赵文然
- 作品数：44 被引量：96H指数：5
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- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省自然科学基金更多>>
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- 用痘苗病毒增强人类白血病细胞抗原性的初步研究
- 赵文然
- 热休克蛋白70与肠道病毒感染被引量：1
- 2016年
- 热休克蛋白70（HSP70）是HSP70家族中的重要成员。HSP70的主要功能是作为分子伴侣参与蛋白质的折叠与修饰。在病毒感染时，HSP70参与机体的抗感染免疫，从而保护细胞。因而研究HSP70与肠道病毒的相互作用具有意义。
- 王华鹏赵文然
- 关键词：热休克蛋白70肠道病毒TOLL样受体细胞凋亡
- Sulforaphane抑制热灭活大肠杆菌诱导的HeLa细胞凋亡被引量：1
- 2019年
- 目的研究Sulforaphane(SFN)对细胞凋亡的抑制作用及其在脓毒症中对细胞的保护作用。方法将HeLa细胞分为4组:对照组、热灭活大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)处理组、SFN处理组(SFN组)和热灭活E.coli+SFN组。酶联免疫反应检测炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α;流式细胞术(annexin V/propidium iodide双染)检测细胞凋亡;免疫荧光检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量及线粒体膜电位的变化;Western blot检测活化的caspase 3、bax和bcl-2水平。结果热灭活E.coli处理后,细胞产生的炎症因子IL-1β[(121.13±8.44)pg/mL比(36.67±5.82)pg/mL,P<0.05]和TNF-α[(123.83±7.32)pg/mL比(20.63±1.91)pg/mL,P<0.05]明显升高、凋亡细胞数明显增加[(32.49±3.96)%比(12.52±1.37)%,P<0.05]、活化的caspase 3[(2.28±0.19)比(1.01±0.19),P<0.05)]和BAX[(4.81±0.80)比(1.04±0.25),P<0.05)]水平明显升高,而bcl-2[(0.27±0.08)比(0.96±0.18),P<0.05)]水平明显降低。用SFN处理后(包括SFN组、热灭活E.coli+SFN组),IL-1β[(45.41±13.16)pg/mL比(121.13±8.44)pg/mL,P<0.05],TNF-α[(30.3±6.0)pg/mL比(123.8±7.3)pg/mL,P<0.05]水平明显降低、凋亡细胞明显减少[(11.34±2.05)%比(32.49±3.96)%,P<0.05]、活化的caspase3[(1.01±0.07)比(2.282±0.19),P<0.05)]、BAX[(2.15±0.14)比(4.81±0.80),P<0.05)]明显减少,而bcl-2[(1.34±0.18)比(0.27±0.08),P<0.05)]水平明显增加。与此相对应,与灭活E.coli处理的细胞相比较,加入SFN(包括SFN组和热灭活E.coli+SFN组),ROS水平明显下降[(1.27±0.17)比(6.30±1.50),P<0.05)],而线粒体膜电位明显上升[(1.18±0.10)比(0.14±0.01),P<0.05)]。结论SFN可有效抑制热灭活E.coli诱导的HeLa细胞调亡、稳定线粒体膜电位、降低ROS、抑制炎性因子的产生。因此,SFN可能作为脓毒血症时保护细胞的药物。
- 张箭张箭瞿丛王瑶王瑶赵文然
- 关键词：SULFORAPHANE细胞凋亡活性氧炎症因子
- 含有柯萨奇B3病毒2C蛋白中1-79位氨基酸基序的蛋白质及其应用
- 本发明公开了一种含有柯萨奇B3病毒2C蛋白中1-79位氨基酸基序(SEQ ID NO.1所示)的蛋白质及其应用，优选的，所述的蛋白质为柯萨奇B3病毒2C蛋白及其截短型蛋白，更优选为SEQ ID NO.1所示的蛋白质。本发...
- 钟照华王燕赵文然佟雷林乐勋王瑞雪秦颖
- 人类磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶的真核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2006年
- 目的在真核细胞中表达人磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)并制备抗PHGPx多克隆抗体。方法用特异引物从人睾丸组织cDNA文库中扩增出人线粒体型PHGPxcDNA,与真核表达载体pcDNA3.1/His重组,在COS-1细胞内表达PHGPx。用大肠杆菌表达的突变的PHGPx免疫动物,制备抗PHGPx抗体。结果重组体pcDNA-PHGPx转染的COS-1细胞表达了人PHGPx融合蛋白,PHGPx活性为111.5μmol·mg-1·min-1,高于对照组5倍。免疫扩散测得抗PHGPx多克隆抗血清滴度为1∶16;用于蛋白印迹时稀释倍数为1∶500,可见特异免疫沉淀条带。结论人PHGPx在COS-1细胞内获得了表达,抗PHGPx多克隆抗体有特异性,可以用于重组表达的PHGPx的鉴定。
- 赵文然钟翔宇孙辉周令望曲章义钟学宽
- 关键词：基因表达抗体硒
- 影响以问题为基础学习教学方法成效的关键因素被引量：18
- 2008年
- 以问题为基础的学习（problem—based leaning，PBL）是以学生为中心、基于问题的、学科交叉的教学方法。成功的PBL是学生通过自主讨论过程获得多学科融合的知识，同时培养分析和解决问题的能力以及交流能力等多种能力。在实践中发现，一个以系统为基础的垂直整合的课程计划，辅以适当的硬件设备，10人以下的分组规模，编写严密的案例，培训良好的指导教师和学生，对于PBL教学效果具有较大的影响。
- 钟照华张凤民赵文然程志张雅芳曹博曹德品
- 痘苗病毒增强人类白血病细胞免疫原性的实验研究被引量：1
- 1990年
- 作者应用痘苗病毒处理人白血病细胞制备瘤苗,免疫正常615系小鼠。结果发现,实验组小鼠的NK细胞活性、白细胞介素-2(IL-2)诱生水平显著提高,T辅助细胞数及T_(11)/Ts比值显著提高(与对照组相比,P<0.01或P<0.05),未经痘苗病毒处理的人白血病细胞则无此作用。
- 赵文然谷鸿喜李绍贤孟德润王孟学夏立娟
- 关键词：痘苗病毒白血病细胞免疫疗法
- 表达海肾荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型质粒的构建及鉴定
- 2015年
- 目的 构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型（coxsackievirus B3,CVB3）,以实现定量检测CVB3.方法 将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置,重组病毒基因组DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序,评价重组病毒的荧光素酶表达,扩增重组病毒并测定重组病毒株毒力.结果 成功构建2个重组病毒质粒,转染HeLa细胞,表达海肾荧光素酶（humanizedform of Renilla Luc,hRLuc）、荧火虫荧光素酶（firefly luciferase,Luc）的pCVB3-hRLuc和pCVB3-Luc转染后第1代均可检测到hRLuc和Luc活性,但只有pCVB3-hRLuc转染细胞有明显细胞病变.扩增和纯化的CVB3-hRLuc病毒感染HeLa细胞可见明显细胞病变及hRLuc活性.扩增的CVB3-Luc没有观察到明显的细胞病变,且从第2代病毒开始就未能检测到荧光素酶活性.用HeLa细胞经空斑形成试验进行毒力测定,CVB3-hRLuc的毒力为1.4（107 pfu/ml）.结论 成功构建了表达hRLuc的重组CVB3毒株CVB3-hRLuc,为定量研究CVB3感染打下基础.
- 王慧武帅钦陈阳钟照华赵文然佟雷
- 关键词：柯萨奇病毒B组3型基因重组
- 5＇非编码区嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型毒力的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 观察5＇非编码区（5＇UTR）嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型（CVB1）毒力和致病性的影响.方法 定点诱变将CVB1基因组5＇UTR第563～573碱基嘧啶富集区5个嘧啶置换为嘌呤,获得突变株CVB1/m563-573.空斑纯化病毒后,利用细胞病变效应（CPE）试验、空斑形成试验、一步生长曲线和半数致死量（LD50）等方法比较CVB1/m563-573与其原型株CVB1/wt的毒力.结果 测序结果显示,CVB1/m563-573的5＇UTR嘧啶富集区发生C565A、U567C、U568A、U570A、U572G突变,与预期一致.CPE试验表明,CVB1/m563-573的感染性较CVB1/wt稍弱（A 490分别为0.710±0.074、0.812±0.092）,但差异无统计学意义（t=-2.204,P〉0.05）.空斑形成试验显示,46、58 h时间点CVB1/m563-573形成空斑的数量为（6.40±1.52）×103、（11.60±2.19）×103 pfu（空斑形成单位）/L,直径为（2.00±0.35）、（2.47±0.41）mm,CVB1/wt的空斑数量为（8.40±2.51）×103、（11.80±1.92）×103 pfu/L,直径为（1.80±0.27）、（2.85±0.44）mm,二者比较差异无统计学意义（t值分别为8.000、0.985、10.000、9.000,P均〉0.05）.一步生长曲线法显示,经过3、5、7 h的扩增,CVB1/m563-573所得的活病毒颗粒数（×103 pfu/L）的常用对数（lg）分别为2.10±0.09、4.28±0.03、7.44±0 CVB1/wt的活病毒颗粒数（×103 pfu/L）的lg值分别为2.80±0.02、4.77±0.02、8.55±0.01.CVB1/m563-573株在3个时间点均较CVB1/wt复制显著慢（t值分别为-13.151、-24.319、-47.714,P均〈0.01）.CVB1/m563-573和CVB1/wt的LD50分别为3.10×109、1.26×107 pfu/L,CVB1/m563-573致病力较CVB1/wt明显减弱.结论 减少5＇UTR嘧啶富集区的嘧啶碱基数量可致CVB1的感染和毒力减弱,该位点突变可能是研发CVB减毒活疫苗的策略之一.
- 钟照华包琳李倩张燕芳范徐妃李晓波张凤民赵文然
- 关键词：肠道病毒属诱变毒力
- 1,6-二磷酸果糖对阿霉素所致大鼠心肌损伤的影响被引量：2
- 2003年
- 目的 研究 1,6-二磷酸果糖 (FDP)对阿霉素 (ADM)导致大鼠心肌损伤的影响。方法 采用 Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为 ADM组、ADM+ FDP组及对照组。实验 3 0 d后进行心肌光镜病理形态学观察 ,测定血清及心肌超氧化物歧化酶 (SOD)、肌酸激酶 (CK)、乳酸脱氢酶 (L DH)的活性及脂质过氧化物 (L PO)的含量。结果 光镜下 ADM+ FDP组病理损害程度较 ADM组轻 ;各组之间心肌及血清 CK、L DH差异无统计学意义 ;和 ADM组比较 ADM+ FDP组血浆、心肌 L PO含量显著降低 ,而 SOD活性显著增加。结论 FDP对
- 李雅杰刘宝刚赵文然孙辉
- 关键词：二磷酸果糖阿霉素心肌损伤FDPADM
