陆峻泓
- 作品数：18 被引量：55H指数：4
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒被引量：3
- 2004年
- 目的 通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法 应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况。结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱。GP2-293细胞转染VSV-G基因后可产生(7.5±1.4)×105cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛。
- 陈瑾君刘伟刘德莉陆峻泓李卿崔磊曹谊林
- 关键词：GFP基因逆转录病毒假病毒基因转染
- 软骨细胞老化过程中胞外基质表达水平的改变被引量：16
- 2003年
- 目的研究猪耳软骨细胞在体外培养传代过程中,细胞老化相关基因和胞外基质相关基因表达水平的改变。方法取体外培养猪耳软骨细胞,通过光镜,对各代细胞的形态学变化进行观测。RT-PCR检测各代细胞中bcl-2、端粒酶、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原在mRNA表达水平上的改变。结果体外培养软骨细胞随着老化的进程,逐渐显现衰老和凋亡的特征。凋亡抑制基因bcl-2和控制细胞分裂的端粒酶的表达显著下降(P<0.01)。软骨细胞的特征性基质分子Ⅱ型胶原在第3代时表达水平有显著下降(P<0.01),降至原代细胞的5.47%±1.04%,在第4代几乎不再表达。而Ⅰ型胶原在第5代时,有显著上升(P<0.01);在第9代时又显著下降(P<0.01)。结论猪软骨细胞经体外培养,由第4代起逐渐发生去分化,丧失软骨细胞的表型。同时,细胞的增殖分裂能力亦逐步减退,细胞凋亡现象明显增加。
- 陆峻泓李卿刘伟陈瑾君刘德莉吴娟娟崔磊曹谊林
- 关键词：软骨细胞细胞老化胞外基质基因表达细胞分裂
- 人软骨蛋白聚糖Northern杂交探针的构建及其应用被引量：1
- 2003年
- 目的 构建人软骨蛋白聚糖 (aggrecan)探针 ,应用于整复外科研究中Northern法对aggrecanmRNA表达水平的检测。 方法 取人软骨细胞 ,逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR )扩增ag grecan球间区域 (IGD)片段。将纯化的RT PCR产物构建入 pUCm T载体 ,酶切及测序鉴定。32 P标记aggrecan探针 ,Northern杂交法检测人软骨组织和培养软骨细胞 (各 3组 )以及人正常和瘢痕疙瘩成纤维细胞 (各 6组 )中aggrecanmRNA的表达。 结果 构建产物经鉴定 ,显示其包含了人ag grecanIGD的基因序列 ,与GeneBank已收录序列 (M 5 5 172 ) 10 0 %相同。Northern结果显示 ,该探针可用于aggrecanmRNA表达水平的定性和定量检测。对正常人软骨组织和体外培养人软骨细胞的aggrecan β actin的吸光度比值进行比较 ,发现其间 ( 0 .5 75 6± 0 .0 15 2 1.36 90± 0 .0 2 0 6 )差异具有显著性 (P <0 .0 1)。结论 Northern杂交法可以对整复外科研究中常见的软骨和瘢痕疙瘩成纤维细胞中aggrecanmRNA的表达水平进行检测 ,且具有较好的灵敏度和特异性。
- 陆峻泓李卿刘伟吴娟娟刘德莉曹谊林
- 关键词：基因表达整复外科
- 伤口愈合和瘢痕增生基因治疗的实验研究
- 刘伟曹谊林王丹茹蔡泽浩武晓莉崔磊刘德莉陆峻泓殷德民吴娟娟
- 该课题通过一系列研究证明可以用基因治疗手段来抑制伤口的瘢痕形成。应用采用基因转染的方法将截断型TGF-βⅡ型受体基因及反义Smad3基因转入细胞内，阻断TGF-β的细胞内信号转导过程并发现能改变成纤维细胞的功能，包括抑制...
- 关键词：
- 关键词：伤口瘢痕基因
- 人胚胎干细胞定向分化为血管内皮细胞的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的诱导人胚胎干细胞定向分化为血管内皮细胞。方法将来源于人囊胚内细胞团的ES细胞,以含维甲酸的培养液经悬浮培养,先形成拟胚体,再将EB贴壁,换含TGF-β1的培养液继续培养,进行相差显微镜、免疫荧光、电镜等检测。结果人胚胎干细胞经诱导后分化成为血管样结构,Ⅷ因子免疫荧光检测呈阳性,Dil-Ac-LDL摄取实验呈红色荧光,透射电镜显示其与正常的人毛细血管非常相似。结论该方法可诱导人胚胎干细胞分化为内皮细胞,为骨创伤修复提供新的思路和手段。
- 王彦钱德俭尉真陆峻泓张文杰崔磊曹谊林
- 关键词：骨创伤
- 碱性成纤维细胞生长因子及其受体在体外培养软骨细胞中的表达
- 2004年
- 目的 探讨软骨细胞在体外传代培养过程中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体(FGFR)表达的变化趋势,以及它对软骨细胞增殖和细胞外基质(ECM)合成的影响。方法 采用猪耳软骨细胞在体外进行扩增传代,收集第1-6代的细胞样品行RT-PCR和Western blotting检测,从mRNA和蛋白水平来反映bFGF和FGFRs的表达。另取第1-6代软骨细胞,以含10ng/mL bFGF的培养液进行培养,比较其与空白对照组细胞在增殖速率和ECM合成等方面的差异。结果 bFGF、FGFR1和FG-FR2在第1-3代软骨细胞中表达减少的趋势较为平缓;第4、5代时,有大幅的向下跃迁;在第6代时仅微量表达或消失。这一现象与体外培养软骨细胞增殖速率的下降相平行,第4代及以后代次细胞对bFGF刺激无反应。结论 bFGF和FGFRs表达的减弱与软骨细胞在体外培养过程中的老化进展可能有密切的关系。
- 陈瑾君李卿陆峻泓崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子受体软骨细胞细胞外基质
- 共培养诱导小鼠ES细胞向软骨细胞分化的初步研究
- 2005年
- 目的探讨软骨共培养体系诱导小鼠ES细胞向软骨细胞分化的可行性。方法GFP标记的小鼠ES细胞初步分化为EB后,将EB消化为单个细胞,同猪关节软骨细胞按一定比例(1:3)混合后接种于PGA材料,体外培养1周后植入裸鼠皮下3周取材。对照组为EB细胞接种组及软骨细胞接种组。取材后行连续冰冻切片,切片分别做荧光拍照,HE染色及甲苯胺蓝染色。结果组织学结果显示,EB细胞接种组形成畸胎瘤;软骨细胞对照组形成软骨组织;实验组形成软骨组织和畸胎瘤的混合体。甲苯胺蓝染色结果和荧光照片对照结果显示,部分软骨组织GFP阳性,由小鼠ES细胞分化而来。结论软骨其培养体系可以诱导小鼠ES细胞向软骨细胞分化,但得到的软骨组织不纯,混有畸胎瘤组织。
- 谢峰张文杰丛笑倩陆峻泓曹谊林
- 关键词：胚胎干细胞软骨细胞细胞分化共培养
- 人胚胎干细胞向类间充质干细胞的诱导分化及鉴定被引量：5
- 2009年
- 目的建立诱导人胚胎干细胞向类间充质干细胞分化的方法,并鉴定细胞的生物学特性。方法人胚胎干细胞在无血清条件下悬浮培养形成类胚体,10d后在含血清条件下使类胚体贴壁生长,5～6d后机械法剔除类胚体中心区高密度重叠细胞,保留周边铺展细胞并传代扩增。观察诱导分化与传代扩增后细胞的形态学变化;免疫荧光染色和流式细胞术进行细胞表型分析。取第5代细胞进行成脂、成骨和成软骨诱导,3～4周后运用特殊染色及RT-PCT技术检测细胞成脂、成骨及成软骨分化能力。结果诱导分化后细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的形态,扩增能力较强,多次扩增传代后细胞形态和增殖能力无明显改变。免疫荧光染色发现细胞表达中胚层标志波型蛋白(vimentin)。流式细胞术分析显示,细胞表达CD29、CD105、CD166等间充质干细胞表面标志。特殊染色及RT-PCT检测结果显示,成脂诱导后多数细胞油红染色阳性,脂蛋白酶和leptin表达增加;成骨诱导后细胞茜素红染色阳性,碱性磷酸酶和Cbfa-1表达增加;成软骨诱导后细胞Ⅱ型胶原染色阳性,Ⅱ型胶原和软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达增强。结论成功诱导人胚胎干细胞向类间充质干细胞分化。分化获得的细胞增殖能力强,表达间充质干细胞的特异性标志,并具有多向分化潜能。
- 石伦刚唐郑雅陆峻泓曹谊林张文杰
- 关键词：人胚胎干细胞间充质干细胞分化
- 人和猪软骨细胞aggrecan球间区域基因的克隆和同源性分析
- 2003年
- 目的 分析人和猪软骨细胞aggrecan球间区域(interglobular domain,IGD)蛋白酶水解位点的同源性,在分子水平探讨猪软骨细胞作为组织工程化软骨研究模型的意义。方法 通过RT-PCR扩增人和猪软骨细胞aggrecan IGD片段,将纯化的RT-PCR产物克隆入T-载体,通过测序、软件分析及Northern杂交,比较二者基因和氨基酸序列的同源性。结果 人和猪aeerecan IGD cDNA有84％的同源性。经PSI-BLAST(PositionSpecific Iterated BLAST)分析,相关的氨基酸序列的同源性也达到84％,表明其在进化过程中高度保守。Northern杂交可见,人和猪的aggrecan IGD探针对猪总RNA均有明显的分子量大小相同的放射自显影条带。结论猪软骨细胞可以作为组织工程化软骨研究的模型,对软骨细胞老化和体内构建软骨的降解等过程中蛋白酶参与的aggrecan水解反应进行深入的探讨,为完善组织工程化软骨的构建提供分子水平的依据。
- 李卿刘伟陆峻泓崔磊曹谊林
- 关键词：软骨细胞克隆同源性IGD氨基酸
- 人Smad7腺病毒表达载体的构建及体外表达被引量：4
- 2005年
- 用DNA直接克隆连接的方法,构建人Smad7腺病毒重组质粒,再用293细胞包装。重组腺病毒经扩增、纯化后,感染体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,用RT-PCR方法检测细胞中人Smad7mRNA的转录。经酶切和PCR鉴定证实了人Smad7重组腺病毒质粒构建成功,RT-PCR证实瘢痕疙瘩细胞中有腺病毒载体介导的Smad7mRNA的过度表达。结果证实构建的人Smad7腺病毒表达载体可在体外细胞中表达,并可进一步应用于瘢痕疙瘩基因治疗方面的研究。
- 王丹茹刘伟武晓莉吴娟娟陆峻泓刘德莉曹谊林张涤生
- 关键词：SMAD7腺病毒腺病毒表达载体体外表达腺病毒载体介导293细胞
