李海洋
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：上海海洋大学水产与生命学院更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪乙型脑炎病毒RT-LAMP检测方法的建立和应用
- 为建立一种简单,快速,灵敏,特异性好的猪流行性日本乙型脑炎病毒(JEV)的检测方法,本研究根据Genbank登录的SA14-14-2疫苗株及SA14毒株的E基因组序列,利用在线软件Primer Explorer V3设计...
- 李海洋哈卓殷秀辰饶柏钟张磊峰刘惠莉
- 文献传递
- 猪乙型脑炎病毒RT-LAMP检测方法的建立和应用
- 为建立一种简单,快速,灵敏,特异性好的猪流行性日本乙型脑炎病毒(JEV)的检测方法,本研究根据Genbank登录的SA14-14-2疫苗株及SA14毒株的E基因组序列,利用在线软件Primer Explorer V3设计...
- 李海洋哈卓殷秀辰饶柏钟张磊峰刘惠莉
- 关键词：流行性乙型脑炎环介导等温扩增
- 文献传递
- 猪乙脑病毒重组E基因的克隆表达及间接ELISA检测方法研究被引量：1
- 2015年
- 参照已发表的猪乙脑病毒(JEV)基因组序列,设计引物,扩增出E基因,克隆到pMD19-T载体中。序列分析表明:E基因与NCBI登录的JEV毒株E基因序列同源性达到96.6%—99.7%;遗传进化分析表明:该JEV属于GIII病毒。将E基因片段亚克隆到pET32a-E,IPTG诱导表达E蛋白。Western Blot检测表明:该重组蛋白能与JEV高免血清发生非特异性反应,证明该表达产物为JEV E蛋白。以重组E蛋白为包被抗原,建立检测猪JEV抗体的间接ELISA方法,检测160份猪血清样品,与猪JEV抗体检测试剂盒进行平行性对比,结果显示二者的吻合率为92.2%,表明建立的ELISA方法具有较好的特异性,有望为临床提供一种JEV血清抗体检测方法。
- 李海洋彭丽英陶洁殷秀辰饶柏钟刘惠莉
- 关键词：乙脑病毒E基因间接ELISA
- 猪乙型脑炎病毒Ⅰ、Ⅲ型的RT-LAMP检测方法建立与应用被引量：2
- 2015年
- 参考Gen Bank中猪乙型脑炎病毒(JEV)Ⅰ型和Ⅲ型毒株的E基因序列,通过比对分析,选取8个保守区域设计了6条引物,经条件优化及临床样品验证,本研究建立了能同时检测JEVⅠ型和Ⅲ型毒株E基因的RT-LAMP方法。该方法的最低检测灵敏限度为15 copies,具有较好的特异性,对猪常见病原如猪流感病毒(SIV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),猪细小病毒(PPV)和伪狂犬病病毒(PRV)等均没有特异性扩增。与RT-PCR检测方法相比,其灵敏性高10倍。用本研究建立的RT-LAMP方法检测来自屠宰场的1 500份猪血清,阳性检出率为0.4%,与RT-PCR吻合率达100%,表明本试验建立的RT-LAMP方法适用于Ⅰ、Ⅲ基因型JEV的快速、批量筛检,为JEV感染的流行病学调查提供了必要的技术手段。
- 李海洋殷秀辰饶柏钟刘惠莉
- 关键词：乙型脑炎病毒环介导等温扩增
