冯冲
- 作品数：67 被引量：91H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 用于糖尿病治疗的多基因修饰小型猪
- 目的胰岛细胞移植是治疗糖尿病及其并发症的有效手段,猪胰岛细胞被认为是解决人类临床胰岛细胞供体短缺的最适宜来源。已有研究表明五指山小型猪的胰腺是分离纯化胰岛细胞的良好供体,但猪胰岛细胞异种移植面临着超急性免疫排斥和血液介导...
- 潘登科冯冲龙川于淑珍贺伸李西睿石宁宁
- 初次卵裂时间可作为猪克隆胚胎发育潜能的标识
- 【目的】本研究探讨了初次卵裂时间与猪克隆胚胎发育潜能的关系。【方法】通过比较不同初次卵裂时间(20-24 h,早期;25-36 h,中期;37-48 h,晚期;0-48 h,对照)的猪体细胞核移植(somaticcell...
- 罗学明龙川朱彦宾冯冲闫军陆芳严康潘登科
- 关键词：体细胞核移植发育潜能
- 文献传递
- 早期胚胎的卵裂球聚合制备GFP示踪的嵌合体小型猪
- ＜正＞引言/目的日本科学家将大鼠多功能干细胞注入小鼠囊胚,在敲除Pdx1基因的胰腺缺失小鼠体内生长出大鼠胰腺,成功生成种间嵌合体。表明异种器官移植未来通过基因编辑技术与嵌合体技术结合在动物体内长出人类器官成为可能,而小型...
- 龙川纪慧丽冯冲石宁宁高景波唐雨婷杜敏杰潘登科
- 体细胞克隆制备肌肉生长抑制素(Myostatin)基因敲除猪
- 【目的】肌肉生长抑制素(Myostat in,MSTN)是一类对骨骼肌生长具有负调控作用的因子,MSTN基因的缺失或突变会引起其骨骼肌重量的显著增加。因此,生产MSTN基因敲除猪有望提升猪胴体瘦肉率,达到提高饲料利用率的...
- 李鸿辉冯冲王宁闫军龙川郑道山李西睿罗学明朱彦宾潘登科
- 关键词：基因打靶MYOSTATIN基因胎儿成纤维细胞
- 文献传递
- 锌指核酸酶技术制备肌肉生长抑制素基因敲除的五指山小型猪成纤维细胞被引量：6
- 2013年
- 敲除猪肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因可能提高猪瘦肉率,MSTN基因敲除猪也可作为相关疾病的动物模型。文章利用锌指核酸酶(Zinc-finger nucleases,ZFNs)技术敲除五指山小型猪胎儿成纤维细胞MSTN基因,为制备MSTN基因敲除猪奠定基础。ZFNs质粒或编码ZFNs的mRNA均能高效敲除MSTN基因,使用ZFNs mRNA能直接得到MSTN+/-和MSTN-/-两种基因型的细胞克隆。DNA序列测定与分析发现,细胞克隆的突变类型多为ZFNs作用靶位点处不大于10 bp的碱基插入或缺失(92.18%);氨基酸预测发现,突变型MSTN基因的终止密码子常常提前出现。将MSTN基因敲除的细胞进行体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)发现,胚胎体外早期发育潜力与野生型无显著差异,表明这些细胞可用于后续MSTN基因敲除猪的制备。
- 曹随忠岳成鹤李西睿冯冲龙川潘登科
- 关键词：肌肉生长抑制素基因敲除五指山小型猪锌指核酸酶
- 猪胰岛素启动子调控EGFP表达载体的优化及体外验证
- 2014年
- 目的获得猪胰岛素启动子调控外源基因的高效表达载体,为制备转基因猪胰岛特异性表达目的基因奠定基础。方法利用猪胰岛素启动子(PIP,包含5'调控区、第一外显子、第一内含子及第二外显子ATG前的序列共1.5 kb)构建表达载体,连接PIP和EGFP的酶切位点HindⅢ设计在起始密码子前,命名为PIP-Hind IIIEGFP。鉴于酶切位点的插入位置可能会影响外源基因的表达效率,对载体进行了优化:将Hind III酶切位点删除,实现PIP和EGFP无缝连接,载体命名PIP-EGFP;将第一内含子3'端的内含子剪接受体位点(splicing acceptor site,SA)突变为Hind III内切酶识别位点,命名为PIP-SA(M)-EGFP。三种载体分别电转染小鼠胰岛素瘤β细胞株MIN-6细胞、猪耳成纤维细胞以及猪肾细胞,48 h后通过荧光强度、流式分析、RT-PCR及Western blot检测,验证载体的表达效率。结果转染细胞后,三种载体都仅在MIN-6胰岛β细胞表达绿色荧光。RT-PCR及其产物测序结果显示三种载体的胰岛素启动子第一内含子的剪切存在差异:载体PIP-Hind III-EGFP和PIP-EGFP的内含子存在剪切和不剪切两种情况,剪切不稳定;载体PIP-SA(M)-EGFP的SA位点突变后内含子不剪切,流式细胞及Western blot检测显示,与另外两种载体相比,该载体目的蛋白的表达量最高。结论通过突变胰岛素启动子第一内含子的3'端的剪接受体位点,成功获得了胰岛β细胞的高效表达载体,可用于制备胰岛特异表达外源基因的转基因猪。
- 于淑珍冯冲石宁宁宋小凤潘登科
- 关键词：特异性表达EGFP五指山小型猪
- 电融合仪BLS在猪卵母细胞孤雌激活中的应用被引量：1
- 2007年
- 目的建立并优化BLS细胞融合仪在猪孤雌胚体外生产中的使用条件,同时为克隆胚的生产提供数据参考。方法以体外成熟的猪卵母细胞为研究对象,研究了不同的电场强度、脉冲时程和脉冲次数对猪卵母细胞电激活效果及其对孤雌胚发育率的影响。结果电激参数(1.2 kV/cm、100μs、2次脉冲)能够得到较高的卵裂率和囊胚率(70%、30%左右);BLS细胞融合仪是一种经济高效的胚胎激活仪。
- 刘晓张庆桥潘登科陈扣扣张卫红冯冲冯书堂
- 关键词：孤雌激活
- 应用半乳糖表型差异高效筛选α-1,3半乳糖苷转移酶基因缺失的猪成纤维细胞
- 2014年
- 【目的】筛选α-1,3半乳糖苷转移酶(α1,3galactosyl transferase,GGTA1)基因缺失的猪成纤维细胞。【方法】用同源重组载体pBS-GGTA1-SKO和pBS-GGTA1-DKO电转染GGTA1单等位基因敲除(GGTA1+/-)的五指山小型猪胎儿成纤维细胞,利用磁激活细胞分选(MACS)、MACS联合流式细胞术(FACS)、TcdA联合FACS等3种方法进行细胞筛选;对MACS筛选获得的单细胞克隆进行PCR和FACS鉴定,对MACS联合FACS、TcdA联合FACS获得的细胞集落进行PCR鉴定。【结果】经MACS筛选获得了11个细胞克隆,经鉴定2个是GGTA1-/-细胞克隆,阳性率为18.2%;MACS联合FACS筛选获得了3个细胞克隆,经鉴定无GGTA1-/-细胞克隆,阳性率为0;TcdA联合FACS筛选获得了3个细胞克隆,经鉴定均为GGTA1-/-细胞克隆,阳性率为100%。【结论】MACS法筛选和TcdA联合FACS法筛选这2种方法均可以高效筛选出GGTA1双等位基因缺失的猪成纤维细胞,可用于进一步制备供异种器官移植的基因修饰小型猪。
- 岳成鹤曹随忠李西睿冯冲龙川余树民储明星潘登科
- 关键词：五指山小型猪基因缺失成纤维细胞
- 不同体细胞类型和基因转染方式对绵羊克隆胚胎体外发育的影响被引量：1
- 2012年
- 首先获得绵羊胎儿成纤维细胞、成年耳组织成纤维细胞及前脂肪细胞,用脂质体介导法、BTX电转法及Nucleofector核转法对上述细胞系转染绿色荧光蛋白(gfp)基因,并对转染效率进行比较,最后探讨3种转gfp基因细胞对绵羊转基克隆胚发育的影响。结果:核转法的转基因效率最高,3种细胞的转基因效率分别为86%,87%和90%,显著高于BTX电转法和脂质体法基因转染效率;脂质体转染效率显著低于BTX电转效率(P<0.05)。而对同一种转染方法而言,基因转染效率在3种细胞间差异均不显著(P>0.05)。在以上述3种转基因细胞为核供体的转基因克隆试验中,胚胎融合率、卵裂率均无显著性差异(P>0.05),胎儿成纤维细胞组的囊胚率显著高于前脂肪细胞组(P<0.05),但耳组织成纤维细胞组与胎儿成纤维细胞、前脂肪细胞间差异均不显著(P>0.05)。结果表明核转法基因转染效率最高,胎儿成纤维细胞最适合于胚胎克隆研究。
- 崔茂盛冯冲张金龙张效生李义海冯建忠
- 关键词：绵羊体细胞基因转染克隆
- 表达hCD47小型猪创建及其在异种移植中抗吞噬研究
- 目的猪是人类异种器官移植的理想供体。然而,异种移植物进入受体后将被受体巨噬细胞清除,其主要原因是巨噬细胞表面的受体-信号调节蛋白(signal regulatory proteinα,SIRPα)不能识别异种细胞表面的整...
- 龙川石宁宁曾国敏冯冲潘登科
- 关键词：异种移植巨噬细胞巴马小型猪
