进行PCR扩增,并成功构建诱饵表达载体pGBKT7-LI0902。将通过菌落PCR和测序验证的质粒转化酵母菌株Y2H Gold后,发现LI0902能在酵母细胞中正确表达,对酵母细胞无毒性,且无自激活活性。将含有pGBKT7-LI0902的酵母菌株Y2H Gold与猪肠上皮细胞系IPEC-1 cDNA文库菌株Y187进行杂交,筛选、验证、测序后得到3个与LI0902相互作用的宿主蛋白。本试验研究了胞内劳森菌与猪肠上皮细胞相互作用,为揭示增生性肠炎的致病机理提供了线索。; 张兰桥赖崇德戴益民张庆华钟其旺赖芬菊; 关键词：酵母双杂交

提高农业院校细胞生物学课程教学效果的尝试与实践被引量：3: 2020年; 作为农业院校生物学专业的核心课程,细胞生物学具有知识更新快、课程内容多而零散、传统上课效果不佳等特点。文章针对如何提高细胞生物学教学效果,激发学生学习兴趣,提升学生自主学习能力等,总结了教学过程中的几点尝试:一是优化理论课教学内容,增强授课的生动性与趣味性;二是增加文献阅读和讨论,培养学生独立学习、整合学习资源的能力;三是鼓励学生进入实验室,提高教与学的效果。实践证明,这些措施可有效提高本院各专业细胞生物学的教学效果。; 戴益民刘志文陈仓赖芬菊; 关键词：农业院校细胞生物学教学改革

猪肥大/干细胞生长因子受体(KIT)基因和黑素皮质素受体(MC1R)基因与毛色表型的相关性研究: 赖芬菊; 关键词：KIT基因 MC1R基因荣昌猪

一株嗜热偶氮染料脱色菌的分离鉴定及其脱色特性被引量：4: 2016年; 从纺织厂的工业废水排污口取样,分离筛选出了一株嗜热的高效偶氮染料脱色菌PDR2。通过形态学、生理生化特征以及16S r DNA基因序列分析等方法对该菌株进行鉴定,发现该菌为厌氧芽孢杆菌,与Anoxybacillus sp(GQ471935)同源性最高。此外,分别考察了菌株PDR2在不同碳源、氮源、p H以及培养温度等条件下对偶氮染料直接黑38脱色性能的影响,在此基础上进一步研究了菌株PDR2对不同浓度直接黑38染料的耐受性。结果表明,菌株PDR2在55℃、p H 6.0且以葡萄糖为碳源,牛肉膏和蛋白胨为混合氮源时其脱色效果最佳,且菌株对偶氮染料直接黑38有着较强的耐受能力,在染料浓度低于0.4 g·L^(-1)时其脱色效果良好。在最佳条件下静置培养24 h时,菌株PDR2对0.1 g·L^(-1)直接黑38染料的脱色率高达92.34%,展出了良好的应用潜力。; 胡景华朱向东孔令保赖芬菊刘好桔陈浪张庆华; 关键词：偶氮染料嗜热菌脱色特性

一例致病性大肠杆菌的分离鉴定及诊治被引量：5: 2018年; 2016年3月,江西新余某猪场10～20日龄哺乳仔猪出现了严重下痢。为了获得最佳的预防和治疗方案,笔者现场采集了5头病猪的5份小肠内容物样品,接种于麦康凯及伊红美兰培养基进行细菌分离纯化。经培养特性试验和生化试验鉴定出4株大肠杆菌。对这4株大肠杆菌进行16S rRNA基因扩增及测序分析,所得序列在Gen Bank中进行同源性搜索并构建分子系统树,鉴定均为致感染性腹泻的大肠杆菌。药敏纸片法试验表明这4株大肠杆菌耐药性很强,对大多数抗生素不敏感,但对头孢噻肟、头孢曲松敏感或中度敏感。以这两者作为治疗药物,猪场病情得到有效控制。; 戴益民廖财智赖芬菊; 关键词：仔猪腹泻大肠杆菌耐药性

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