肖勇健
- 作品数：18 被引量：35H指数：4
- 供职机构：南华大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：湖南省科技厅一般项目湖南省教育厅重点项目湖南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 梅毒螺旋体Tp0751重组蛋白的表达及鉴定
- 2009年
- 目的表达梅毒螺旋体粘附蛋白Tp 0751,纯化表达产物并对其抗原性进行鉴定。方法通过生物信息学分析,去除Tp 0751信号肽序列,构建原核表达体并在大肠埃希菌(E.coli)R2566中进行诱导表达;Ni-NTA法纯化重组蛋白;蛋白质印迹法(WB)鉴定重组蛋白。结果成功构建了PET-28a(+)/Tp 0751原核表达载体;经表达、纯化后获得了相对分子量约为26 kD的融合蛋白;经WB分析能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论重组表达的Tp 0751重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究Tp 0751重组蛋白在梅毒致病过程中的作用奠定了基础。
- 肖勇健张秋桂刘双全谭湘芳赵飞俊
- 关键词：梅毒螺旋体粘附蛋白
- 梅毒螺旋体Tp0319重组蛋白的表达及免疫活性研究被引量：4
- 2010年
- 目的 克隆和表达梅毒螺旋体Tp0319基因,并对其表达产物进行免疫活性分析.方法 挑选并克隆出Tp0319免疫优势区基因,构建原核表达载体 诱导表达并纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法鉴定 用纯化的重组蛋白免疫新西兰兔 间接ELISA法检测梅毒螺旋体参考血清及临床标本.结果 成功构建原核表达载体pQE32/Tp03 19 高效表达和纯化出一相对分子质量约30 000的重组蛋白.用重组蛋白免疫新西兰兔,能刺激其产生高水平抗体滴度.Western印迹证明其能与梅毒患者血清发生特异性反应,阴性对照菌未见目的 表达条带.间接ELISA法检测80份梅毒螺旋体参考血清（阴性、阳性各40份）,阳性和阴性结果的符合率均为100%.检测200份临床梅毒血清标本及200份正常人血清,结果与梅毒螺旋体明胶凝集试验相比,灵敏度和特异度分别为92.6%和100%,符合率为96%.结论 制备的Tp0319重组蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用奠定一定的基础.
- 刘双全汪世平肖勇健吴移谋赵飞骏曾铁兵张跃军高冬梅
- 关键词：密螺旋体苍白重组蛋白质类免疫活性
- 梅毒螺旋体的基因分型与临床耐药及诊断研究
- 背景：据WHO估计，近年来全世界每年约有1,060万梅毒新发病例。我国梅毒的报告感染率和发病率也呈直线上升趋势，2015年度全国梅毒报告发病数为458,682例，较2011年增长16％。因此，对梅毒进行有效的监控及防治已...
- 肖勇健
- 关键词：梅毒螺旋体基因分型基因突变菌株鉴定聚合酶链式反应
- 文献传递
- 慢阻肺患者感染细菌的分布及耐药性分析被引量：3
- 2007年
- 目的了解慢阻肺(COPD)感染细菌的分布及其耐药性,给临床诊治提供参考。方法对COPD感染患者进行痰培养鉴定及药敏试验,同时对检出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行超广谱内酰胺酶(ESBLS)确正试验测定、金黄色葡萄球菌进行耐甲氧西林测定、卡他莫拉茵进行β内酰胺酶测定。结果共分离出475株细菌,主要为铜绿假单胞菌106株,其次为嗜麦芽寡养单胞菌47株、白色念珠菌45株、卡他莫拉菌44株、不动杆菌42株、肺炎克雷伯菌36株、金黄色葡萄球菌30株。大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的产ESBLS株检出率达53．3%和58．3%,MRSA检出率达73．3%,卡他莫拉菌中产β内酰胺酶株占93．2%。结论COPD患者的感染病原主要为革兰阴性杆菌,另外卡他莫拉菌和白色念珠菌也不容勿视。所检出的菌株对大多数抗生素呈高度耐药。
- 肖勇健
- 关键词：慢性阻塞性肺病细菌分布耐药性
- 新生儿血培养常见病原菌的分布及药物敏感率分析被引量：3
- 2008年
- 目的探讨新生儿败血症的病原菌分布及药物敏感情况,以合理地选择抗生素。方法无菌抽取临床怀疑为败血症的新生儿血液进行培养、鉴定及药敏实验。结果820份血培养分离出病原菌174株,其中G+球菌135株,以凝固酶阴性葡萄球菌为主,其次为金黄色葡萄球菌;G-杆菌38株。G+球菌对青霉素、苯唑青霉素、红霉素等敏感率较低,G-菌对哌拉西林、氨苄西林及第二、三代头孢等有较高的耐药性。结论葡萄球菌、克雷伯菌属、大肠埃希菌及肠杆菌属是新生儿败血症的主要病原菌;所有细菌对常用抗生素有较高的耐药性。
- 石宏云冯伟肖勇健陈叶
- 关键词：新生儿败血症细菌培养药物敏感率
- 梅毒螺旋体Tp0319重组蛋白的表达、纯化及其在临床诊断中的初步应用被引量：2
- 2009年
- 目的克隆、表达及纯化梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白Tp 0319,并建立间接ELISA方法,探讨其在梅毒血清学诊断中的价值。方法构建重组质粒PQE32/Tp 0319,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和western blot鉴定表达结果;Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,间接ELISA检测梅毒患者血清中特异性IgG抗体。结果成功构建了PQE32/Tp 0319重组质粒;经SDS-PAGE检测,诱导产物显示有一条相对分子质量约为30 000的特异蛋白质条带,western blot分析证明其只与人抗Tp IgG发生特异性反应;将Tp 0139用于间接ELISA检测抗Tp抗体阴、阳性参比血清,特异性和敏感性均为100%;检测梅毒患者和健康献血者血清各150份,结果与TPPA法符合率为95.3%。结论制备的Tp 0319重组蛋白有较好的免疫反应性,可望用于临床梅毒血清学诊断。
- 肖勇健伍宁刘双全赵飞俊吴移谋
- 关键词：梅毒螺旋体重组蛋白血清学试验间接ELISA
- 梅毒螺旋体大环内酯类抗生素耐药位点的监测被引量：5
- 2017年
- 目的调查湖南衡阳地区梅毒螺旋体23 rRNA基因上A2058G和A2059G突变现状。方法常规PCR扩增一期梅毒患者下疳样本中Tp pol A基因,筛选Tp DNA阳性样本;巢氏PCR扩增Tp 23r RNA基因,分别采用限制性内切酶MboⅡ和BsaⅠ酶切纯化的PCR产物。结果 43例下疳分泌物中筛选出39例Tp DNA阳性样本;39例样本全部检出A2058G突变,而未检出A2059G突变。结论湖南衡阳地区Tp流行株存在高频率23rRNA基因点突变,临床上在治疗梅毒时应谨慎使用大环内酯类抗生素。
- 肖勇健刘双全谢亚锋刘卓然
- 关键词：梅毒螺旋体
- 2450例梅毒血清学结果分析被引量：5
- 2008年
- 目的:比较快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)的检出效果。方法:用三种试验对我院2450例住院患者血清进行检测,不同方法之间比较采用2χ检验。结果:RPR阳性检出率为2.16%,ELISA阳性检出率为2.65%,TPPA阳性检出率为2.61%。RPR与TPPA法比较,差异具有统计学意义。ELISA与TPPA法比较,差异无统计学意义。结论:临床上可采用RPR与ELISA法作为梅毒血清学的过筛试验,对于梅毒的确诊需采用TPPA法。
- 肖勇健
- 关键词：梅毒RPRELISATPPA
- 儿童咽拭子标本406份中EB病毒的检测及其基因型鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的了解湖南省株洲、湘潭和衡阳地区儿童鼻咽部EB病毒的感染状况及其基因型，为EB病毒的治疗、预防和临床检验提供指导。方法从株洲、湘潭和衡阳部分医院收集疑似EB病毒感染的儿童咽拭子标本406份，采用荧光定量聚合酶联反应（FQ—PCR）检测标本中的EB病毒-DNA；阳性标本分别用特异性引物从中扩增3个目的基因片段，其中PCR扩增的EBNA-3C片段直接电泳以分析1／2分型，BamHI片段和BamHI WI／I1交界区基因片段采用PCR-RFLP分析鉴定F／f和C／D分型，测序和Blast比对验汪分型结果。结果从406份标本中共检出 EB病毒-DNA阳性株159份，株洲74份（38．5％），其中1型72份（97．3％），2型2份（2．7％）；湘潭42份（38．9％），1型40份（95．2％），2型2份（4．8％）；衡阳43份（40．6％），1型43份（100％），2型未发现、从159份阳性株中随机扩增了73份做F／f分型，68份做C／D分型，共检测到F型73份，C型68份，3个地区均未检测到f型和D型。结论株洲，湘潭和衡阳儿童鼻咽部EB病毒感染的检出率分别为38．5％，38．9％，40．6％，且其主要感染的3种独立基因型以1、C、F型为主，3个地区间儿童鼻咽部EB病毒-DNA的检出率及其基因型的差异无统计学意义。
- 张小团肖勇健刘卓然刘佳倪
- 关键词：EB病毒基因分型儿童咽拭子
- 梅毒螺旋体Tp0821基因的克隆、表达、纯化及免疫活性研究被引量：5
- 2010年
- 目的 构建梅毒螺旋体（Tp）膜脂蛋白Tp0821的重组质粒,表达、纯化其相应蛋白,研究其免疫活性.方法 构建重组质粒pQE32/Tp082l,诱导表达其相应蛋白,以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体并测定其效价.建立间接ELISA法,检测80份梅毒参比血清、临床经FTA-ABS确诊的阳性血清各150份.结果 成功构建重组质粒pQE32/Tp0821,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析重组蛋白分子量与预期结果相符.将亲和层析后所获高纯度重组蛋白免疫新西兰兔,制备的多克隆抗体效价达1：6400.间接ELISA法检测梅毒参比血清、临床梅毒患者血清,与间接免疫荧光螺旋体抗体吸附试验（FTA-ABS）法比较,其灵敏度、特异度分别为92.6%和98.6%,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 Tp0821重组蛋白具有较好的免疫活性,可用于梅毒血清学检测.
- 伍宁肖勇健顾伟鸣刘双全赵飞骏张跃军吴移谋
- 关键词：重组蛋白质类免疫活性梅毒
