代礼平
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 供职机构：广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 草鱼NCCRP-1和IL-10基因的克隆和表达
- 本论文以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为研究对象,对其NCCRP-1和IL-10基因进行克隆、表达。通过提取草鱼头肾总RNA,应用同源性克隆和RACE-PCR方法获得NCCRP-1和IL-10基...
- 代礼平
- 关键词：IL-10基因原核表达免疫组织化学
- 草鱼非特异性毒性细胞受体蛋白1基因的克隆和原核表达
- 代礼平简纪常吴灶和鲁义善
- 关键词：克隆原核表达
- 草鱼NCCRP-1和IL-10的表达、抗体制备及组织病理变化被引量：2
- 2021年
- 【目的】制备草鱼(Ctenopharyngodon idella)非特异性细胞毒性细胞受体蛋白-1(NCCRP-1)和白细胞介素-10(IL-10)的抗血清,探讨重组NCCRP-1和IL-10免疫在草鱼抗病毒感染过程中肾脏和肠病理学变化及对NCCRP-1和IL-10表达的影响。【方法】应用PCR扩增技术获得草鱼NCCRP-1和IL-10开放阅读框ORF,构建原核表达载体pET-NCCRP和pET-IL10;用表达的重组蛋白分别制备兔抗NCCRP-1和IL-10的抗血清,并采用ELISA方法测定抗血清的效价;分别用重组NCCRP-1和IL-10免疫草鱼,并用草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)GD108攻毒,感染7 d后制备草鱼肾脏和肠的病理切片,用定量PCR和western blot检测NCCRP-1和IL-10的表达。【结果】草鱼NCCRP-1和IL-10的ORF分别编码237个和179个氨基酸;草鱼NCCRP-1和IL-10的原核表达载体pET-NCCRP和pET-IL10在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中成功诱导表达,最优表达条件分别是0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)37℃诱导4 h和1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h,western blot分析表明重组表达的蛋白为目的蛋白;制备兔抗NCCRP-1和IL-10抗血清的效价均高达1∶40000,免疫和攻毒后,NCCRP-1免疫组草鱼肾脏与肠的病理变化较轻,且NCCRP-1在肾脏与肠中的表达量显著上调(P<0.05);IL-10免疫组草鱼肾脏与肠的病理变化较重,IL-10在肾脏与肠中的表达量变化不显著。【结论】外源性NCCRP-1免疫后增强了草鱼抵御GCRV-GD108感染的免疫应答,NCCRP-1对草鱼抗GCRV GD108感染效果显著;而外源性IL-10免疫后,其对草鱼抗GCRV GD108感染效果不显著。
- 陈静妮代礼平雷燕胡海浩黄鉴涛简纪常闫秀英
- 关键词：草鱼白细胞介素-10组织病理学
- 草鱼(Ctenopharyngodon idellus)NCCRP-1基因的克隆和原核表达被引量：2
- 2013年
- 应用RACE PCR克隆了草鱼NCCRP-1基因。结果表明,NCCRP-1cDNA全长900 bp,开放阅读框为714 bp,编码237个氨基酸残基,预测分子量为27.3 kD,理论等电点为5.63。草鱼NCCRP-1具有NCCRP-1蛋白家族保守的功能区域,与鲤鱼该基因(Cyprinus carpioL.)的相似性为88%。将此基因定向插入原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-NCCRP后转化BL2(1DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示在47.8 kD处出现特异性蛋白条带,Western blot检测表明草鱼NCCRP-1融合蛋白成功表达。
- 蔡佳代礼平王蓓汤菊芬黄郁葱鲁义善吴灶和简纪常
- 关键词：草鱼克隆原核表达
- 草鱼非特异性毒性细胞受体蛋白1基因的克隆和原核表达
- 本研究根据NCCRP-1基因序列保守区域设计简并性引物,应用RT-PCR和RACE技术克隆了草鱼NCCRP-1基因全长,并进行序列的生物信息学分析.结果表明,NCCRP-1基因全长900bp,其中5′非编码区和3′非编码...
- 代礼平简纪常吴灶和鲁义善
- 关键词：克隆原核表达
