李言
- 作品数：4 被引量：17H指数：4
- 供职机构：大连水产学院生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 鲤脑组织cDNA文库的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 用Gubler-Hoffman法构建了耐低温鲤Cyprinus carpio脑组织全长cDNA文库,经测定库容量为5.7×105cfu/mL,文库的重组率接近95%,平均插入片段长度为1 500 bp,符合文库保存和筛选实验的要求。同时,根据鲤与低温相关的消减cDNA文库中低温下特异表达基因的片段序列,设计了PCR引物,并在此cDNA文库中进行PCR检测和序列测定。使用BLAST软件将测序的10个cDNA序列同GenBank等数据库进行比对,结果显示,8个阳性克隆有相关同源性,2个克隆为功能未知的基因,全长率接近75%。
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- 关键词：CDNA文库
- 低温胁迫对鲤红细胞膜表面结构的影响及相关基因分析被引量：4
- 2009年
- 以荷包红鲤(Cyprinus carpio var.wananensis)耐寒品系(♂,耐低温)与云南大头鲤(Cyprinus pellegnini pellegnini Tchang)(♀,不耐低温)的杂交F2为研究对象,研究抑制消减杂交技术构建的鲤耐低温差异表达基因cDNA文库中2个具有多态性的新差异表达基因[克隆号为CC005(GenBank_Accn为FF339846)和CC062(GenBank_Accn为FF677502)]与低温下鲤红细胞膜形态之间关联性,结果显示,活力正常的实验鱼红细胞膜边缘有数个棘状凸起,直径在500nm左右,高度为300nm左右;两个未知新基因CC005和CC062在膜表面结构凸起组和正常组(相对正常)之间基因型组合分布存在极显著差异(χ2=21.345,P<0.01),推测这2个与低温相关的基因对低温下鲤红细胞膜表面出现的凸起结构有协同效应,这一实验结果将为鲤的耐低温机理研究和标记辅助选择育种提供理论依据。
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- 关键词：红细胞膜差异表达基因
- 低温对鲤鱼的5个基因在不同组织中表达量的影响被引量：8
- 2008年
- 本研究应用实时荧光定量PCR技术对抑制性消减杂交所得到的鲤鱼不同温度下差异表达的5个基因做进一步的研究。结果表明:水温由16℃降至4℃(骤降点)的过程中,在鲤鱼的肝、肠组织中,LKE-25基因的表达量呈下降趋势,而LKE-62基因则呈上升趋势;在肾脏组织中,LKE-48-1、LKE-48-2和LKE-59基因的表达量呈上升趋势,且随着4℃维持时间的延长,其表达量逐渐下降。LKE-25和LKE-59基因在4℃同一尾鱼的心脏、脑、肝、脾、肾、肠组织中的表达量上有很大差异,其中LKE-25基因在心、LKE-59基因在肾组织中的表达量最高。本实验所研究的5个基因在不同温度、不同组织表达量的显著差异,证明了这些基因与水温相关且有组织特异性。
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- 关键词：鲤鱼实时荧光定量PCR
- 鲤脑组织cDNA文库的构建及脑室管膜素基因鉴定被引量：4
- 2009年
- 用Gubler-Hoffman法构建了低温下鲤(Cyprinus carpio Linnaeus)脑组织cDNA文库,经测定库容量为5.7×105CFU/mL,文库的重组率接近95%,平均插入片段长度约为1.5kb,符合文库保存和筛选实验的要求。同时,根据鲤与低温相关消减cDNA文库中低温下特异表达基因片段序列,设计PCR引物在此cDNA文库中进行PCR检测和序列测定,使用BLAST软件将测序的10个cDNA序列同GenBank等数据库进行比对,结果显示8个阳性克隆有相关同源性,2个克隆为功能未知的基因,全长率近75%;以上结果说明本实验所构建的cDNA文库质量较高,可作为筛选与鲤低温性状相关的功能基因的重要资源。同时对其中一个与低温相关的基因脑室管膜素基因构建了表达载体,为进一步验证该基因在鱼类低温适应中所发挥的作用及其作用机理奠定了基础。
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- 关键词：CDNA文库
