刘晓庆
- 作品数：8 被引量：34H指数：4
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项吉林省自然科学基金更多>>
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- 大豆RuBP羧化酶小亚基基因（rbcS）启动子的克隆及功能鉴定
- 1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（Rubisco）存在于所有高等植物中,是光合作用中的关键酶,也是光合植物叶片中含量最丰富的蛋白质（约占可溶性总蛋白的50%）。Rubisco由8个大亚基（rbcL）和8个小亚基（rbcS...
- 刘晓庆
- 关键词：大豆GUS活性
- 大豆rbcL基因克隆、序列分析及原核表达被引量：11
- 2011年
- 利用叶绿体基因组保守性的特征,根据菜豆、豌豆、烟草的rbcL基因序列设计引物,从大豆叶绿体DNA中克隆rbcL基因,全长序列为1 488bp,包括1 449bp的开放阅读框,编码482个氨基酸。相似性比较显示,此序列与其它10个物种rbcL基因核苷酸的同源性为85.37%～95.31%,氨基酸的同源性为90.87%～96.47%。将该基因与表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,阳性菌液IPTG诱导后经10%SDS-PAGE分析,结果显示,诱导表达出分子量约为60kD的特异融合蛋白。
- 刘晓庆崔喜艳丁志鑫李海燕
- 关键词：大豆RBCL基因基因克隆原核表达
- 2种PCR方法扩增大豆rbcS启动子5′侧翼序列比较被引量：6
- 2011年
- 比较了扩增已知序列5′侧翼序列的2种PCR方法。方法一是反向PCR(IPCR),以大豆基因组酶切后的DNA片段自身环化产物做模板,用2对特异引物反向扩增大豆rbcS启动子5′侧翼序列。方法二是热不对称交错PCR(TAIL-PCR),以大豆基因组DNA为模板,用3个巢式特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环。IPCR和TAIL-PCR 2种试验方法分别扩增获得438 bp和867 bp特异产物。经测序发现:2片段两侧均含有设计的引物,其部分序列均与已知序列相一致,两者也有部分序列完全相同,但TAIL-PCR技术简单,重复性好,能够在短时间内获得目标片段,TAIL-PCR技术在克隆侧翼序列时优于IPCR。
- 刘晓庆丁志鑫刘晶崔喜艳
- 关键词：反向PCR大豆
- 甘草、羊蹄上几种病害的病原鉴定及室内药剂筛选
- 首次报道了甘草叶斑病、羊蹄叶斑病、羊蹄叶枯病在世界的发生，羊蹄白粉病在中国吉林省的发生。详细描述了三种病害的症状及危害情况并对病原菌的生物学特性进行了初步研究和室内药剂筛选。
甘草叶斑病主要危害叶片，多从植物叶...
- 刘晓庆
- 关键词：室内药剂筛选
- 文献传递
- 栽培大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)全长cDNA的克隆及原核表达被引量：7
- 2014年
- 根据NCBI中发表的大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)序列(AF303939-1)设计特异引物,以吉农13大豆为实验材料,采用Trizol法提取叶片总RNA,通过RT-PCR克隆大豆rbcS的cDNA。将该基因与原核表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞,双酶切鉴定后筛选阳性克隆,测序结果显示:rbcS全长696bp,其中开放阅读框为537bp,编码178个氨基酸;选择含大豆rbcS cDNA阳性克隆菌液IPTG诱导,经SDSPAGE分析,诱导表达出分子量为29.1kDa的融合蛋白,表达产物大小与预计理论值相符。诱导7h蛋白表达量最高,为64.15%。
- 崔喜艳董雅致刘晓庆张治安
- 关键词：栽培大豆RBCS基因克隆原核表达
- 一种大豆叶片特异性启动子SRS4及其应用
- 本发明公开了一种大豆叶片特异性启动子SRS4及在转基因植物中的应用，它是用独特设计的引物，以大豆“吉农13”基因组DNA为模板，克隆了大豆rbcS基因启动子SRS4并构建植物表达载体，命名为Pcambia-GrbcSP；...
- 李海燕崔喜艳刘晓庆张林波陈展宇宋慧
- 一种大豆叶片特异性启动子SRS4及其应用
- 本发明公开了一种大豆叶片特异性启动子SRS4及在转基因植物中的应用，它是用独特设计的引物，以大豆“吉农13”基因组DNA为模板，克隆了大豆rbcS基因启动子SRS4并构建植物表达载体，命名为Pcambia-GrbcSP；...
- 李海燕崔喜艳刘晓庆张林波陈展宇宋慧
- 文献传递
- 大豆rbcS基因启动子的克隆及在转基因烟草中的功能缺失分析被引量：6
- 2015年
- 【目的】进一步验证栽培大豆rbcS基因启动子功能,为植物基因工程相关研究提供启动子资源。【方法】从栽培大豆中克隆了rbcS基因5′端上游1 538bp的DNA序列,根据光诱导表达调控元件及顺式作用功能元件所在的位置,设计含1 089,712和190bp 3个5′端缺失体,并将rbcS基因启动子(1 538bp)及3个5′端系列缺失体序列分别与gus基因融合,构建植物表达载体并命名为pGmrbcS、pA、pB和pC,用农杆菌介导法转化烟草,通过gus基因活性变化检测不同缺失体的表达特性。【结果】克隆了1 538bp的大豆rbcS基因启动子序列及1 089,712和190bp的5′端缺失体启动子片段。GUS活性检测表明,在pGmrbcS转基因烟草的叶中GUS活性最高,且与pCAMBIA1301转基因烟草叶片中CaMV35S启动子驱使gus基因的表达量相当,而茎、根中GUS活性较低。GUS定量分析表明,T1代转基因烟草光下培养时,3种缺失体启动子叶片中的GUS表达活性均与CaMV35S启动子相当,其中pB活性最高,是CaMV35S启动子活性的1.4倍,pA、pC活性低于pB,分别为pB活性的84%和71%;含pA的转基因烟草于黑暗中萌发的幼苗叶片gus基因不表达,光下萌发幼苗叶片有gus基因表达,而含有pB、pC的转基因烟草,在黑暗和光下萌发的幼苗叶片中均有gus基因表达,且表达量以pB最高。【结论】含有长度为1 089bp(pA)光诱导元件的rbcS基因缺失体启动子具有光诱导和组织特异表达特性,长度为712bp(pB)的缺失体启动子的启动活性最高。
- 崔喜艳陈众峰范贝韩琳刘晓庆董雅致张治安
- 关键词：栽培大豆转基因烟草
