南佳
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：温州医学院药学院更多>>
- 发文基金：浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- ATP合成酶的翻译后修饰被引量：3
- 2014年
- ATP合成酶(ATP synthase)是生物体内能量代谢的关键酶,是天然存在的分子旋转马达,为细胞生命活动提供所需能量,在生命体中具有重要作用。翻译后修饰(Post-translational modification,PTM)可改变蛋白的物理、化学性质、影响生物学活性,并调控许多生物反应过程,在某些病理情况下,ATP合成酶发生异常的翻译后修饰,导致机体损伤。
- 赵婷牛超阮丹丹南佳丛维涛金利泰
- 关键词：ATP合成酶翻译后修饰磷酸化
- 重组截短型人角质细胞生长因子1在昆虫细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨重组截短型人角质细胞生长因子1(rhKGF1D23)蛋白在昆虫细胞中表达的可行性,为rhKGF1D23蛋白的生产提供新的途径。方法:PCR法扩增昆虫偏爱密码子优化截短序列kgf1d23亚克隆到pFastbac载体。在辅助质粒的作用下,pFastBac-kgf1d23载体Tn7片段转座到Bacmid中mini-attTn7位点,得到穿梭载体Bacmid-kgf1d23,并通过脂质体法转染sf-9细胞得到杆状病毒P1。继续转染细胞扩增病毒并提高病毒滴度,蛋白表达分析从P3代病毒转染细胞开始,收集细胞超声裂解后进行纯化,MTT法检测纯化后目的蛋白生物活性。结果:昆虫偏好密码子改造的kgf1d23基因构建进转移载体pFastBac-kgf1d23和穿梭载体Bacmid-kgf1d23载体中。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在60h后开始大量表达,优化的收获蛋白时间在84～96h;利用肝素亲和层析和SP阳离子交换层析可以去除90%以上的杂蛋白。纯化的rhKGF1D23蛋白在0.3～25.0μg.L-1时,随浓度的增加HaCat细胞的促有丝分裂能力增强,在25.0μg.L-1时达到平台期。结论:重组截短型角质细胞生长因子rhKGF1D23蛋白在昆虫细胞中得到表达,保持其特有的肝素亲和特性,并具有免疫原性及细胞生物学活性。
- 薛萍朱小静刘孝菊李一兰南佳姜潮李校堃
- 关键词：杆状病毒系统
- 重组角质细胞生长因子-1在杆状病毒表达系统中的表达及其生物活性研究被引量：2
- 2013年
- 目的:利用杆状病毒载体表达系统(baculovirus expression vector system,BEVS)表达重组角质细胞生长因子-1(KGF-1),并对其进行鉴定纯化及活性测定。方法:PCR扩增角质细胞生长因子-1基因(KGF-1)序列,克隆到pFastBac杆状病毒转座载体,经酶切测序鉴定出阳性重组转座载体pFastBac-kgf1后,转化含有穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态细胞,蓝白斑筛选出阳性质粒Bacmid-kgf1,转染Spodoptera frugiperda(sf9)昆虫细胞。对收获的蛋白进行SDS-PAGE、Westernblot鉴定。利用肝素亲和层析柱和阳离子交换柱对目的蛋白进行纯化,BaF3细胞检测细胞增殖活性,并利用C57BL/6小鼠检测促毛囊增殖活性。结果:分子量约21 kDa的KGF-1在昆虫细胞中实现了表达。病毒侵染细胞48 h时开始表达目的蛋白,到96 h时表达量达到最高;且感染复数multiplicity of infection(MOI)为4时表达量较好。经过纯化之后,蛋白纯度达到90%以上,蛋白产量达2 mg/L。纯化之后的蛋白对转染FGFR2Ⅲb的BaF3细胞在0.10 ng/ml-1.56 ng/ml之间有促增殖活性,呈剂量依赖关系。并且KGF-1处理后小鼠毛囊增殖效果有所加强。
- 朱小静姜潮薛萍王晓艳徐丹南佳艾君李校堃
- 关键词：SF9细胞杆状病毒表达系统
