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一种提取土壤样品中麻疯树核糖体失活蛋白curcin的方法: 2017年; 建立并优化了一种土壤麻疯树核糖体失活蛋白curcin的提取方法.优化后的提取步骤和参数为:0.1 g含curcin的土壤样品加入1 m L的提取缓冲液(5 mmol/L磷酸盐,0.1 mmol/L EDTA,0.2%SDS(m/V),20 mmol/Lβ-巯基乙醇,p H7.2),在18℃以上的室温条件下振荡混匀1 h,离心取上清液.重复该过程一次,合并上清液.上清液于4℃放置过夜,离心取上清液,即为样品粗提液.该样品粗提液即可用单克隆抗体间接酶联免疫吸附法(ELISA)进一步检测其中的curcin含量.该方法对curcin含量高于8μg/g土壤可进行定性检测,对于curcin含量分别为100、500、1 000μg/g的土壤样品的回收率分别达到49.3%±2.8%、64.2%±3.62%和78.33%±4.24%.该方法的变异系数保持在5%左右,对来自四川3个样地的土壤有较好的适用性.本研究建立优化的提取方法可为评估curcin蛋白在农业领域应用的生态风险提供技术支持.; 张杨雪蒋楠吉柔风舒苹银冉雨露陈放徐莺; 关键词：土壤核糖体失活蛋白 CURCIN 麻疯树

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin2的原核可溶性表达及其抗真菌活性研究被引量：1: 2013年; Curcin2是麻疯树幼苗在真菌侵染、干旱及高低温胁迫下诱导产生的一种核糖体失活蛋白。采用分子克隆的方法,从麻疯树基因组中扩增到Curcin2成熟肽编码基因,分别连接到质粒载体pGEX-6p-1、pMAL-c5E上,转化大肠杆菌最终获得重组菌PGC(pGEX-6p-1-curcin2)和PMC(pMAL-c5E-curcin2)。在不同温度、IPTG浓度、时间诱导下,Curcin2在重组菌PGC中均以包涵体形式表达,在重组菌PMC中主要以可溶性融合蛋白形式表达,且蛋白质的表达量与诱导条件相关。重组菌PMC表达可溶性curcin2的优化条件为:温度28℃,IPTG 0.3mmol/L,时间8h,此条件下目的蛋白占总蛋白表达量的30.6%,1L培养物中可获得19.74mg电泳纯的重组蛋白。重组蛋白可被MBP TrapTMHP柱亲和纯化并与curcin抗体发生抗原抗体反应。体外抗真菌活性实验表明,纯化后的curcin2融合蛋白有抑制真菌生长作用,且对小麦赤霉、油菜菌核的抑制作用强于curcin。此蛋白的获得为其相关功能的研究奠定了基础。; 邵子静蒋楠晏华立詹诚徐莺陈放; 关键词：麻疯树核糖体失活蛋白原核表达抗真菌活性

麻疯树活性氧水平及酶类清除系统对温度胁迫的差异应答研究被引量：1: 2015年; 本文测定并比较了低温(4℃)和高温(40℃)胁迫下,麻疯树幼苗叶片中的丙二醛、脯氨酸、可溶性糖、活性氧水平以及活性氧清除酶类的活性变化.研究发现在低温或高温胁迫下,活性氧(H_2O_2、O_2^-)含量均呈现出先保持不变后上升的趋势,而SOD、CAT、POD活性先上升后降低.在低温胁迫下,MDA、脯氨酸和可溶性糖含量随着胁迫时间增长而逐渐升高;而高温胁迫虽使MDA、脯氨酸含量增大,但变化趋势不如受冷胁迫的麻疯树变化明显,且高温胁迫未使可溶性糖含量发生明显变化.综上麻疯树对高温胁迫的应答程度低于对低温胁迫的应答程度.; 蒋楠荣熔田金华高继海杨千徐莺; 关键词：麻疯树活性氧活性氧清除系统温度胁迫

温度、酸碱度和盐离子浓度对curcin紫外光谱和荧光光谱的影响被引量：2: 2014年; 将麻疯树核糖体失活蛋白curcin在不同温度、酸碱度和Na Cl浓度下进行孵育,测定其紫外光谱和荧光光谱的变化,对影响其结构稳定性的因素进行初步探究。研究结果显示,curcin对温度和p H变化相对敏感。当温度上升到70℃后,紫外吸收明显增加,在348nm时新增一个明显的荧光激发峰。极端p H值对curcin结构影响同样较大,特别是当p H值为11时,在348nm处新增荧光激发峰。上述现象表明,温度和酸碱度的改变可能导致curcin中含色氨酸的疏水核心结构出现暴露在外的变性过程。Curcin对上述两个因素的敏感性提示其稳定性还有待提高,才能满足蛋白质药物开发的需求。; 晏华立蒋楠樊佳黄曌徐莺陈放; 关键词：麻疯树核糖体失活蛋白 CURCIN 紫外光谱荧光光谱

间接酶联免疫法检测麻疯树核糖体失活蛋白被引量：1: 2014年; 建立了基于单克隆抗体的间接非竞争酶联免疫法用于检测麻疯树核糖体失活蛋白的含量.优化单克隆抗体最佳工作浓度为312.5ng/mL,辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG最佳工作浓度为200ng/mL.该方法的线性范围为25～300ng/mL,线性回归方程为y=0.0024x＋0.0322,相关系数R^2=0.9985,定量检测限25ng/mL,定性检出限3.0336ng/mL.试验证明该方法准确度较高,且具有较好的重复性和特异性,可以用于实际检测麻疯树种仁核糖体失活蛋白的含量.; 吉柔风蒋楠胡娜徐莺陈放; 关键词：麻疯树核糖体失活蛋白酶联免疫单克隆抗体

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蒋楠