郭歆冰
- 作品数：12 被引量：38H指数：2
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- 慢病毒介导的人转铁蛋白转基因小鼠的研制及表观遗传修饰对其表达的影响
- 转铁蛋白(Transferrin,TF)是一种与铁结合的糖蛋白,在细胞生长、分化、增殖过程中起着十分重要的功能。因此, 利用转基因动物生物反应器生产转铁蛋白在生物制药上具有重要的意义和前景．但是外源基因整合率不高和外源基...
- 颜景斌潘树标郭歆冰张敬之龚秀丽曾溢滔
- 文献传递
- 慢病毒介导的人转铁蛋白转基因小鼠的研制及表观遗传修饰对其表达的影响
- 转铁蛋白(Transferrin,TF)是一种与铁结合的糖蛋白,在细胞生长、分化、增殖过程中起着十分重要的功能。因此,利用转基因动物生物反应器生产转铁蛋白在生物制药上具有重要的意义和前景。但是外源基因整合率不高和外源基因...
- 颜景斌潘树标郭歆冰龚秀丽蔡勤张敬之曾溢滔
- 文献传递
- 慢病毒载体介导的转人ahsp基因的β^(654)地中海贫血小鼠的制备被引量：1
- 2008年
- 目的:经慢病毒载体介导,制备转人α血红蛋白稳定蛋白基因(ahsp)的β654地中海贫血小鼠。方法:用巢式PCR从人血DNA中获得人ahsp基因,构建含有人ahsp基因的慢病毒载体,制备假病毒,通过卵周隙显微注射手段将其导入β654地贫小鼠的受精卵,经移植至假孕母鼠输卵管,最终孕育出转人ahsp基因的β654地贫小鼠;分析小鼠体内外源ahsp基因的表达情况及其遗传稳定性。结果:共获得了8只人ahsp阳性小鼠,转基因阳性率为32%(8/25),其中3只同时具有β654突变基因;人ahsp基因在小鼠体内的表达水平维持在小鼠自身ahsp表达量的1%左右,且可稳定遗传至子代。结论:制备了转人ahsp基因小鼠,并可遗传至子代,为在个体水平上研究α血红蛋白稳定蛋白与β地贫之间的关系提供了工具。
- 王宝斌方彧聃郭歆冰任兆瑞张敬之
- 关键词：慢病毒载体转基因小鼠
- 应用反向PCR克隆慢病毒介导的转基因小鼠整合位点序列被引量：3
- 2008年
- 目的:为分析慢病毒介导的转基因小鼠中外源基因整合位点的信息,应用反向PCR克隆整合位点序列。方法:小鼠基因组总DNA酶解和自连接后,针对慢病毒载体的特点在LTR附近设计一组特异的PCR引物,优化半巢式PCR的各种参数,提高整合位点序列克隆的效率。结果:克隆了分别携带绿色荧光蛋白(GFP)和转铁蛋白(TF)基因的慢病毒介导的转基因小鼠家系7只小鼠中10个外源基因整合位点序列。结论:本方法可用于慢病毒介导的转基因小鼠整合位点序列的克隆,为分析整合位点与外源基因表达之间的关系等提供了科学依据。
- 张俊龚秀丽郭歆冰任兆瑞
- 关键词：反向PCR慢病毒载体整合位点
- 转导α血红蛋白稳定蛋白(AHSP)对β地中海贫血小鼠表型的影响
- 目的 α血红蛋白稳定蛋白(α-hemoglobin stabilizing protein,AHSP)是一种小的、高丰度的α珠蛋白(αHb)的重要伴侣蛋白,能够结合并稳定机体内游离的αHb,帮助血红蛋白的正常合成。β地中...
- 王宝斌方彧聃郭歆冰任兆瑞张敬之
- 关键词：Β地贫转基因小鼠
- 用慢病毒载体介导产生绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠被引量：35
- 2006年
- 以慢病毒(lentivirus)载体为骨架,携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的假病毒,通过小鼠受精卵卵周隙注射,将其感染小鼠受精卵,经移植于假孕母鼠后获得转基因小鼠．应用PCR、荧光显微镜观察和流式细胞仪分析等技术,证明了GFP基因的整合率达到40％以上;实时定量PCR 分析结果表明转基因小鼠中GFP基因整合的拷贝数约为40;染色体荧光原位杂交分析结果显示 GFP基因在小鼠染色体上的整合是随机的,并通过交配可将外源基因遗传至子代,获得的多整合位点和不同表达水平的转基因小鼠具有明显的实际应用和研究价值．文中报道的慢病毒载体介导的转基因技术为高效制备和选育高表达转基因小鼠品系提供了一种有效的途径．
- 张敬之郭歆冰谢书阳朱怡文黄英王舒任兆瑞
- 关键词：慢病毒载体转基因小鼠GFP
- siRNA和反义RNA质粒直接注射对地中海贫血小鼠进行基因治疗的研究
- 目的 α/β-珠蛋白肽链合成不平衡引起游离α,肽链相对过剩的毒害作用是β-地中海贫血(简称β-地贫)主要发病学环节。若能同时采用RNA干扰技术抑制α-珠蛋白基因的表达和反义RNA技术恢复β654-地贫正常的剪接模式则是治...
- 谢书阳李伟任兆瑞张敬之郭歆冰黄淑帧曾凡一曾溢滔
- 关键词：Β-地贫反义RNA
- 应用双色荧光原位杂交技术对转基因小鼠进行整合位点的染色体定位
- 2008年
- 目的建立一种高度灵敏、特异的双色荧光原位杂交（dual-color fluorescence in situ hybridization,D-FISH）技术，对两种双阳性转基因小鼠外源基因进行整合位点的染色体定位。方法对一只整合单纯疱疹病毒胸苷嘧啶激酶（herpes simplex virus thymidine kinase, HSV-tk）／增强型绿色荧光蛋白（ enlmneed green fluorescence protein, eGFP）的转基因小鼠以及两只整合RNA干扰载体（ RNA interference, RNAi） 的β^654地中海贫血模型小鼠进行实验，脾脏细胞经培养后获得中期分裂相标本片，各加入适量生物素、地高辛标记探针混合液杂交，分别用罗丹明红色荧光抗体及FITC绿色荧光抗体进行D-FISH检测。结果两种转基因小鼠均能在同一个分裂相上同时检测到双色荧光信号。其中，HSV-tk／eGFP双阳性小鼠的分裂相上出现较强的绿色HSV-tk信号和红色eGFP信号，分别定位于染色体2E5-G3及8A2-A4；β^654／RNAi双阳性小鼠检测到红色β^654荧光信号及绿色RNAi荧光信号。经定位分析，β^654均整合在染色体7D3-E2，RNAi病毒载体则是随机整合，其中一只鼠主要整合在12B1位点，而另一只鼠主要整合在染色体1E2．3-1F、3A3两个位点。结论用自行制备的DNA探针建立了高度灵敏、特异的D-FISH技术，同时结合G显带对双阳性转基因小鼠进行染色体基因定位。该技术平台的建立对于转基因动物和基因治疗动物模型的研究具有非常重要的意义。
- 林丹龚秀丽李伟郭歆冰朱怡文黄英
- 关键词：转基因小鼠整合位点双色荧光原位杂交染色体定位
- 卵母细胞特异表达φC31整合酶载体pZP3-INT的构建及其在小鼠卵母细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site-specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)间的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法采集生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3(ZP3)启动子驱动的φC31整合酶表达载体pZP3-INT和检测φC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB+,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中。培养48h后,RT-PCR检测φC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB+载体发生重组的情况。结果表明:载体pZP3-INT在卵母细胞中表达φC31整合酶mRNA;并且pBCPB+载体发生了位点特异性重组,提示φC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应。
- 徐焕宇龚秀丽郭歆冰马睛雯曾溢滔
- 关键词：卵母细胞基因操作位点特异性重组
- 病毒滴度和插入子长度对慢病毒载体介导的转基因小鼠整合率的影响
- 2013年
- 目的研究病毒滴度和插入子长度对于慢病毒载体介导的转基因小鼠整合率的影响。方法制备了18种不同长度插入子的慢病毒载体，通过受精卵卵周隙注射的方法获得转基因小鼠，然后通过PCR技术检测其转基因小鼠的整合率，并对所生成的数据进行统计学分析。结果插入子长度在较短（〈2kb）的情况下，病毒滴度达到2×10^8就可获得较高的整合率，在插入子长度稍长（4-5kb）的情况下，需要1×10^9滴度才能获得较高的整合率，而在插入子长度大于6kb的情况下，未能用该方法获得转基因小鼠。结论滴度的增加能有效提高慢病毒载体制备转基因小鼠的整合率，而当滴度适中（-2×10^8）时，整合率随插入子长度的增加而下降。
- 郭歆冰龚秀丽陈雁雯方彧聃张敬之
- 关键词：慢病毒载体转基因小鼠滴度
