韩晋云
- 作品数：24 被引量：34H指数：5
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- 重组人神经肽Y受体Y2融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究被引量：1
- 2009年
- 目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY2受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y2转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y2受体蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28a-Y2重组质粒的DE3菌,表达出重组人Y2融合蛋白。重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了Y2受体的相关生物学特性。结论重组质粒pET28a-Y2在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对Y2受体蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。
- 丁克祥董萍郑永晨杨永鹏朱晓亮韩晋云单志新丁宇丁振华
- 关键词：融合蛋白包涵体纯化生物信息学
- 神经肽Y及其受体的生物信息学和医学生理学的研究被引量：3
- 2010年
- 神经肽Y(NPY)作为一种具有高度生物活性的神经递质及调节肽能与其G蛋白偶联受体家族(Y1R、Y2R、Y3R、Y4R、Y5R、Y6R)进行特异性结合,且NPY受体作为NPY作用的特定靶点在特定条件下均能被完整的NPY分子激活并通过细胞信号传导广泛参与机体生理功能的调节,使之在临床老年相关性疾病发生和发展过程中发挥重要的调控作用。而NPY及其受体的特异性结合和有效调控之所以能对机体多种生理作用及代谢功能发挥重要影响,与它们各自的生物信息学特性(包括理化性、疏水性、跨膜性、信号肽、二级结构、三级结构等)密切相关。因此,本文从生物信息学及医学生理学两个角度对NPY及其受体进行综述,为NPY及其受体今后在老年医学应用和研究中奠定理论基础。
- 丁克祥董萍韩晋云杨永鹏丁宇丁振华
- 关键词：神经肽Y受体生物信息学生理学老年医学
- 不同血清浓度及体外培养时间对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态学的影响被引量：8
- 2011年
- 目的探讨不同实验条件下不同血清浓度及体外培养时间对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态学变化的影响。方法采用体外细胞培养技术进行小鼠成纤维细胞L929细胞的培养,并用磺基罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）酶标仪法（A490 nm波长）测量各孔的吸光值（OD值）并转化为小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线。同时,分别采用HE染色法、吖啶橙荧光染色进行小鼠成纤维细胞L929细胞系形态学观察。结果小鼠成纤维细胞L929细胞系分别在不同浓度的血清中培养2、4、6、8 d,其表现出不同的生长和生存情况及细胞形态学改变。将该细胞系处于相同培养时间和不同血清浓度（0%、20%、40%、60%、80%、100%）时,在20%和40%血清浓度组中,成纤维细胞的生长基本表现为OD值呈现快速增加趋势、且对细胞生长促进作用较强;而血清浓度为0%和100%时对小鼠成纤维细胞L929细胞生长表现出明显抑制作用及OD值呈逐渐减小的趋势。当该细胞系处于不同培养时间、且相同血清浓度时,除0%组OD值呈现减弱趋势,其他浓度组随时间的延长OD值呈增加趋势,在4 d之内OD值增长较快,4~6 d增长趋势减弱,6~8 d增长趋势回升,尤其是100%组。在这种实验条件下,小鼠成纤维细胞L929细胞的形态学也发生了相应改变。结论不同血清浓度及不同培养时间等体外培养环境对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长和生存及细胞学形态均有明显影响,提示利用血清进行体外细胞培养时应充分考虑所添加血清的浓度以及细胞培养的时间。
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- 关键词：血清浓度细胞生长曲线细胞形态学
- 单克隆抗体作为抗体工程药物在部分老年病治疗中的基础研究和临床应用
- 2010年
- 抗体工程药物是生物制药技术领域的重要组成部分之一。随着杂交瘤细胞、基因工程和分子免疫学、抗体库等技术不断建立和完善以及发展和应用,为单克隆抗体药物的制备和规模化、规范化生产奠定了良好的基础,也使抗体药物的研制与应用达到了新的高度。特别是,单克隆抗体药物的特异性高、均质性好、亲和力强、靶向性佳、毒副作用小、疗效确切等特点使其成为当今基因工程药物研究的热点。而老年病因其复杂性、多样性、多系统器质性病变及难治性等特点,在有效的临床药物治疗方面一直是同学科领域关注的焦点和重点。为此,本文将对某些单克隆抗体目前在老年病中的临床研究和应用情况进行综述,并对其未来应用前景和发展方向及其趋势进行展望,期待有些抗体药物能在老年病的临床诊断和治疗上得以广泛应用,也为临床相关老年性疾病的诊断和治疗带来新的希望。
- 丁克祥董萍杨永鹏尹晴韩晋云丁宇丁振华
- 关键词：单克隆抗体老年病
- 重组人神经肽Y融合蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备与鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达融合蛋白，并经SDS—PAGE检测和Western印迹鉴定，表达产物包涵体经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化，以纯化后的融合蛋白pET28a—NPY为抗原免疫家兔，获得抗血清，Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果经IPTG诱导含有pET28a—NPY重组质粒的DE3菌，表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni^2＋-NTA亲和层析进行纯化后，得到了较高纯度的融合蛋白，用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体，Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功表达了人NPY蛋白并获得了其多克隆抗体，为进一步研究人NPY蛋白的功能奠定了基础。
- 丁克祥董萍杨永鹏孙乐丁银巧郑宇浩尹晴韩晋云丁宇丁振华
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 神经肽Y及其受体与某些老年病及作用机制的研究被引量：4
- 2010年
- 高血压、冠心病、肺心病、支气管哮喘、慢性阻塞性肺病、糖尿病、老年性痴呆、帕金森氏病、老年抑郁症与焦虑症、骨质疏松、肿瘤等均是老年人较为常见的疾病，它们直接或间接地威胁甚至危害着老年人的健康和生命。然而，大量基础医学和临床研究发现，神经肽Y及其受体在机体的分布、含量、合成、分泌及表达水平和调控功能等，不仅有可能介导或影响着这些老年性疾病的发生、发展、加重或预后，而且还有可能与治疗这些疾病的生物学效应、作用靶点、用药途径及治疗对策等密切相关。因此，本文就神经肽Y及其受体与这些老年病之间的关系及其作用机制方面的研究进展作一综述，为今后探索以神经肽Y及其受体为靶点的有效治疗方式奠定基础，也为老年医学的科学研究和临床防治提供一些理论和实验依据。
- 丁克祥董萍韩晋云杨永鹏丁宁朱晓亮丁振华
- 关键词：神经肽Y受体老年病
- 与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y5基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2009年
- 目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y5（NPYSR）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPYSR基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY5R基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个1300bp左右的DNA片段，与载体重组和DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY5R基因，且所克隆的基因共编码445个氨基酸，分子量为50KD，与GeneBank中NPYSR基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPYSR基因与GeneBank中NPYSR序列完全一致，通过对其相关生物学信息的明确分析，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPYSR与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。
- 丁克祥董萍郑永晨杨永鹏朱晓亮韩晋云单志新丁宇丁振华
- 关键词：肥胖基因克隆DNA序列分析
- 人瘦素基因的克隆及在酿酒酵母中的表达和生物信息学分析
- 2010年
- 目的构建人瘦素基因和蛋白转导肽Tat基因的融合表达载体,转入酿酒酵母表达系统进行诱导表达,并对融合瘦素蛋白进行生物信息学分析。方法脂肪组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,以此cDNA为模板扩增瘦素基因,构建重组质粒pYES2-Tat-leptin,转入酿酒酵母表达菌株INVSc1诱导表达Tat-leptin融合蛋白,利用相关在线软件对融合瘦素蛋白相关的生物学功能进行分析。结果经SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定,酿酒酵母成功表达融合蛋白Tat-leptin。经生物信息学分析后获得了融合瘦素蛋白的相关生物学特性。结论 Tat-leptin融合蛋白在酿酒酵母中成功表达,并对融合瘦素蛋白的生物学特征进行了预测,为消化道基因治疗肥胖的研究奠定了基础。
- 韩晋云郑文岭宋艳斌姜茂竹王妮莎马文丽
- 关键词：瘦素酿酒酵母消化道基因治疗
- 重组人神经肽Y受体Y5融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究被引量：1
- 2009年
- 目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY5受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y5转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y5受体蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28a-Y5重组质粒的DE3菌,表达出重组人Y5融合蛋白。重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了Y5受体的相关生物学特性。结论重组质粒pET28a-Y5在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对Y5受体蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。
- 丁克祥董萍郑永晨杨永鹏朱晓亮韩晋云单志新丁宇丁振华
- 关键词：融合蛋白包涵体纯化生物信息学
- 与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y2基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2009年
- 目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y2（NPY2R）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPY2R基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY2R基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个1100bp左右的DNA片段，与载体重组和DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY2R基因，且所克隆的基因共编码381个氨基酸，分子量为4．2kD，与GeneBank中NPY2R基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPY2R基因与GeneBank中NPY2R序列完全一致，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY2R与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。
- 丁克祥董萍郑永晨杨永鹏朱晓亮韩晋云单志新丁宇丁振华
- 关键词：肥胖基因克隆DNA序列分析
