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过表达NeuroD1对脊髓反应性星形胶质细胞转分化为神经元的影响被引量：1: 2015年; 目的探讨过表达Neuro D1对脊髓反应性星形胶质细胞转分化为神经元的影响。方法体外原代培养SD大鼠脊髓星形胶质细胞,以划痕实验制备反应性星形胶质细胞。实验分为空白组(NV组)、对照病毒组(GFP组)和Neuro D1病毒组(Neuro D1组)。各组行划痕处理7 d后,NV组不感染病毒,GFP组感染携带GFP基因的逆转录病毒,Neuro D1组感染同时携带GFP和Neuro D1基因的逆转录病毒,24 h后同时更换神经元条件培养基。各组在1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、14 d观察细胞形态,并采用免疫荧光染色方法分别在感染病毒后7 d观察细胞DCX阳性率和14 d观察细胞Neu N阳性率。结果更换神经元条件培养基后,各组细胞形态发生改变,胞核明显饱满,胞浆减少,突起减少并延长。与Neuro D1组相比,NV组和GFP组细胞突起短而分枝多,胞核较小。感染病毒后7 d,NV组和GFP组细胞部分形态逐渐恢复以前形态而Neuro D1组维持变化后形态。与NV组和GFP组相比,Neuro D1组出现DCX(9.84%±2.06%)(F=40.107)和Neu N(8.25%±2.78%)阳性细胞(F=21.73),结果差异都有统计学意义(P<0.05)。结论在体外培养,Neuro D1的过表达可以介导体外培养脊髓反应性星形胶质细胞转分化为神经元。; 康文博陈翀李晓红王景景涂悦张赛梁海乾; 关键词：转分化反应性星形胶质细胞神经元划痕

亚低温抑制重型颅脑创伤诱导Tau蛋白过度磷酸化的实验研究被引量：1: 2013年; 目的观察亚低温对重型颅脑创伤诱导的Tau蛋白磷酸化的影响。方法体外研究通过细胞液压冲击仪建立SK—N—SH细胞损伤模型，观察冲击1h、6h和12h后Tau蛋白的磷酸化水平。体内研究通过小动物液压冲击仪建立大鼠重型颅脑损伤模型（2．4arm），接受或不接受亚低温治疗（33℃，4h）。观察液压冲击6h、24h和72h后Tau蛋白的磷酸化水平，以及亚低温对此变化的影响。结果sK—N—SH细胞在液压冲击后，Tau蛋白在Thr231和Ser396位点的磷酸化水平从lh开始升高，到6h左右达到高峰。sD大鼠在液压冲击后，Tau蛋白在Thr23l和Ser396位点的磷酸化水平从6h开始升高，到24h左右达到高峰，到72h仍处于高水平；免疫组化的结果也显示，大鼠脑部海马CAl区和皮质区的Tau蛋白磷酸化水平在Thr231位点也明显增高。亚低温可显著逆转液压冲击诱导的sD大鼠Tau蛋白过度磷酸化（P〈0．01）。结论亚低温可抑制重型颅脑创伤诱导的Tau蛋白过度磷酸化。; 李晓红涂悦孙洪涛陈翀张赛; 关键词：亚低温重型颅脑创伤 TAU蛋白磷酸化

低温脑保护的分子学机制被引量：4: 2017年; 低温治疗也称目标温度管理(TTM),是指将身体核心体温降至32~35℃。轻、中度低温治疗可有效应用于缺血性脑病、颅脑创伤、出血性卒中及其他形式的严重脑损伤等,发挥神经保护作用。急性脑损伤、脑缺血引发的级联反应复杂多样,目前的研究显示低温治疗发挥脑保护作用主要是从抑制代谢紊乱、兴奋性毒性、氧化应激反应、细胞凋亡、炎症反应、促进神经元再生以及维持血脑屏障完整性等方面来实现的。深入探讨低温治疗发挥神经保护作用的分子机制有助于临床工作者更好地理解及完善低温治疗的适应证及禁忌证,并为其他治疗方法与低温疗法协同应用提供理论储备及临床实践可能。; 王晶陈翀李晓红; 关键词：脑损伤脑保护分子学机制

模拟脑组织生物力学环境下温敏脐带间充质干细胞的分化特性研究: 2016年; 目的模拟脑组织弹性模量制备相应二维培养基,比较亚低温联合温敏脐带间充质干细胞(ts UC)与常温下脐带间充质干细胞(UC)的分化特性。方法应用单、双丙烯酰胺的聚合作用,制备弹性模量为0.5 k Pa的聚丙烯酰胺(PA)水凝胶,用于模拟脑组织的生物力学环境,并测其弹性模量。从新生儿脐带中分离培养脐带间充质干细胞,通过感染携温度敏感型猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)基因的逆转录病毒来制备ts UC。实验分为3组:UC+常温+玻片组(A组)、UC+常温+0.5 k Pa组(B组)、ts UC+亚低温+0.5 k Pa组(C组)。动态观察各组细胞的生长情况和形态变化,并于7 d后行细胞免疫荧光检测各组细胞的分化水平并计算分化神经元的轴突长度。结果 PA水凝胶弹性模量的检测结果为(0.50±0.03)k Pa。B、C两组部分细胞出现细长的胞突,并存在β-tubulinⅢ阳性细胞,A组细胞镜下无明显神经元形态,也无β-tubulinⅢ阳性表达。B、C两组的神经元分化率以及荧光下轴突长度均明显高于A组,但组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在模拟脑组织弹性模量的环境中,ts UC具有向神经元分化的能力,可应用于亚低温治疗下脑损伤修复的细胞移植研究。; 符锋陈以胜李晓红陈翀孙洪涛涂悦张赛; 关键词：聚丙烯酰胺水凝胶弹性模量生物力学

脑损伤动物模型实施亚低温的模式概述: 2016年; 脑损伤是全球死亡和致残的主要原因之一,给社会和家庭带来沉重的负担。脑损伤动物模型的亚低温实验能够为脑损伤的治疗提供新的干预及治疗措施。在大量的脑损伤动物模型的亚低温治疗实验中,其脑保护的作用已经被证实。然而,目前的脑损伤动物实验的亚低温治疗模式尚不明确,其最佳的治疗模式如低温持续的时间、低温诱导的方法以及最佳的温度等仍然未知。本文对脑损伤动物模型的亚低温实验方法进行概述。; 刘成龙陈翀孙洪涛; 关键词：亚低温脑损伤动物模型

3-D打印胶原蛋白-硫酸肝素仿生脊髓支架的研究被引量：10: 2015年; 目的利用3-D生物打印机制备胶原蛋白-硫酸肝素仿生脊髓支架,为组织工程化治疗脊髓损伤提供细胞载体。方法制备硫酸肝素-胶原蛋白水凝胶,采用3-D打印仿生脊髓支架,扫描电镜观察其结构,排水法计算孔隙率,体外降解实验测量支架p H值和质量变化。取孕14 d SD大鼠的胎鼠脑皮质分离培养神经干细胞(neural stem cells,NSCs),实验分为2组,A组取仿生脊髓支架体外与NSCs共培养,B组直接将细胞悬液接种于预涂左旋多聚赖氨酸的24孔培养板上。采用光镜和扫描电镜观察细胞黏附与形态变化,MTT检测细胞活力,免疫荧光染色鉴定NSCs的分化情况。结果 3-D打印机成功制备出胶原蛋白-硫酸肝素仿生脊髓支架,扫描电镜显示内部具有纵行排列、平行的微孔结构,孔隙率为90.25%±2.15%;体外降解实验中,支架p H值未发生明显变化,8周左右支架降解完全,符合组织工程支架要求。MTT检测示两组培养1、3、7 d吸光度(A)值比较差异均无统计学意义(P>0.05);光镜观察两组均可见大量神经球分化,神经纤维交织成网状;培养7 d A组扫描电镜观察示细胞黏附于支架上,大量细胞伸出轴突,并且有神经球形成;免疫荧光染色示,两组均可分化为神经元和胶质细胞,定量分析显示A、B组分化率分别为29.60%±2.68%和10.90%±2.13%,差异有统计学意义(t=17.30,P=0.01)。结论 3-D打印的胶原蛋白-硫酸肝素仿生脊髓支架具有良好的生物相容性,能促进NSCs增殖和分化,作为神经组织工程支架具有良好的研究和应用前景。; 张仁坤涂悦赵明亮陈翀梁海乾王景景张赛李晓红; 关键词：神经干细胞生物相容性

血栓弹力图监测亚低温对重型颅脑创伤患者凝血功能的影响: 目的研究亚低温对重型颅脑创伤(sTBI)患者凝血功能的影响，探讨血栓弹力图(TEG)监测的意义.方法 75例sTBI患者随机分为亚低温治疗组37例、对照组38例.亚低温治疗组均于伤后24 h内接受亚低温治疗.分别测量两...; 杨细平涂悦彭定伟陈翀张赛; 关键词：血栓弹力图亚低温重型颅脑创伤凝血功能

颅脑创伤后的化学微环境对温敏脐带间充质干细胞增殖和分化的影响被引量：4: 2015年; 目的:模拟颅脑创伤(TBI)后的化学微环境,探讨损伤组织提取液对温度敏感型脐带间充质干细胞(ts UC)增殖和分化影响。方法:用液压冲击损伤仪建立大鼠颅脑创伤模型,获取损伤区域脑组织的匀浆液,用于模拟TBI后的化学微环境。分离培养人脐带间充质干细胞(UC),通过感染携温度敏感型猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)基因的逆转录病毒,以建立ts UC系。在模拟脑组织弹性模量的聚丙烯酰胺水凝胶上进行细胞培养。实验分为UC组(37℃,加入PBS)、ts UC组(33℃,加入PBS)、UC+提取液组(37℃)、ts UC+提取液组(33℃持续3d,后转至37℃)(n=4)。动态观察各组细胞的生长情况和形态变化,24 h后检测细胞的凋亡水平,3 d检测细胞的增殖情况,7 d检测其向神经元和星形胶质细胞分化的水平。结果:与UC+提取液组相比,ts UC+提取液组的凋亡细胞和增殖率分别显著性减少和增加(P<0.01);细胞免疫荧光结果显示,ts UC+提取液组GFAP和Neu N阳性细胞均比UC+提取液组显著性增加(P<0.01)。结论:在模拟脑损伤的化学微环境中,温敏脐带间充质干细胞联合亚低温可显著逆转脑损伤诱导的细胞凋亡,促进细胞的增殖以及向神经细胞的分化,从体外角度证实了温敏脐带间充质干细胞在亚低温环境下对TBI后脑组织微环境的适应性和耐受性。; 赵明亮陈以胜李晓红王景景涂悦孙洪涛张赛陈翀; 关键词：颅脑创伤人脐带间充质干细胞亚低温

温敏脐带间充质干细胞联合亚低温对重型创伤性脑损伤大鼠认知功能的影响被引量：5: 2014年; 目的探讨亚低温环境下温敏脐带间充质干细胞（temperature sensitive umbilical cord mesenchymal stem cells，tsUCMSCs）移植对大鼠重型创伤性脑损伤（traumaticbraininjury，TBI）后认知功能的影响。方法选取雄性sD大鼠36只，采用液压冲击仪（2．5atm）建立重型TBI模型，移植tsUCMSCs后予亚低温治疗。根据干预措施，按随机数字表法将大鼠分为3组：假手术组、TBl组和TBI＋tsUCMSCs＋亚低温组（TBI＋干预组），每组12只。采用Morris水迷宫检测TBI后潜伏期和目标象限停留时间，观察大鼠学习记忆能力。检测长时程电位增强（10ng—termpotentia—tion，LTP）的群体峰电位（populationspike，PS）和兴奋性突触后电位（excitatory postsynaptic potential，EPSP），评估海马的突触可塑性。采用Westernblot检测Tau蛋白在Thr231的磷酸化水平以及糖原合成酶激酶3（glycosesynthasekinase3，GSK3）在Ser9位点的磷酸化水平。结果与假手术组比较，第28天TBI组大鼠的潜伏期延长[（15．9±3．2）S：（8．1±2．7）S]（P〈0．01），目标象限停留时间缩短[（36．3±5．7）S：（14．4±3．0）S]（P〈0．01）；而TBI＋干预组潜伏期缩短[（10．7±2．8）S：（15．9±3．2）S]（P〈0．01]和目标象限停留时间延长[（29．4±4．4）S：（14．4±3．0）S]（P〈0．05）。TBI组大鼠LTP的Ps和EPSP显著上升，而TBI＋干预组抑制PS和EPSP的上升。TBI＋干预组较TBI组Tau蛋白过度磷酸化水平降低[（0．8±1．0）：（1．2±0．1）]（P〈0．05），Ser9-GSK3磷酸化水平升高[（3．0±0．4）：（1．3±0．2）]（P〈0．01）。结论tsUCMSCs和亚低温联合治疗可改善TBI所致的认知功能障碍。; 李晓红陈翀涂悦王景景张赛孙洪涛; 关键词：颅脑损伤干细胞亚低温

亚低温后脑损伤组织提取液对体外脐带间充质干细胞的影响: 目的从化学微环境的角度探讨亚低温(MHT)对颅脑创伤(TBI)后移植脐带间充质干细胞(UC)分化特性的影响.方法制作大鼠颅脑创伤(TBI)模型,给予亚低温处理后,获取损伤区域脑组织的提取液,同样获得单纯TBI及假手术...; 陈以胜赵明亮梁海乾陈翀涂悦张赛孙洪涛; 关键词：亚低温脑组织提取液脐带间充质干细胞

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陈翀

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