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TNF受体(P55)和IgGFc的融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达被引量：1: 2001年; 目的　在真核细胞表达具有生物活性的可溶性肿瘤坏死因子 (TNF)受体蛋白 ,用于中和TNF的毒性。方法　将TNFR(P5 5 )的胞外区基因和人IgGFc段基因通过 18个碱基的凝血酶切点连接 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,在COS7和BHK细胞分别得到目的蛋白的表达。结果　在真核表达系统表达了TNFR(P5 5 )胞外区与人IgGFc段的融合蛋白 ,免疫学实验及L92 9细胞体外实验均表明该蛋白具有TNFR(P5 5 )特异的抗原性、与TNF结合的活性以及抑制TNF的活性。结论　真核表达的融合蛋白产物具有可溶性TNF受体 (P5 5 )的生物学活性。; 安乃莉徐春晓姚立红陈爱君曾革非张立国张智清; 关键词：肿瘤坏死因子真核表达系统

血管内皮生长因子可溶性受体flt-1_(n3)对裸鼠人膀胱癌生长的影响被引量：4: 2001年; 目的　研究血管内皮生长因子 (VEGF)受体flt 1胞外区基因抗肿瘤新生血管生成的作用。　方法　采用脂质体转染技术将含有flt 1胞外区前三个IgG样结构区域的真核表达质粒 pcD NA3.1/KDRn7转入人膀胱癌EJ细胞 ,用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆 ,经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆 ,阳性细胞克隆进行PCR和RT PCR鉴定。对裸鼠人膀胱癌组织切片进行免疫组化染色 ,定量分析微血管密度。　结果　PCR和RT PCR结果显示重组质粒转入EJ细胞及在转录水平表达 ;免疫组化的微血管密度实验组明显低于阴性对照组。　结论　阻断VEGF/flt 1信号传导途径能够抑制肿瘤新生血管的形成。; 张志超张智清曾革非张立国郭应禄; 关键词：膀胱肿瘤血管内皮生长因子受体

用腺相关病毒载体介导人血管内皮生长因子受体KDR胞外区基因的表达被引量：2: 2001年; 新生血管大量形成在实体瘤的生长和转移中起着关键的作用。血管内皮生长因子 (VEGF)是介导肿瘤血管生成的最主要因素。从原代培养的人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)提取细胞总RNA ,采用逆转录PCR(RT PCR)方法得到VEGF受体KDR胞外区cDNA片段。将获得的受体基因克隆到AAV基因治疗载体pSNAV中 ,得到重组质粒pSNAV KDR。重组质粒转染BHK细胞 ,加入辅助病毒后 ,获得了表达目的蛋白的重组AAV。重组病毒表达的KDR在体外实验中具有与VEGF结合的活性。在体内实验中 ,重组AAV感染的黑色素瘤细胞在小鼠中形成肿瘤的血管化程度明显低于对照组。; 曾革非张立国张智清; 关键词：血管内皮生长因子受体腺病毒伴随病毒介导

VEGF受体KDR胞外区基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达被引量：6: 2001年; VEGF(血管内皮细胞生长因子 ,VascularEndothelialGrowthFactor)是刺激内皮细胞增殖和新生血管形成的最重要因子 ,与多种实体瘤的生长和转移密切相关。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常有前景的课题。将VEGF受体KDR胞外区前三个Loop 96 9碱基对的cDNA片段克隆到杆状病毒表达载体pFastBacI,与杆状病毒表达载体Bacmid同源重组后 ,转染昆虫细胞SF 9,获得重组杆状病毒并证明了目的基因的高效表达。经Westernblot证实表达产物的特异性。经ELISA和体外生物学活性检测表明表达产物可阻断VEGF的生物学活性 ,抑制鸡胚CAM血管的生长。; 曾革非张智清张立国陈爱君姚立红侯云德; 关键词：血管内皮细胞生长因子受体克隆杆状病毒表达昆虫细胞

TNF受体(P55)胞外区基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2: 2001年; TNF与多种疾病密切相关。为了获得大量具有生物学活性的可溶性TNF受体用以拮抗TNF的毒性作用 ,在原核表达系统中表达了TNFR(P5 5 )的胞外区与TrxA的融合蛋白。将TNFR(P5 5 )胞外区去信号肽的前三个结构域基因克隆入融合蛋白表达载体 pET 32a ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中高效表达了TrxA TNFR融合蛋白。表达产物以包涵体形式存在 ,经过变性和复性 ,并经镍金属鳌和柱亲和层析纯化 ,得到了纯度较高的可溶性受体蛋白的初纯品。免疫学实验及L92 9细胞体外实验均表明 :该蛋白具有TNFR(P5 5 )特异的抗原性、与TNF结合的活性以及良好的抑制TNF的生物学活性。; 安乃莉徐春晓姚立红陈爱君曾革非张立国张智清; 关键词：基因克隆融合蛋白大肠杆菌

可溶性人肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFRⅡ)在大肠杆菌中的表达及其活性检测被引量：3: 2001年; 肿瘤坏死因子 (TNF)是一种多功能性的细胞因子 ,与许多重大疾病有关。为了抑制TNF的生物学活性 ,将TNF受体Ⅱ胞外区在大肠杆菌中进行了可溶性表达 ,并通过金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。结果表明 ,纯化的重组蛋白能够识别并结合TNF ,同时能中和TNF的生物学活性 ,抑制其对细胞的杀伤作用 ,具有潜在的临床应用前景。; 徐春晓姚立红陈爱君安乃莉曾革非张立国张智清; 关键词：肿瘤坏死因子受体可溶性受体大肠杆菌

血管内皮细胞生长因子受体Flt-1胞外区基因的克隆及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达被引量：1: 2000年; 从原代培养的人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)提取细胞总RNA ,采用逆转录PCR (RT PCR)方法得到VEGF受体Flt 1胞外区前 3个IgG样区域cDNA片段 (Flt 1n3 )。将获得的受体基因克隆到真核表达载体 pcD NA3.1中 ,得到重组质粒 pcDNA3.1/Flt 1n3 ,通过脂质体转染方法将其转入中国仓鼠卵巢细胞 (CHO) ,用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆。经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆 ,细胞测活结果表明 ,表达产物具有抑制人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖的活性。鸡胚测活结果表明 ,CHO细胞表达的rFlt 1n3 能抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成。; 曾革非张智清周小明张立国车团结安乃莉陈爱君姚立红; 关键词：VEGF FLT-1 胞外区

Extracellular domain of kinase domain region mediated by adeno-associated virus inhibits growth and angiogenesis of bladder cancer in Balb-c mice被引量：1: 2002年; OBJECTIVE: To verify whether the extracellular domain of kinase domain region (KDR) has anti-angiogenesis activity in vivo. METHODS: cDNA was cloned into adeno-associated virus (AAV) vector pSNAV and transfected to baby hamster kidney (BHK) cells. Recombinant AAV was obtained from the cell culture supernatant after adding helper virus. Recombinant AAV-infected human bladder cancer EJ cell line (EJ cells) were injected subcutaneously into Balb-c nude mice. Tumor specimens were removed from the mice, paraffin-embedded and sliced, then stained by immunohistochemistry. Microvessel density (MVD) was determined under a microscope. RESULTS: The tumor volume developed by EJ cells transfected with the extracellular domain of KDR was significantly smaller (1.70 +/- 0.18 cm(3)) compared with that in the control (5.62 +/- 0.67 cm(3)) (P; 张志超张智清曾革非张立国徐春晓郭应禄; 关键词：CRICETINAE DEPENDOVIRUS LYMPHOKINES MICE

TRAIL受体在膀胱癌中的表达及意义被引量：7: 2001年; 目的　了解肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (TRAIL)受体在膀胱癌组织中的表达及意义。　方法　采用RT PCR及Northernblot方法检测TRAIL受体在膀胱癌组织及正常膀胱粘膜中的表达。　结果　死亡受体DR4、DR5在膀胱癌组织及正常膀胱粘膜中呈强表达 ,假受体DcR 1在正常膀胱粘膜呈强表达 ,假受体DcR 2未见表达。; 张志超张智清张强张立国曾革非郭应禄; 关键词：膀胱肿瘤

表达流行性感冒病毒血凝素蛋白的重组腺病毒的构建被引量：4: 2000年; 用RT PCR方法扩增流感病毒血凝素基因 ,将其克隆到 5型腺病毒载体质粒 pAd5C中。用此质粒与EcoRI酶切回收的 5型腺病毒基因组大片段共转染 2 93细胞 ,通过PCR初步筛选得到重组病毒。SDS PAGE电泳、West ernblot证明重组病毒能表达流感病毒的血凝素蛋白。此重组病毒经滴鼻免疫Balb/C小鼠 ,ELISA实验证明能诱导小鼠产生针对流感病毒的循环抗体IgG和分泌型抗体IgA。本实验证明 ,利用E3区缺失的 5型腺病毒载体可以用来表达流感病毒血凝素抗原 ,重组抗原具有良好的免疫原性。; 张立国郭元吉温乐英曾革非王敏董婕郭俊峰石长信张智清; 关键词：血凝素重组疫苗腺病毒载体粘膜免疫

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张立国

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