高峰
- 作品数：65 被引量：310H指数：10
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金贝朗麻醉科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- β-arrestin2抗基因RNA慢病毒载体体外基因沉默效应研究被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨β-arrestin2抗基因RNA慢病毒载体在体外工具细胞中的基因沉默效应及其携带的用于活体核磁共振成像监测的铁蛋白报告基因的表达。方法:用构建的β-arrestin2抗基因RNA慢病毒感染NG108-15细胞,实时荧光定量PCR和Western Blot方法检测β-arrestin2抗基因RNA慢病毒对工具细胞的β-arrestin2 mRNA和蛋白表达的下调作用,以及该病毒所携带的用于活体核磁共振成像监测的铁蛋白报告基因的表达。结果:构建的β-arrestin2抗基因RNA慢病毒能显著降低工具细胞中β-arrestin2 mRNA和蛋白的表达,与对照组相比实时荧光定量PCR和Western Blot方法检测的沉默效率分别为79%和82%(P<0.05)。感染病毒组的NG108-15细胞的铁蛋白表达量显著升高,是对照组细胞的2.29倍(P<0.05)。结论:构建的β-arrestin2抗基因RNA慢病毒在工具细胞中对β-arrestin2基因具有显著的沉默效应,该病毒携带的铁蛋白报告基因在工具细胞中表达。成功验证了β-arrestin2抗基因RNA慢病毒在体外的基因沉默效应和铁蛋白报告基因的表达,为该病毒的在体研究奠定了基础。
- 刘希江高峰卜慧莲徐懋曹菲田学愎杨辉田玉科
- 关键词：基因沉默慢病毒载体铁蛋白
- 大鼠源性重组天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3基因构建及其对细胞的促凋亡效应被引量：3
- 2009年
- 目的探讨大鼠源性重组天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）基因对细胞的促凋亡作用。方法通过重组PCR的方法获得大小亚基顺序颠倒的大鼠重组caspase-3基因，构建真核表达载体，分别转染人胚肾293T细胞和大鼠永生化神经干细胞后观察细胞形态学变化，通过Annexin V-PI双染、流式细胞术、MTr法来检测其促细胞凋亡作用。结果转染后，细胞出现明显的核碎裂，死亡；MTTr法检测发现细胞增殖明显被抑制（抑制率为（48．35±0．16）％和（44．61±0．15）％（P〈0．05）；Annexin V-PI共染色流式细胞术检测两种细胞的凋亡率分别为（30．7±1．5）％和（16．0±1．0）％，较对照组细胞有显著的增加（P〈0．05）。结论大鼠源性重组caspase-3基因可在转染的人和大鼠细胞中表达，并诱导细胞发生凋亡，不仅可有效用于体内实验研究，且能用于诱导神经细胞凋亡。
- 陈莎莎曹菲高峰许爱军田学愎肖兴鹏杨少兵田玉科
- 关键词：CASPASE-3凋亡
- 肝特异性胰岛素样生长因子-I基因敲除鼠乳腺癌组织中基因变化及胰岛素样生长因子-I对血管生成的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨低血清胰岛素样生长因子-I（IGF-I）水平小鼠及正常水平小鼠乳腺癌模型中生长因子相关基因的变化及血管内皮细胞生长因子在乳腺癌组织中的表达与微血管密度的关系。方法应用DMBA诱导肝脏特异性IGF-I基因敲除鼠（LID鼠）及基因未敲除鼠（对照鼠）建立原发乳腺癌模型，基因芯片技术检测小鼠乳腺肿瘤及正常乳腺组织中相关基因的差异表达，免疫组织化学法检测其中VEGF表达及微血管密度。结果LID鼠组肿瘤的发生时间、生长速度及大小均低于对照组（P〈0．05）；（2）LID鼠组肿瘤组织的VEGF表达及MVD均弱于对照鼠组（P〈0．05）；（3）LID鼠组肿瘤组织中基因IGF-I、IGFBP-4、IGFBP-7较对照组上调，而基因IGF-Ⅱ，IGF-ⅡR、IGFBP-2、IGFBP-3、IGFBP-5下调。结论IGF-I促进小鼠乳腺癌的发生发展，且与血管生长密切相关。IGF-I在肿瘤的发生、发展及转移中可能起重要作用。
- 任玉萍唐泓波张军马士辉高峰吴毅平
- 关键词：胰岛素样生长因子-I基因芯片
- 应用IGF-1基因缺失小鼠研究IGF-1与乳腺肿瘤血管生成的关系被引量：7
- 2007年
- 背景与目的:胰岛素样生长因子家族(insulin-like growth factors,IGFs)在肿瘤发生发展中所起的作用日益受到重视,但其作用机制尚不清楚。本实验通过在肝特异性胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor1,IGF-1)基因缺失(LID)小鼠体内建立稳定的原发性乳腺癌模型,探讨血清中IGF-1水平与乳腺肿瘤血管生成可能存在的关系。方法:使用肝特异性IGF-1基因缺失小鼠及对照鼠,用化学致癌剂7,12-二甲基苯蒽[7,12-dimethybenz(a)anthracene,DMBA]诱导原发性乳腺肿瘤,使用人参皂甙Rg3进行干预治疗。比较各组肿瘤发生情况并通过免疫组化方法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:未管饲Rg3的对照鼠、未管饲Rg3的LID鼠、管饲Rg3的对照鼠及管饲Rg3的LID鼠的乳腺癌发病率依次为66.67%、33.33%、36.00%及12.00%。肿瘤平均直径四组依次为(0.79±0.20)cm、(0.37±0.08)cm、(0.32±0.08)cm及(0.15±0.05)cm。VEGF表达检测:未管饲Rg3的对照鼠平均光密度为0.34±0.10,阳性百分率(positiverate,PR)为0.04±0.02,均为各组中最高(P<0.05);管饲Rg3的LID鼠平均光密度0.13±0.03,阳性百分率0.01±0.00,均为各组中最低(P<0.05)。以上四组MVD依次为31.9±5.3、26.8±4.9、20.1±4.9、14.4±4.9(P<0.05)。结论:IGF-1与乳腺肿瘤的发生发展相关,降低血清IGF-1可抑制肿瘤血管生成而对乳腺肿瘤有抑制作用,应用血管生长抑制剂人参皂甙Rg3可增强这一效应。
- 唐泓波任玉萍张军马士辉高峰吴毅平
- 关键词：胰岛素样生长因子1乳腺肿瘤人参皂甙RG3
- rAd5／NR2B镇痛疫苗对神经病理性痛大鼠认知功能的影响被引量：1
- 2010年
- 目的评价N-甲基-D天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）基因重组腺病毒（rAd5／NR2B）对神经病理性痛大鼠认知功能的影响。方法雌性SD大鼠40只，体重180～200g，随机分为4组（n=10）：对照组（C组）、rAd5／NR2B镇痛免疫组（rAd5／NR2B组）、神经病理性痛组（SP组）和rAd5／NR2B镇痛疫苗＋神经病理性痛组（rAd5／NR2B＋SP组）。C组和rAd5／NR2B组分别胃内灌注生理盐水0．1ml和rAd5／NR2B镇痛疫苗1×10^8 PFU，2周后重复灌注。SP组制备神经病理性痛模型，1周后腹腔注射生理盐水0．1ml。rAd5／NR2B＋SP组胃内灌注rAd5／NR2B镇痛疫苗1×10^8 PFU，2周后重复灌注，再1周后制备神经病理性痛模型。测定大鼠机械缩爪阈值（MWT）。行Morris水迷宫实验测定大鼠认知功能，记录潜伏期和游泳速度。采用免疫组织化学法检测大鼠海马NR2B的表达水平。结果（1）与C组比较，rAd5／NR2B组MWT差异无统计学意义（P〉0．05），SP组和rAd5／NR2B＋sP组MWT降低（P〈0．05）；与SP组比较，rAd5／NR2B＋SP组MWT升高（P〈0．05）。（2）各组游泳速度比较差异无统计学意义（P〉0．05）；与C组比较，rAd5／NR2B组潜伏期差异无统计学意义（P〉0．05），SP组和rAd5／NR2B＋SP组潜伏期延长（P〈0．05）；与SP组比较，rAd5／NR2B＋SP组潜伏期差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）与C组比较，rAd5／NR2B组和rAd5／NR2B＋SP组海马NR2B表达差异无统计学意义（P〉0．05），SP组海马NR2B表达上调（P〈0．05）；与SP组比较，rAd5／NR2B＋SP组海马NR2B表达下调（P〈0．05）。结论rAd5／NR2B疼痛疫苗对神经病理性痛大鼠认知功能无明显影响。
- 杨少兵王公明杨辉高峰田学愎刘希江罗婷田玉科
- 关键词：腺病毒科神经痛
- 小鼠肿瘤模型中血清胰岛素样生长因子-Ⅰ水平与机体营养状况的关系
- 2007年
- 目的检测小鼠肿瘤模型血清中胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）的含量及营养指标的变化，并探讨血清中IGF-Ⅰ水平与机体营养状况的关系。方法将小鼠结肠腺癌CT26细胞接种于肝脏特异性IGF-Ⅰ基因缺失（LID）组和对照组小鼠皮下，总共60只6～8周龄的雄鼠（其中30只对照，30只LID小鼠）接受了肿瘤细胞接种。接种后监测两组小鼠的体重和皮下肿瘤大小。分别在第14天和第21天每组各处死15只小鼠，处死前收集血清标本并测量血清中IGF-Ⅰ、葡萄糖、白蛋白和总胆固醇的水平。结果在第14天和第21天时，LID组小鼠血清中IGF-Ⅰ均明显低于对照组小鼠，两者比较差异均有极显著性意义（均P〈0．01），LID组小鼠血清中葡萄糖和白蛋白水平均低于对照组小鼠，而总胆固醇高于对照组，两者血清中葡萄糖和总胆固醇比较差异有显著性意义（P〈0．05），白蛋白比较差异无显著性意义（P〉0．05）。结论血清中IGF-Ⅰ水平与发生肿瘤时机体的营养状况之间呈正相关，提示IGF-Ⅰ作为一种生长因子可能对肿瘤机体的营养状况起调节作用。
- 马士辉刘谨文张军高峰吴毅平
- 关键词：衰竭模型恶病质营养
- 不同途径注射含人脑啡肽原基因重组腺相关病毒对慢性神经病理痛大鼠的镇痛作用
- 2013年
- 目的构建含人前脑啡肽原基因的腺相关病毒载体（rAAV／hPPE），将此病毒载体通过不同途径注射至慢性疼痛模型大鼠体内，观察rAAV介导的hPPE体内转染的镇痛作用。方法将阳性对照质粒rAAV／hPPE分别经蛛网膜下、尾静脉和骨骼肌3种途径注射至慢性挤压伤疼痛模型大鼠体内，观察注射后大鼠热痛阈和机械痛阈的变化，8周后，处死大鼠，运用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定大鼠组织hPPE的表达，用放射免疫方法测定大鼠器官组织中亮氨酸．脑啡肽（L—EK）的含量。结果行为学结果说明3种给药方式均可在5d-8周内对坐骨神经慢性挤压（CCI）热痛阈和机械痛阈显著升高；L—EK在脊髓组织中表达水平最高的是鞘内注射组而在血管和心肌组织中表达最高的是静脉注射组；PCR结果表明3种给药方式导致不同组织hPPEmRNA表达水平增高。结论将rAAV／hPPE注射到CCI大鼠体内，rAAV能将hPPE导入易感细胞，并获得较好的镇痛效果。
- 杨辉高峰安珂田学愎王鹏田玉科江辉
- 关键词：腺相关病毒疼痛
- 人NF-κB亚基p65、p50基因重组逆转录病毒表达载体及包装细胞株的建立和鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建分别携带人核因子-κB(NF-κB)亚基p65、p50基因的逆转录病毒载体,并建立稳定产毒的包装细胞株。方法以RcCMV-p65、RcCMV-p50质粒为模板,PCR扩增p65、p50基因编码区全长序列,分别克隆至逆转录病毒空载体pMSCVneo、pMSCVhyg,酶切、测序鉴定。将重组载体及空载体分别转染包装细胞系PT67,以G418或潮霉素筛选产毒细胞株。收集病毒悬液,测定病毒滴度,并瞬时感染NIH3T3细胞及人神经干细胞,72h后分别采用RT-PCR和免疫细胞化学观察p65、p50的表达。结果重组逆转录病毒载体pMSCVneo-p65、pMSCVhyg-p50的酶切、测序鉴定正确。将筛选所得的高效产毒细胞株分别命名为PT67/pMSCVneo-p65、PT67/pMSCVneo、PT67/pMSCVhyg-p50及PT67/pMSCVhyg,测定病毒滴度分别为4×105、6×105、2×105及1×105cfu/ml。pMSCVneo-p65、pMSCVhyg-p50病毒悬液瞬时感染NIH3T3细胞72h后,细胞p65、p50亚基mRNA的表达明显升高;瞬时感染人神经干细胞(hNSC)72h后,部分细胞胞核呈p65和p50阳性染色。结论成功构建了分别携带人p65、p50基因的逆转录病毒载体,建立了稳定、高效、正确生产逆转录病毒的细胞株。为探讨转NF-κB基因神经干细胞在缺血性卒中的运用前景奠定了实验基础。
- 桂伶俐刘志恒张传汉祝畅高峰
- 关键词：干细胞移植核因子ΚB逆转录病毒科
- 人胚不同脑区神经前体细胞的分离培养及分化特性的比较被引量：1
- 2007年
- 目的研究人胚不同脑区神经前体细胞(neural progenitor cells,NPCs)培养及增殖分化特性。方法取14-17周人胚脑区组织,分为新皮质、纹状体、间脑、中脑、后脑和延髓组,悬浮培养。鉴定细胞球巢蛋白抗原的表达,分化及自我更新能力。观察各脑区培养细胞的生长、增殖状况。新皮质、纹状体及间脑来源的神经球分化后,运用免疫荧光细胞化学法比较神经元及星形胶质细胞的比例。结果各脑区培养出的悬浮细胞球巢蛋白抗原阳性,可分化为MAP2或GFAP阳性细胞,且BrdU掺入实验阳性。体外培养第3d,纹状体及间脑组均可见大量神经球,且纹状体组明显多于间脑组;新皮质组传代后可见较多神经球;其它组仅见个别神经球。新皮质、纹状体、间脑来源的NPCs诱导分化后,MAP2或GFAP阳性细胞率各组间比较差异无显著性。结论人胚不同脑区均可培养出NPCs,从易到难依次为纹状体、间脑、新皮质及其它脑区。新皮质、纹状体、间脑来源的NPCs体外分化比例一致。
- 桂伶俐刘志恒张传汉祝畅高峰
- 关键词：细胞培养神经前体细胞细胞分化
- 脊髓原钙粘蛋白20在大鼠骨癌痛形成中的作用
- 2012年
- 目的探讨脊髓原钙粘蛋白20（PCDH20）在大鼠骨癌痛形成中的作用。方法SPF级雌性SD大鼠36只，体重180～200g，采用随机数字表法，将大鼠随机分为4组（n=9）：假手术组（S组）、骨癌痛组（BCP组）、慢病毒对照组（LC组）、PCDH20siRNA-LV组（P组）。LC组和P组分别于脊髓内注射对照慢病毒和PCDH20 siRNA慢病毒4μl。1周后建立骨癌痛模型，采用右侧胫骨上段骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞的方法制备。于病毒注射前1d（T1）、骨癌痛模型建立前1d（T2）、模型建立后7、14和21d（T3、T4、T5）时测定机械缩足阈值（MWT）。骨癌痛模型建立后21dMWT测定结束后，取术侧胫骨，HE染色后光镜下观察胫骨癌细胞侵犯情况；取脊髓组织，采用免疫组化法和Western blot法测定脊髓PCDH20和突触后致密物蛋白质95（PSD95）蛋白的表达水平，采用RT-PCR法测定脊髓PCDH20和PSD95mRNA的表达水平。结果BCP组、LC组及P组肿瘤细胞突破骨髓腔，侵犯骨皮质，骨皮质结构严重破坏；与S组比较，BCP组、LC组和P组B～L时MWT明显降低，BCP组和LC组脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平明显上调，P组脊髓PCDH20蛋白水平上调（P〈0．05）；与BCP组比较，LC组各时点MWT、脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平比较差异无统计学意义（P〉0．05），P组Td和B时MWT明显升高，脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平下调（P〈0．05）。结论PCDH20通过调控大鼠脊髓PSD95的表达，调节兴奋性突触的功能，从而参与骨癌痛的形成。
- 李彩娟柯昌斌时代何文胜卜慧莲高峰田玉科
- 关键词：钙黏着糖蛋白类骨肿瘤疼痛
