魏全德
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
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- 华支睾吸虫Rho GTPase样基因的识别、克隆表达与免疫鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的对新发现的华支睾吸虫(Clonorchissinensis)的RhoGTPase样基因进行克隆、表达和免疫学鉴定。方法将用生物信息学方法识别的华支睾吸虫cDNA质粒文库中的RhoGTPase样基因的完整编码序列(CDS)克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL21中用IPTG诱导表达。表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和蛋白印迹(Westernblotting)进行分析,并用镍离子金属螯合亲和层析柱进行纯化。结果华支睾吸虫的Rho GTPase样基因的完整阅读框含576个碱基,编码192个氨基酸,理论分子量为21.7kDa。PCR、双酶切及DNA测序的结果均表明重组质粒pET-30a(+)-RhoGTPase构建成功。SDS PAGE结果表明RhoGTPase基因在大肠埃希菌BL21中获得了高效表达,重组蛋白可被感染华支睾吸虫的猫血清识别,表明其具有免疫反应性。亲和层析获得了高纯度的蛋白。结论华支睾吸虫的RhoGTPase样基因可在原核系统中获得有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
- 谢红艳胡旭初徐劲吕刚陈守义魏全德李艳文吴忠道余新炳
- 关键词：华支睾吸虫RHOGTPASE基因克隆原核表达
- 华支睾吸虫SPE16.9基因克隆和序列分析被引量：1
- 2005年
- 目的通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因,为进一步研究其功能及其应用奠定基础。方法对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选,通过Blastn程序进行序列比对,识别华支睾吸虫新基因,并应用软件程序对其进行分析。结果筛选到一个475bp的核酸序列,编码153aa,理论分子量为16.9kDa,理论等电点(pI)为6.19,疏水氨基酸(AILFW V)占36%,带电荷氨基酸(RKH YCDE)占30%,极性氨基酸(NCQSTY)占28%,酸性氨基酸(DE)和碱性氨基酸(KR)各占9%。经BLAST分析,该蛋白属于M L域(M D-2-related lipid-recognition)家族,是一个新的分泌蛋白基因。结论发现华支睾吸虫分泌蛋白基因,可能有作为诊断候选抗原的价值。
- 徐劲陈守义魏全德谢红艳胡旭初余新炳
- 关键词：华支睾吸虫分泌蛋白克隆
