刘琛
- 作品数：7 被引量：5H指数：1
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- RNA干扰抑制缺氧诱导因子1α表达对缺氧内皮细胞通透性的影响
- 目的 了解RNA干扰技术特异性抑制缺氧诱导因子1α (HIF-1 α)表达对缺氧血管内皮细胞通透性的影响. 方法 利用质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR构建针对人HIF-1α基因的RNA干扰表达载体.将VE细...
- 刘琛王裴李牧王凤君
- 缺氧血管内皮细胞Rho激酶信号通路活化与通透性的关系被引量：1
- 2012年
- 目的探讨缺氧时血管内皮细胞Rho激酶信号通路活化与通透性的关系。 方法 （1）将人血管内皮细胞株VE细胞接种于6孔板Transwell小室上，按随机数字表法分为对照组（未行缺氧处理）及缺氧1、2、3、6、12 h组（分别缺氧处理相应时间），每组5孔。用蛋白质印迹法检测细胞中Rho激酶Ⅰ、Ⅱ及肌球蛋白轻链磷酸酶靶亚单位1（MYPT1）、磷酸化MYPT1（ p-MYPT1）、肌球蛋白轻链（ MLC）、p-MLC的蛋白表达，计算p-MYPT1/MYPT1、p-MLC/MLC比值。（2）将VE细胞接种于24孔板Transwell小室上，按随机数字表法分为对照组（未行缺氧处理）与缺氧6h组（缺氧处理6h），每组5孔，用荧光分光光度计检测单层细胞通透性。对数据进行单因素方差分析或￡检验，多组间两
两比较采用Newman-Keuls法。 结果 （1）对照组及缺氧1、2、3、6、12 h组细胞Rho激酶I蛋白表达量分别为0. 63 ＋0. 14及0.36±0.08、1.25±0.21、1.98±0.16、1.49±0.38、0.79±0.24（F=36. 52，
P 〈0.01），其中缺氧2、3、6h组显著高于对照组【P值均小于0．01）。各组细胞Rho激酶Ⅱ蛋白表达量比较，差异具有统计学意义（F= 17. 84，P〈0.01），其中缺氧2h组为1.33±0.17，显著高于对照组的1.05 ＋0.04（P〈0.01）。对照组及缺氧1、2、3、6、12 h组细胞p-MYPT1/MYPT1比值分别为0. 62±0.13及0.62±0.11、0.65±0.10、1.06±0.23、1.37±0.16、1.91 ＋0.32（F=37.41,P〈0.01），其中缺氧3、6、12 h组显著高于对照组（P值均小于0.01）。对照组及缺氧1、2、3、6、12 h组细胞p-MLC/MLC比值分别为0.72±0.19及0.83±0.17、0.91±0.15、1.39±0.16、2.02±0.15、0.90±0. 25（F=36. 92，P〈0．01），其中缺氧3、6h组显著高于对照组（P值均小于0.01）。（2）缺氧6h组单层细胞通透性为36.1 ＋8．0，显著高于对照组的9.1 ＋2.1（z=7.30，P〈0.01）。 结论 Rho激酶信号通路活化可能参与了缺氧引起的血管内皮通
- 刘琛王裴王凤君
- 关键词：RHO相关激酶类缺氧通透性
- 缺氧诱导因子-1α介导的ROCK通路活化在缺氧后血管内皮高通透性发生中的作用
- 一、背景与目的 烧伤早期因多种因素引起血管内皮细胞损伤,导致细胞骨架肌动蛋白及细胞间连接等发生改变,细胞间隙增大,通透性增加,大量血浆样液体从血管渗出,血容量锐减及发生休克。血管通透性增加是烧伤休克的关键原因,而休克...
- 刘琛
- 关键词：缺氧缺氧诱导因子-1Α肌球蛋白轻链
- 文献传递
- RNA干扰抑制缺氧诱导因子1α表达对缺氧内皮细胞通透性的影响被引量：3
- 2010年
- 目的 了解RNA干扰技术特异性抑制缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达对缺氧血管内皮细胞通透性的影响.方法 利用质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR构建针对人HIF-1α基因的RNA干扰表达载体.将VE细胞分为正常对照组、缺氧组（置于含体积分数1%O_2的混合气体环境中缺氧处理6 h）、转染组、转染缺氧组（转染载体后再进行缺氧处理）.采用RT-PCR法检测正常对照组、转染组HIF-1αmRNA表达,采用蛋白质印迹法检测4组细胞HIF-1α蛋白表达.荧光分光光度计检测单层VE细胞的通透性.将上述缺氧处理替换为HIF-1α特异性诱导剂1 mmol/L二甲氧乙二酰甘氨酸（DMOG）,分为DMOG组、转染DMOG组、正常对照组、转染组,采用蛋白质印迹法观察各组HIF-1α蛋白表达.除通透性检测数据用荧光强度值表示外,其他数据用密度比值表示.实验结果进行组间两两t检验.结果 正常对照组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.765±0.069,转染组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.093±0.007,组间比较,差异有统计学意义（t=16.696,P〈0.05）.转染缺氧组细胞HIF-1α蛋白含量为0.591±0.029,显著低于缺氧组（2.612±0.259,t=13.415,P〈0.05）;转染DMOG组HIF-1α蛋白含量为0.566±0.008,显著低于DMOG组（3.243±0.551,t=6.975,P〈0.05）.缺氧组单层血管内皮细胞通透性（41.6±11.1）较正常对照组（9.4±1.5）显著升高（t=6.238,P〈0.05）,转染缺氧组单层血管内皮细胞通透性（13.3±4.5）显著低于缺氧组（t=5.430,P〈0.05）.结论 采用特异性针对HIF-1α基因的RNA干扰技术,能有效抑制内皮细胞HIF-1α表达,并明显抑制缺氧引起的血管内皮细胞通透性增强.
- 刘琛王裴李牧王凤君
- 关键词：缺氧诱导因子1,Α亚基RNA干扰内皮细胞缺氧通透性
- 肌球蛋白轻链激酶介导的肌球蛋白轻链磷酸化在严重烧伤早期肠粘膜屏障损害中的作用
- 目的:探讨肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)所介导的肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化与严重烧伤早期肠粘膜上皮屏障功能损害、细胞骨架F-肌动蛋...
- 陈传莉王裴刘依凌李牧刘琛刘行王凤君
- 文献传递
- 肌球蛋白轻链激酶介导的肌球蛋白轻链磷酸化在严重烧伤早期肠粘膜屏障损害中的作用
- 目的：探讨肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)所介导的肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化与严重烧伤早期肠粘膜上皮屏障功能损害、细胞骨架F-肌动蛋...
- 陈传莉王裴刘依凌李牧刘琛刘行王凤君
- 缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α活化影响的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的了解缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）活化的影响。方法将肠上皮细胞分为常氧处理（正常对照）、缺氧（设缺氧1、2、6、12、24h）及缺氧＋寡霉素处理（分别用浓度为5、10、20、40μg／mL寡霉素处理1h，再缺氧6h）。采用蛋白质印迹法检测HIF-1α蛋白表达，免疫荧光法观察HIF-1α向细胞核转位的情况。结果与正常对照（0．08±0．07）相比较，缺氧1h肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达（0．52±0．30）即显著升高（P〈0．05），6h达峰值（2．37±1．08，P〈0．05），同时HIF-1α向细胞核转位也明显增加。寡霉素呈剂量依赖性地抑制缺氧引起的肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达增加，用5、10、20及40μg／mL寡霉素处理的缺氧肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达量分别为1．62±0．96、1．48±0．56、1．08±0．36及0．58±0．11，均较单纯缺氧6h（2．67±1．38）显著降低（P〈0．05），HIF-1α向细胞核转位也被抑制。结论呼吸链抑制剂寡霉素可抑制缺氧肠上皮细胞HIF-1α活化，线粒体呼吸链可能在其发生机制中具有重要作用。
- 李牧王裴刘琛陈传莉王凤君
- 关键词：缺氧缺氧诱导因子1Α肠上皮细胞
