公共文化服务平台

共 5 条记录，以下是 1-5

全选清除导出

排序方式：

OPG-HSP65重组蛋白的原核表达及其生物学活性研究被引量：1: 2009年; PCR扩增OPG-HSP65基因,构建原核重组表达载体pET-28a-OPG-HSP65,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达产生包涵体形式的目的蛋白。对重组蛋白进行Western blot检测表明,重组蛋白能与抗His-Tag单克隆抗体及鼠抗人OPG单克隆抗体特异性结合。对重组蛋白进行尿素洗涤纯化,进而透析、复性。经破骨细胞生长抑制实验和抑炎实验表明,重组蛋白能减少破骨细胞生成及减轻迟发型超敏反应小鼠模型炎症反应。; 张月刘舒马静李慎涛王炜张权庚赵文明; 关键词：骨保护素热休克蛋白65 重组蛋白

人骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白在昆虫细胞中的表达和活性分析: 2009年; 目的:利用BaculoDirect杆状病毒表达系统融合表达人OPG功能片段p22-194和分枝杆菌HSP70p111-125基因,并鉴定重组蛋白及其生物学活性。方法:将编码人OPG功能片段和分枝杆菌HSP70功能片段基因克隆至杆状病毒转座载体,将重组转座载体与BaculoDirectTM Linear DNA进行LR重组连接反应,构建出重组杆状病毒DNA,转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒。在Sf9细胞中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE电泳、Western blotting分析,用Ni柱纯化。采用破骨细胞生成抑制试验和抑炎试验鉴定表达产物的生物学活性。结果:重组病毒在感染昆虫细胞后48h开始出现一相对分子质量为28kDa大小的特异条带,感染后72～96h蛋白量达到高峰。破骨细胞生成抑制实验及抑炎试验结果显示,重组蛋白能明显抑制破骨细胞的生长和分化,同时亦具有抑制炎症反应的作用。结论:利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中成功表达OPG-HSP70融合蛋白,该融合蛋白具有抑制破骨细胞生成和抑制炎症反应生物学活性。; 刘舒张权庚张月马静刘振龙赵文明; 关键词：人骨保护素热休克蛋白70 昆虫细胞基因表达

人骨保护素-分枝杆菌热休克蛋白70重组蛋白的基因克隆、原核表达及活性鉴定: 背景和目的：类风湿性关节炎(RA)是一种T细胞介导的，以滑膜炎为主要特征，同时伴有关节软骨及骨损伤的自身免疫性疾病。目前尚缺乏有效的治疗药物。由于RA的患病率高、致残率高、病因尚未完全阐明，特别是RA给社会经...; 马静; 关键词：人骨保护素分枝杆菌热休克蛋白基因克隆原核表达; 文献传递

人骨保护素-分枝杆菌热休克蛋白70融合蛋白的克隆与表达及其活性鉴定被引量：4: 2008年; 目的:为解决类风湿性关节炎中骨破坏及炎症损伤两大难题,拟克隆人骨保护素功能区与分枝杆菌热休克蛋白70肽段融合基因,进一步观察其在大肠杆菌中的表达并鉴定活性。方法:实验于2006-05/2007-09在首都医科大学免疫学系实验室完成。采用反转录-聚合酶链反应技术从人骨肉瘤细胞系MG63总RNA中扩增骨保护素成熟肽段编码区基因,构建pGEM-TEasy-骨保护素重组质粒。以此为模板,聚合酶链反应扩增骨保护素-热休克蛋白70功能区DNA,构建重组表达载体pET-28a-骨保护素-热休克蛋白70,将其转化E.coli.BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷诱导后收集菌体蛋白,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白免疫印迹鉴定该融合蛋白的表达,以破骨细胞生长抑制实验及抑炎实验检测该融合蛋白的生物学活性。结果:①实验最终获得人骨保护素全长基因片段,人骨保护素-热休克蛋白70功能区DNA片段已被正确插入到pET-28a载体中,转化菌株可表达人骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白。②十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示约在Mr22000处有蛋白的超表达,而未诱导菌株未发现有此条带。③蛋白免疫印迹检测表明,融合蛋白能与抗人骨保护素单克隆抗体特异性结合。④破骨细胞生长抑制实验表明,该融合蛋白能够减少破骨细胞的生成数量,具有体外抑制骨破坏的生物活性。⑤抑炎实验表明,融合蛋白具有显著减轻迟发型超敏反应小鼠模型炎症反应程度的作用,说明融合蛋白中热休克蛋白70具有抑制炎症的生物学活性。结论:在E.coli.BL21(DE3)中表达了骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白,体外功能实验证实该融合蛋白具有一定的生物学活性。; 马静王炜赵文明李慎涛曾牧刘振龙

OPG-HSP70融合蛋白的制备方法及用途: 本发明为“OPG-HSP70融合蛋白的制备方法及用途”，属生物医药新技术领域。本发明提供了一种骨保护素-热休克蛋白70(OPG-HSP70)融合蛋白药物。该药物针对类风湿性关节炎(RA)最重要的病理学特征关节滑膜炎伴有软...; 王炜赵文明马静李慎涛; 文献传递

全选清除导出

共1页<1>

马静

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

马静

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈