冯冲
- 作品数：66 被引量：91H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 敲除α-1,3-半乳糖基转移酶基因五指山小型猪的繁育和鉴定被引量：3
- 2017年
- 目的总结α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)五指山小型猪的繁育和鉴定。方法统计GTKO五指山小型猪的繁育结果及窝产仔数;采用聚合酶链反应(PCR)技术对GTKO五指山小型猪GGTA1基因敲除类型进行鉴定;采用荧光显微镜和流式细胞术对人、野生型五指山小型猪、GTKO五指山小型猪外周血单核细胞(PBMC)的α-1,3-半乳糖(αGal)表型进行检测;比较GTKO五指山小型猪与野生型五指山小型猪血常规指标的差异。结果 GGTA1基因型的遗传符合孟德尔定律;GGTA1-/-猪的PBMC流式检测无荧光表达,与基因型鉴定结果一致;GTKO五指山小型猪雌性猪初产窝产仔数为(6.8±1.8)只,经产窝产仔数为(8.3±2.2)只;血常规检测的各项指标与野生型五指山小型猪差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论连续2代GTKO五指山小型猪遗传稳定,繁殖力正常。GTKO五指山小型猪可作为异种器官移植研究的可靠供体。
- 龙川高景波唐雨婷杜敏杰石宁宁冯冲鲁琳潘登科
- 关键词：基因敲除五指山小型猪繁殖性能外周血单核细胞
- 曲古抑菌素(Trichostatin)A对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育能力的影响被引量：5
- 2008年
- 曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)是一种组蛋白去乙酰化抑制剂,用TSA处理鼠核移植胚胎可显著提高胚胎的囊胚率。检验TSA对猪卵母细胞体外成熟以及孤雌胚胎发育的影响。在猪卵母细胞体外成熟液及胚胎培养液中添加TSA,比较不同浓度TSA对卵母细胞成熟的影响,不同浓度TSA对孤雌胚胎发育能力的影响以及TSA处理不同时间对孤雌胚胎发育能力的影响。结果发现:(1)5 nmol/L TSA处理对卵母细胞体外核成熟无显著影响,却显著提高了卵母细胞孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率(P<0.05);(2)50 nmol/L TSA处理显著提高了孤雌胚胎的卵裂率及囊胚率(P<0.05);(3)50 nmol/L TSA处理24 h能显著提高胚胎的卵裂率及囊胚率(P<0.05,82.1%±2.6%和37.4%±3.1%)。结果表明TSA对猪卵母细胞的体外成熟及孤雌胚胎发育具有显著的促进作用。5 nmol/L的添加量对卵母细胞的体外胞质成熟具有促进作用;胚胎培养基中添加50 nmol/L TSA处理24 h能提高孤雌胚胎的发育能力。
- 刘晓潘登科陈扣扣冯冲张卫红郑茂恩龙川冯书堂杨博辉
- 关键词：TSA卵母细胞体外成熟孤雌胚胎
- 用于血管性器官异种移植的多基因修饰小型猪
- 背景:异种器官移植是解决人类器官短缺的重要途径之一,猪血管性器官移植到非人灵长类体内后主要面临超急性排斥反应和凝血紊乱.目前,敲除猪α1,3一半乳糖基转移酶基因(GTKO)及导入人补体调控蛋白基因(hCD46)可基本解决...
- 潘登科冯冲石宁宁龙川李西睿
- 胰腺特异性表达Hes1基因的构建及体外表达
- 2015年
- 为了探究胰腺的发育机制,以及制备胰腺缺陷型的小型猪模型,构建了特异性表达载体,开展了相关载体构建及体外验证研究.本研究以小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动小鼠Hes1基因的表达载体PDX1-Hes1,载体转染MIN-6胰岛β细胞、猪耳成纤维细胞及猪肾细胞,培养48h后,通过qRT-PCR、Western Blot检测.结果显示:Hes1在MIN-6胰岛β细胞中的RNA水平和蛋白水平均高效表达,而在非胰腺细胞猪耳成纤维细胞及猪肾细胞中均不表达.试验表明:胰岛特异性表达载体PDX1-Hes1的成功获得,为构建相关基因在胰腺中特异性表达的载体提供参考,为后续制备胰腺缺陷型的小型猪提供了条件.
- 魏静杨希祥石宁宁宋小凤冯冲潘登科臧荣鑫
- 胰腺特异性表达载体PDX1-eGFP构建及体外验证被引量：1
- 2015年
- 为了研究胰腺发育与缺陷的转基因特异性表达系统,探索胰腺特异性表达载体的构建并进行体外验证。以增强型绿色荧光蛋白(e GFP)为报告基因,小鼠PDX1启动子为特异性启动元件,构建胰腺特异性启动e GFP表达载体PDX1-e GFP,载体转染MIN-6胰岛β细胞和猪耳成纤维细胞,培养48 h后,进行荧光观察和RT-PCR、Western blot检测。结果显示,e GFP在MIN-6胰岛β细胞中的RNA水平和蛋白水平均表达,而在非胰腺细胞猪耳成纤维细胞中均不表达。本研究结果表明,成功获得胰岛特异性表达载体PDX1-e GFP,为构建相关基因在胰腺中特异性表达的载体提供依据,为制备胰腺缺陷动物奠定基础。
- 杨希祥魏静宋小凤石宁宁冯冲臧荣鑫潘登科李娟
- 早期胚胎的卵裂球聚合制备GFP示踪的嵌合体小型猪
- 引言/目的日本科学家将大鼠多功能干细胞注入小鼠囊胚,在敲除Pdx1基因的胰腺缺失小鼠体内生长出大鼠胰腺,成功生成种间嵌合体。表明异种器官移植未来通过基因编辑技术与嵌合体技术结合在动物体内长出人类器官成为可能,而小型猪的生...
- 龙川纪慧丽冯冲石宁宁高景波唐雨婷杜敏杰潘登科
- 猪滋养层干细胞样细胞的分离培养被引量：2
- 2013年
- 滋养层干细胞(TSc)是形成胎盘组织细胞的前体细胞,与胚胎着床和胎盘形成密切相关。体外分离滋养层干细胞为研究滋养层的发育与功能提供了研究工具和基础。滋养层干细胞已经成功从小鼠附植前囊胚中获得,在猪上也有相关报道,但并没有关于6d囊胚中分离到猪滋养层干细胞(pTSc)的报道。本试验通过对6d孤雌囊胚透明带进行划口处理,饲养层和基础培养液中附加碱性成纤维生长因子(bFGF)和人白血病抑制因子(hLIF)分离猪滋养层干细胞样细胞。同时,通过采用形态学和基因表达分析的方法对获得的猪滋养层干细胞样细胞进行了初步鉴定。结果显示,本试验分离得到的细胞呈现上皮样细胞形态,细胞间结合紧密,边缘光滑,核质比较大,RT-PCR结果显示表达滋养层干细胞标记基因Cdx2,体现了滋养层干细胞特征。结果表明,本试验成功在6d孤雌囊胚分离得到猪滋养层干细胞样细胞,为后续研究猪滋养层发育提供了试验基础。
- 宋志强刘畅冯冲龙川赵勤丽刘忠华潘登科
- hCD46转基因五指山猪的特异性序列以及利用其的检测方法
- 本发明涉及hCD46转基因五指山猪的特异性序列以及利用其的检测方法。利用本发明获得的hCD46转基因五指山猪的特异性序列实现了hCD46转基因五指山猪的特异性检测。
- 潘登科王勤石宁宁冯冲龙川李刚梁琳
- 文献传递
- 小型猪克隆胚胎体外培养阶段的优化被引量：2
- 2014年
- 本试验从卵母细胞卵丘多少和初次卵裂时间早晚2个方面进行研究，旨在改善小型猪克隆方案的体外培养环节，提高克隆效率。将卵母细胞按卵丘多少分成3组，比较卵母细胞的成熟效果，取成熟效果好的卵母细胞进行后续试验；PA和SCNT试验均按初次卵裂时间早晚分成3组，在体外培养条件下，比较胚胎的卵裂率和囊胚率。结果表明，卵丘多的卯母细胞体外成熟39～40 h和卵丘少的卵母细胞体外成熟41～42 h，比不区分卵丘多少的卵母细胞体外成熟39～42 h的成熟效果要好；初次卵裂时间发生在26 h以前的胚胎比26 h之后的胚胎在数量和质量上都明显优越，前者胚胎的卯裂率和囊胚率显著高于后者，此结果在孤雌激活（parthenogenetic，PA）胚胎和体细胞核移植（somatic cell nucleartransfer，SCNT）胚胎的体外试验中均得到验证。本研究完善了小型猪克隆方案的体外培养环节，为器官异种移植提供相关技术参考。
- 杨希祥李智方龙川冯冲储明星潘登科李娟
- 关键词：小型猪异种移植体细胞核移植
- 五指山小型猪α-1，3-半乳糖基转移酶基因敲除的研究
- 猪是人类异种器官移植最适来源。然而，猪器官应用于临床研究面临着诸多难题，其中最为关键的两大障碍是免疫排斥和病原微生物感染。本研究以我国特有的五指山小型猪为材料，构建无启动子打靶载体pUCm-GGTA 1-KO，电转染胎儿...
- 郑道山冯冲龙川朱彦宾罗学明闫军潘红梅马文丽潘登科
- 关键词：小型猪基因敲除胎儿成纤维细胞
- 文献传递
