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李淑琴
李淑琴
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中山大学孙逸仙纪念医院
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
陈怡
中山大学孙逸仙纪念医院
刘鑫
暨南大学医学院
宫君原
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叶秋萍
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陈怡
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岭南现代临床...
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2011
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表达肾癌G250基因和hGM-CSF基因HEK293细胞系的建立
2011年
目的建立稳定表达肾癌G250基因与基因佐剂hGM-CSF基因编码蛋白的的HEK293细胞系。方法通过脂质体转染的方法,将表达肾癌G250基因与细胞因子GM-CSF基因的双顺反子pIG250-GM真核表达质粒导入HEK293细胞中;经持续G418压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系;用免疫组化、ELISA和Western Blot方法,检测目的蛋白在HEK293细胞中的表达。结果经600 μg / mL的G418压力筛选后,获得了抗性细胞克隆;免疫组织化学方法检测到表达G250的阳性细胞;ELISA方法检测到pIG250-GM转染组细胞培养上清中hGM-CSF的表达与空载体对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Western Blotting方法检测到G250蛋白的表达,分子量约54Ku,与预期大小相符。结论成功建立可稳定表达肾癌G250基因与细胞因子GM-CSF基因的HEK293细胞系,为研究防治肾癌疫苗的免疫应答机制提供了实验基础。
陈怡
叶秋萍
刘鑫
宫君原
李淑琴
关键词:
肾细胞癌
G250
HGM-CSF
HEK293细胞
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