刘晓琳
- 作品数：33 被引量：83H指数：6
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：军队医药卫生科研基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 银屑病患者血清可溶性E选择素的检测
- 2003年
- 王刚刘晓琳刘玉峰
- 关键词：银屑病血清可溶性E选择素内皮细胞白细胞粘附分子
- 用于大容量噬菌体抗体库的表达载体的构建及鉴定被引量：7
- 2003年
- 目的:构建一个适用于大容量抗体库的噬菌体抗体表达载体。方法:通过插入人工合成寡核苷酸、PCR介导的定位突变等技术,将载体p3MH进行改造,使之更适于构建大容量抗体库。通过噬菌体抗体的表达、ELISA及细胞内重组试验鉴定所获得的表达载体。结果:通过插入loxp511和loxp序列,将Lac启动子更换为阿拉伯糖启动子、改造抗体基因克隆位点等,将p3MH改造成pAL。经检测pAL可以表达具有功能的Fab噬菌体抗体,其表达调控更为严密,可以在cre+细菌胞内发生预期的loxp-cre介导的定位重组。结论:所获得的表达载体pAL适用于构建大容量Fab噬菌体抗体库。
- 王琰王欲晓陈晓穗化冰刘晓琳
- 关键词：PAL
- 抗体分子在噬菌体表面蛋白Ⅷ上的展示被引量：1
- 2002年
- 目的 观察抗体分子通过丝状噬菌体主要外壳蛋白Ⅷ和次要外壳蛋白Ⅲ在噬菌体表面呈现效果的差异。方法 分别构建通过次要外壳蛋白Ⅲ或主要外壳蛋白Ⅷ展示抗乙肝表面抗原Fab、ScFv和角蛋白Fab的表达载体 ,制备噬菌体抗体 ,比较其抗原结合活性和Fab呈现水平 ,用多种方法尝试提高主要外壳蛋白Ⅷ介导的噬菌体展示效果。结果 主要外壳蛋白Ⅷ对不同特异性抗体Fab段和不同形式的小分子抗体 (Fab和ScFv)的展示效果均低于次要外壳蛋白Ⅲ的展示 ,增加主要外壳蛋白Ⅷ Fab对野生型和主要外壳蛋白Ⅷ的表达比例、试用不同菌株、在Fab和主要外壳蛋白Ⅷ之间插入间隔序列、换用控制更为严密的启动子等措施 ,均未能改善主要外壳蛋白Ⅷ介导的噬菌体展示。结论 以前所报道的通过主要外壳蛋白Ⅷ多价展示Fab段不是普遍存在的现象 ,对有些抗体基因不能达到多价展示。
- 刘晓琳王琰王刚
- 关键词：噬菌体展示
- 用蛋白VⅢ在噬菌体表面展示抗体分子效果的观察
- 噬菌体展示技术(phage display)自1985年由George Smith首次提出以来,已越来越受到重视,在许多领域得到了广泛应用,抗体库技术即在噬菌体展示的基础上发展而来.它通过外源蛋白与丝状噬菌体外壳蛋白融合...
- 刘晓琳王琰王刚
- 文献传递
- 通过基因突变提高噬菌体蛋白Ⅷ介导的抗体Fab段的展示被引量：1
- 2002年
- 目的 构建基因Ⅷ变种文库 ,筛选表面展示效率高的突变体 ,改进抗体分子在噬菌体表面的呈现效果。方法 通过重叠PCR ,在基因Ⅷ引入随机突变 ,克隆到抗乙肝表面抗原 (HBsAg)的噬菌体抗体表达载体中 ,使抗HBsAg的Fab段通过蛋白Ⅷ展示于噬菌体表面 ,构建蛋白变种Ⅷ文库 ,筛选能使HBsAg表面呈现效果得到提高的蛋白Ⅷ突变体。结果 构建了一个库容为 6× 10 8的基因Ⅷ变种文库 ,使用游离抗原竞争、硫氰酸盐洗涤等方法进行淘筛 ,获得多个展示活性高于野生型蛋白Ⅷ的突变体 ,其中 2个最好的变种可使表面呈现效果提高 5 0～ 70倍。结论 通过对基因Ⅷ的改造可提高其对抗体Fab段的展示性能 ,获得 2株可使展示活性提高 5 0～
- 刘晓琳张达矜化冰张海荣王琰
- 关键词：基因突变噬菌体表面展示噬菌体抗体
- 重组人超氧化物歧化酶化学修饰的初步研究被引量：11
- 1993年
- 在高效表达重组人铜锌超氧化物歧化酶(rh Cu/Zn SOD),并纯化得到比活大于4000单位的 rh Cu/Zn SOD 纯品的基础上,采用活化酯法将聚乙二醇(PEG)与 rhCu/Zn SOD 交联,获得分子量约6万的 PEG-SOD 交联物.经 PEG 修饰的酶稳定性增强,表现为对酸、碱和热的耐受力均较未交联酶高.修饰酶的生物半衰期为15h,是天然酶的90倍,酶活性保留80%以上.还实验观察了修饰剂用量与修饰酶保留活性之间的关系.
- 骆训懿王晶翼谢邦铁李战青刘晓琳陈晓穗
- 关键词：超氧物歧化酶化学修饰
- 用噬菌体蛋白Ⅸ展示抗HBsAg分子Fab段被引量：7
- 2004年
- 目的 用丝状噬菌体外壳蛋白Ⅸ (pⅨ )展示抗体Fab段 ,并与外壳蛋白Ⅲ (pⅢ )展示效果进行比较。方法 采用PCR方法钓取噬菌体蛋白Ⅸ基因 ,构建pⅨ展示抗乙肝表面抗原Fab的表达载体 ,制备噬菌体抗体 ,鉴定其抗原结合活性和Fab呈现水平 ,观察了噬菌体洗脱回收效率 ,并与pⅢ展示进行比较。结果 噬菌体pⅨ可以展示有功能活性的抗体Fab段 ,但对Fab的展示率低于pⅢ ,展示率的高低可能与pⅨ展示的外源蛋白分子量大小有关。“结合 洗脱 回收”实验显示 ,酸洗脱法回收的Fab pⅢ噬菌体的感染活性大为下降 ,而对Fab pⅨ噬菌体无影响。结论 pⅨ成功展示Fab段 。
- 张达矜王琰化冰刘晓琳
- 关键词：基因表达载体噬菌体抗体噬菌体抗体库技术
- 人源化和人源抗体制备的研究
- 王琰陈晓穗周丽君王刚王卓智李竞乔媛媛刘晓琳王欲晓张海荣白银朱迎春
- 该研究旨在建立人源或人源化抗体的制备技术。克隆了多种鼠单抗的可变区基因，并在大肠杆菌获得功能性表达；构建了以上相应的多种人-鼠嵌合抗体并在真核细胞成功表达；建立了抗原表位定向选择法对鼠单抗进行人源化的技术，并进一步建立了...
- 关键词：
- 关键词：人源化人源抗体单克隆基因文库
- 重组人IL-8基因的诱导表达及表达产物生物学活性的初步鉴定
- 1998年
- 本文特通过序列分析证实的IL-8基因亚克隆到表达载体p^(BV220)中,构建成了重组表达质粒;通过温度诱导表达,SDS-PAGE电泳后获得的新生蛋白带与预计表达的IL-8分子相吻合,表达产物主要聚集在胞屑间隙中,白细胞趋化实验初步测定了表达产物的生物学活性.
- 何菱陈晓穗王欲晓骆训懿谢帮铁刘晓琳李战青卢妙茹朱迎春
- 关键词：IL-8基因克隆
- 长效重组人超氧化物歧化酶的研制及其辐射防护作用
- 1994年
- 选用无毒、无免疫原性的高分子化合物聚乙二醇(PEG)为修饰剂,以活性酯法制备出PEG- 重组人超氧化物歧化酶(PEG-rh SOD)共价结合物.修饰酶的生物半衰期为15h,比修饰前延长了90倍,对酸、碱、热的耐受力明显高于修饰前.用照射小鼠的活存率评价了PEG-rhSOD的辐射防护作用.小鼠受8.5Gy γ射线照射前1h腹腔注射30万U/kg PEG-rh SOD,可提高活存率42%,与未修饰的rhSOD相比,活存率提高14%.实验仍在进行中.
- 骆训懿王晶翼周丽君陈宇萍陈晓穗朱迎春刘晓琳谢邦铁李战青
- 关键词：超氧物歧化酶
