苑晓娟
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 供职机构：山西医科大学更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- WT1蛋白CTL表位肽基因载体的构建与鉴定
- 2013年
- 目的构建WT1(Wilms’tumor gene 1)蛋白CTL表位肽基因载体,并检测其在293T细胞中的转录。方法设计分别含WT1-126肽、WT1-235肽以及这两种肽的基因载体,并加入Th通用表位Pan-DR-Th(PADRE),应用蛋白酶体切割软件PAProC和NetChop优化各表位和间隔序列,DNA疫苗在线预测工具DyNAVacS优化真核密码子后,人工合成核苷酸序列,分别插入pUC57载体,构建pUC57-WT1质粒,测序鉴定后,酶切回收各目的片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒,转染293T细胞,RT-PCR检测各目的基因在293T细胞中的转录。采用无内毒素质粒大量提取试剂盒提取各重组质粒,采用紫外分光光度计测定质粒的纯度和浓度。结果各重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证实构建正确;重组质粒携带的目的基因可在293T细胞中成功转录;各重组质粒DNA的纯度均合格,浓度在864.6～883.9μg/ml之间。结论成功构建了WT1蛋白CTL表位肽基因载体,并能在真核细胞中正常转录,为下一步在小鼠体内探讨特异性不同的CTLs群发挥抗肿瘤作用的机制奠定了基础。
- 彭霞樊卫平张凯苑晓娟刘玲玲王亮
- 关键词：细胞毒性T淋巴细胞表位肽DNA疫苗
- 肿瘤超声抗原疫苗联合低剂量环磷酰胺在小鼠体内抗肿瘤效应的研究被引量：1
- 2014年
- 目的探索肿瘤超声抗原疫苗联合低剂量环磷酰胺(CTX)的抗肿瘤效应。方法 C57BL/6雄性小鼠48只,随机分为PBS对照组、CTX组、FBL3超声抗原疫苗组、FBL3超声抗原疫苗联合CTX组。按程序免疫3次后,每组随机取4只小鼠,流式细胞术比较脾细胞中CD4+CD25+Treg及CD8+T细胞比例,MTT法比较脾细胞杀伤FBL3功能,各组其余小鼠接种FBL3肿瘤细胞,观察成瘤时间及肿块大小。结果超声抗原疫苗不能诱导CD8+T细胞比例升高(P>0.05);CTX可下调Treg细胞数量(P<0.05);疫苗和CTX均可提高脾细胞体外肿瘤杀伤率并能缩小肿块体积、延长小鼠成瘤时间,两者联合显示更强的抗肿瘤效应。结论肿瘤超声抗原疫苗联合小剂量CTX可能通过提高体液免疫或固有免疫发挥抗肿瘤效应。
- 谢艳云苑晓娟李娜樊卫平
- 关键词：环磷酰胺抗肿瘤
- 超声抗原树突状细胞瘤苗抗肿瘤效应的体外研究被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨结肠癌肿瘤超声抗原致敏的树突状细胞（DC）疫苗体外对结肠癌细胞的杀伤作用.方法分离HLA-A＊0201型健康供者的外周血单个核细胞（PBMC）,重组人细胞因子rhGM-CSF、rh IL-4、rh TNF-α体外诱导DC成熟,负载SW480超声抗原后体外刺激同一供者的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）前体,MTT法检测CTL杀伤SW480（HLA-A＊0201阳性）、K562（HLA-A＊0201阴性）的细胞毒实验.结果在效靶比20∶1、10∶1、5∶1、2.5∶1作用时,CTL对SW480的杀伤率分别为51.12%、46.67%、52.60%、40.00%;对K562的杀伤率分别为29.26%、31.98%、39.46%、31.30%,证明在各种效靶比作用时,CTL对SW480的作用均强于K562（P＜0.05）.结论肿瘤超声抗原致敏的DC瘤苗能激发具有特异杀伤功能的CTL,并且体外杀伤靶细胞具有MHC限制性.
- 谢艳云樊卫平李娜苑晓娟彭霞
- 关键词：肿瘤癌症疫苗树突细胞SW480
- 人巨细胞病毒PP65322-561片段的原核表达及功能鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的构建人巨细胞病毒（HCMV）PP65，控～矧蛋白片段的原核表达载体PQE30-PP65，并表达蛋白。方法PCR扩增HCMVPP65第976～1686位核苷酸片段；构建重组表达质粒PQE30-PP65转化M15并表达蛋白；PCR、SDS-PAGE及Western blot鉴定重组载体及表达产物；ELISA检测目的蛋白的抗原性。结果构建了PQE30-PP65表达载体，在M15菌株中成功表达PP65勉娟。蛋白，蛋白浓度达到2．2g／L并与pp65单克隆抗体及HCMVIgG阳性血清反应良好。结论成功构建PQE30-PP65表达载体，表达的目的蛋白具有良好的抗原性。
- 李娜樊卫平谢艳云苑晓娟龚磊李军锋周育森
- 关键词：HCMVPP65蛋白原核表达抗原性
- WT1-DNA疫苗联合小剂量环磷酰胺抗肿瘤效应的研究
- 目的：
1比较多次与单次应用小剂量环磷酰胺（CTX）对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞（TREG）数量及功能的影响，明确小剂量CTX 可否多次用于下调TREG细胞。
2通过小鼠体内WT1-DNA 疫苗与小剂...
- 苑晓娟
- 关键词：WT1抗肿瘤
- 文献传递网络资源链接
- WT1-235肽体外抗肿瘤效应的研究被引量：3
- 2011年
- 目的探索WT1肽体外抗肿瘤效应。方法合成含HLA-A*0201锚定位点的9个氨基酸的WT1-235肽。PCR-SSP法筛选HLA-A*0201健康供者并鉴定细胞株HLA-A基因型别,RT-PCR鉴定靶细胞株WT1表达与否。体外分离HLA-A*0201型别的外周血单个核细胞(PBMCs),培养树突状细胞(DC),负载WT1肽并刺激活化同源淋巴细胞,进行体外CTLs杀伤靶细胞的细胞毒试验。结果荷肽DC活化的CTLs对高表达WT1的HLA-A*0201型别细胞株SW48的杀伤效应高于不表达WT1的HLA-A*0201型别的人T细胞,也高于表达WT1但非HLA-A*0201型别的K562细胞(P<0.05)。结论 WT235-242肽具有体外抗肿瘤效应并受MHC限制。
- 樊卫平谢艳云宋玉靖王宏伟郝彦琴苑晓娟
- 关键词：WT1肽疫苗树突状细胞CTL抗肿瘤
- 小剂量环磷酰胺对正常小鼠CD4^+CD25^+Treg细胞的调节作用被引量：6
- 2011年
- 目的比较多次与单次应用小剂量环磷酰胺(CTX)对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)数量及功能的影响,明确小剂量CTX可否多次用于下调Treg细胞。方法 C57BL/6小鼠32只,随机分为正常对照、单次、两次及三次CTX注射组共4组,各组每10天腹腔注射20 mg/kg CTX或等体积PBS,末次给药后3 d,流式细胞技术测小鼠脾细胞中Treg细胞占CD4+T细胞百分比;同时3-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法比较各组脾细胞中T、B细胞增殖功能,中性红吞噬试验比较各组巨噬细胞吞噬功能。结果各实验组小鼠脾细胞中Treg细胞占CD4+T细胞百分比显著低于对照组(P<0.05),而各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。各实验组T、B细胞增殖指数及巨噬细胞吞噬功能明显高于对照组(P<0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。应用CTX后Treg细胞数量与T、B细胞增殖功能及巨噬细胞吞噬功能呈线性负相关。结论多次与单次小剂量应用CTX对小鼠Treg细胞数量的下调作用无差异,下调Treg细胞后对免疫细胞的调节功能也无差异,小剂量CTX可多次用于下调正常小鼠Treg细胞。
- 苑晓娟樊卫平张凯刘玲玲彭霞谢艳云
- 关键词：环磷酰胺CD4+CD25+调节性T细胞免疫疗法
