孔祥鑫
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院生物反应器与药物开发重点实验室更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科技发展计划项目吉林省科技发展计划基金吉林省科技厅资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- FGFR4的克隆表达及纯化工艺的研究
- 成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growth factor receptor 4, FGFR4)是成纤维细胞生长因子受体家族中较晚被发现的一类跨膜酪氨酸激酶受体,为单链的糖蛋白,由胞外区、单次跨膜区和细胞...
- 孔祥鑫
- 关键词：包涵体克隆纯化
- 文献传递
- 成纤维细胞生长因子-21对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型脂代谢的影响被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)对体外诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型脂代谢的影响及其可能的作用机制。方法:采用MTT法筛选医用脂肪乳注射液使用浓度和FGF-21作用浓度,将体外诱导的NAFLD细胞分为对照组、模型组、脱离脂肪乳组和FGF-21治疗组,光学显微镜观察油红O染色情况,全自动生化仪检测NAFLD细胞内甘油三酯(TG)水平,免疫细胞化学方法观察细胞内肉毒碱脂酰转移酶-1(CPT-1)、过氧化氢酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达。结果:MTT法筛选出0.1%医用脂肪乳注射液作为建立体外诱导NAFLD细胞模型的最佳诱导浓度,与正常肝细胞株HL7702比较,模型组油红O染色后细胞浆内有大量被染成橘红色的脂滴,细胞内TG水平显著升高(P<0.01),CPT-1蛋白表达减弱,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达增加。MTT法筛选出0.5mg.L-1FGF-21作为观察该药物对NAFLD细胞模型影响的作用浓度,与模型组比较,FGF-21处理组细胞内TG水平显著降低(P<0.01),CPT-1蛋白表达增加,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减弱。结论:FGF-21处理能减轻NAFLD细胞中TG蓄积,并使HL7702细胞CPT-1蛋白表达增加,而PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减少。
- 刘敏孔祥鑫杨苹陈玉斌李校堃王会岩
- 关键词：非酒精性脂肪肝病
- 重组人成纤维细胞生长因子-21的表达及纯化工艺的优化被引量：2
- 2009年
- 目的优化重组人成纤维细胞生长因子-21(SUMO-rhFGF-21)融合表达工程菌的表达条件及目的蛋白纯化工艺。方法对工程菌的诱导温度、时间及诱导剂浓度进行优化,并进行罐发酵,对菌体裂解液进行离子交换层析、Ni离子亲和层析及分子筛层析等。纯化产物经SDS-PAGE和HPLC鉴定纯度。结果在诱导温度为37℃,诱导时间为4h,IPTG浓度为0.5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高,达20.5%;罐发酵收菌量可达66g/L,目的蛋白的表达量达20.2%;纯化后的rhFGF-21纯度达96%以上。结论优化了rhFGF-21的表达条件及纯化工艺,为rhFGF-21用于新药开发奠定了基础。
- 赵宏鑫邵明龙杨苹张耀方万晓姗孔祥鑫王会岩李校堃
- 关键词：SUMO纯化
- FGF21[Tyr^(20)]突变体的克隆、表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:将成纤维细胞生长因子21(FGF21)第20位氨基酸进行突变后,在大肠杆菌中表达,并进行纯化和生物活性检测。方法:以野生型的FGF21为模板,将FGF21第20位氨基酸Tyr进行PCR定点突变成Phe后与小分子泛素样修饰物(SUMO)融合,克隆至pET22b表达载体中,构建重组原核表达质粒pET22b-SUMO-FGF21[Tyr20],克隆至BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blotting法进行鉴定,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,SUMO蛋白酶将SUMO切除,SephadexG-50除盐。结果:通过PCR定点突变,成功地将FGF21第20位氨基酸进行了突变,重组质粒pET22b-SUMO-FGF21[Tyr20]经PCR和双酶切鉴定后测序与预期结果相符。经SDS-PAGE电泳分析,蛋白为可溶性,纯化后成功获得FGF21[Tyr20]突变体蛋白,Western blotting分析显示FGF21[Tyr20]突变体蛋白与FGF21抗体有特异性反应。结论:成功构建并高效可溶性表达SUMO-FGF21[Tyr20]的突变体基因,获得FGF21[Tyr20]蛋白。
- 张耀方万晓珊赵宏鑫邵明龙杨苹孔祥鑫刘敏李校堃王会岩
- 关键词：原核表达纯化
- 人成纤维细胞生长因子21基因的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的:以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115和SMD1168为宿主菌表达人源成纤维细胞生长因子21(hFGF21),为开发治疗糖尿病药物提供一定的实验基础。方法:根据毕赤酵母基因偏爱密码子和hFGF21氨基酸序列,设计多条寡核苷酸引物。利用融合PCR方法获得人工合成的成纤维细胞生长因子21(FGF21)基因,定向克隆到质粒pPIC9K中,电转化Pichia pastorisGS115和SMD1168。MD、MM平板筛选表型Mut+,YPD/G418平板进一步筛选高拷贝转化子。甲醇诱导表达,硫酸铵沉淀、分子筛、离子交换方法纯化目的蛋白。结果:PCR扩增出约569bp的特异性片段,测序分析正确;诱导表达上清经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:FGF21在宿主菌GS115中不表达,而在SMD1168表达上清中出现相对分子质量为20000的特异性条带,且与抗FGF21抗体产生特异性反应,阴性对照在该处无特异性带,证明hFGF21蛋白在SMD1168菌株中成功分泌表达。结论:成功克隆FGF21基因,并在Picha pastorisSMD1168中获得表达。
- 邵明龙赵宏鑫杨苹万晓珊孔祥鑫王会岩李校堃
- 关键词：毕赤酵母PPIC9K基因克隆
- 成纤维细胞生长因子受体4的研究被引量：2
- 2010年
- 成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growth factor receptor4,FGFR4)是成纤维细胞生长因子受体家族中较晚被发现的一类跨膜酪氨酸激酶受体,通过与成纤维细胞生长因子结合,启动PLC、Ras等多条信号转导途径将胞外信号传递到细胞内,主要参与胚胎发育、血管生成、创伤愈合、组织分化和修复等重要生理进程,对乳腺癌、肝癌等癌症的发生发展起着重要作用,并成为癌症前期极好的预测因子及治疗学中的有效靶点。本文主要概述了FGFR4的信号转导过程及病理学研究进展。
- 孔祥鑫王会岩李校堃
- 关键词：信号通路癌症多态性
