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肠道病毒71型2A蛋白在病毒复制能力与毒力中的作用: 肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)是手足口病（hand，foot and mouthdisease，HFMD）的主要病原体之一，属于小RNA病毒（Picornaviridae）科，肠道病毒（Enter...; 乔乔; 关键词：肠道病毒71型

肠道病毒71型5’UTR嵌合病毒及其拯救方法和应用: 一种肠道病毒71型5’UTR嵌合病毒，拉丁文学名：(Human？enterovirus？71？5’UTR？chimeric？virus)，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：湖北省武汉市武汉大学校内，保藏...; 温红玲郝树彬孙乐乐李静乔乔马英伟庄志超王志玉; 文献传递

肠道病毒71型3D蛋白研究进展: 2015年; 目的 EV71感染可引起婴幼儿手足口病,甚至导致死亡。近年来由EV71引发的手足口病一直呈上升的流行趋势。目前中国对于手足口病的疫苗研究已进入临床试验阶段,但EV71引起的重症手足口病的发病机制仍不明确。3D蛋白主要负责病毒的复制过程,是抗病毒药物的靶点之一。本文就EV71的3D蛋白的结构功能及针对其作为靶点的抗病毒药物作一综述。; 乔乔王志玉温红玲; 关键词：EV71 抗病毒药物

肠道病毒71型3CD蛋白对细胞的损伤作用被引量：1: 2015年; 目的研究肠道病毒71型(EV71)3CD蛋白在致病机制中的作用。方法实验分为对照组、SDLY1组、SDLY107组和SDLY107(1-3CD)组。通过反向遗传技术将弱毒株SDLY1株的3CD蛋白编码区置换到强毒株SDLY107株,形成拯救病毒SDLY107(1-3CD)株。将EV71病毒接种于RD细胞和Vero细胞,于37℃和39.5℃孵育一定时间后,采用MTT试验检测活细胞量,以判断病毒对细胞损伤作用的改变。结果 37℃下,拯救病毒SDLY107(1-3CD)对细胞的损伤作用弱于SDLY107株,但仍强于SDLY1株(P<0.05);39.5℃下,拯救病毒SDLY107(1-3CD)株对细胞的损伤作用较SDLY107株下降(P<0.05),但与SDLY1株的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EV71 3CD编码区的置换可以改变病毒对细胞的损伤作用,3CD蛋白编码区可能存在影响病毒毒力的位点。这一发现有助于理解EV71的致病机制。; 李静乔乔孙乐乐马英伟庄志超赵丽王志玉温红玲; 关键词：肠道病毒71型细胞损伤

肠道病毒71型微复制子的构建: 2015年; 目的构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系,研究微复制子的复制及表达情况。方法聚合酶链式反应扩增绿色荧光蛋白（EGFP）,利用特定酶切位点及连接酶,将目的基因片段连接至p MD19-T载体,分别构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系。荧光显微镜下观察微复制子表达情况,实时荧光定量PCR观察微复制子复制情况。结果 EV71非结构蛋白微复制子及EV71 3C蛋白酶微复制子表达后,均可观察到特异性绿色荧光,荧光强度有明显差异;转染后12~72 h取样所测RNA含量几乎不变。结论非结构蛋白全长及3C蛋白酶启动微复制子转录强度不同,所构建微复制子不具备复制功能,提示结构蛋白编码区对病毒RNA复制有重要意义。; 马英伟孙乐乐李静乔乔庄志超赵丽于学杰王志玉温红玲孙妍琳; 关键词：肠道病毒71型报告基因非结构蛋白

肠道病毒71型嵌合体病毒感染性克隆的构建与鉴定被引量：2: 2015年; 目的：构建含有弱毒株（SDLY 1株）2A、3B基因片段的强毒株（SDLY 107株）的嵌合体病毒，为进一步研究EV71的毒力建立初步的反向遗传操作平台。方法利用重叠PCR的方法，获得2A、3B基因片段，双酶切后置换到含有SDLY 107株全长的质粒pMD19-T中，利用体外转录获得感染性RNA，转染Vero细胞，成功拯救病毒后经PCR、免疫荧光和免疫印迹对其进行鉴定，测序验证， CCID50和空斑试验测定病毒的滴度。结果成功构建了嵌合体病毒SDLY 107-2A-1和SDLY 107-3B-1感染性克隆，其转染Vero细胞后可观察到典型的细胞病变，PCR试验、间接免疫荧光和免疫印迹试验均证明EV71感染性克隆构建成功，CCID50和空斑试验测得嵌合体病毒SDLY 107-2A-1和SDLY 107-3B-1的滴度分别为1．25×10^5 PFU／ml和0．7×10^5 PFU／ml。结论成功拯救了嵌合体病毒SDLY 107-2A-1和SDLY 107-3B-1，其对细胞病变效应与亲本病毒SDLY 107株相似，为进一步在细胞和体内试验中测定病毒的毒力提供基础研究。; 乔乔李静孙成玺马英伟庄志超孙乐乐赵丽王志玉温红玲; 关键词：EV71 毒力

肠道病毒71型3C嵌合病毒及其拯救方法和应用: 一种肠道病毒71型3C嵌合病毒及其拯救方法和应用，拉丁文学名：(Human？enterovirus？713C？chimeric？virus)，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：湖北省武汉市武汉大学校内，...; 温红玲郝树彬李静乔乔马英伟庄志超王莉鸿王志玉; 文献传递

肠道病毒71型3CD嵌合病毒及其拯救方法和应用: 一种肠道病毒71型3CD嵌合病毒及其拯救方法和应用，拉丁文学名：(Human？enterovirus71？3CD？chimeric？virus)，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：湖北省武汉市武汉大学校...; 温红玲郝树彬乔乔李静马英伟庄志超王莉鸿王志玉; 文献传递

MTT试验检测EV71 2A蛋白对宿主细胞损伤作用被引量：1: 2016年; 目的在Vero细胞、RD细胞和U87细胞3种细胞系中,研究EV71的2A蛋白对宿主细胞增殖能力的影响及对细胞的损伤作用,揭示2A蛋白在EV71的致病机制中所起的作用。方法将野毒株EV71SDLY 107株(强毒株)、EV71SDLY 1株(弱毒株)和嵌合毒株EV71SDLY 107-2A-1感染Vero细胞、RD细胞、U87细胞后,利用MTT试验测定3种细胞在感染病毒后不同时间点的存活情况,绘制细胞生长曲线,比较细胞增殖程度,并利用单因素方差分析法分析3种细胞在感染不同病毒48h后的存活率;结果 EV71SDLY 107株感染Vero细胞和RD细胞后细胞增殖程度和存活率均低于EV71SDLY 1株(t=41.64,P<0.001;t=33.28,P<0.001);EV71SDLY 107-2A-1嵌合株感染Vero细胞和RD细胞后,细胞增殖程度和存活率均高于亲本病毒EV71SDLY 107株,低于EV71SDLY 1株(t=17.97,P<0.001;t=42.09,P<0.01);EV71SDLY 107-2A-1株感染U87细胞后细胞存活率低于EV71SDLY 1株(t=8.85,P<0.001),但与EV71SDLY 107株感染后细胞存活率无统计学差异(t=0.74,P=0.603);不同细胞感染同株病毒48h后,U87细胞存活率均为最低,Vero细胞存活率均为最高。结论 EV71强毒株的2A蛋白对细胞产生的损伤作用大于弱毒株的2A蛋白,提示2A蛋白在EV71对宿主细胞的作用中发挥功能。; 乔乔李静张文强马英伟庄志超白永娟赵丽王志玉温红玲; 关键词：EV71 细胞增殖存活率

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